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反高效液相色谱法测定卷柏中穗花杉双黄酮含量的研究



全 文 :241《求医问药》下半月刊 Seek Medical And Ask The Medicine 2012 年第 10 卷 第 4 期
面的原因,剖宫产率大大提高,在有些医院甚至可高达30%~40%,随之而
来的手术并发症问题也越来越多,特别是对剖宫产术后再次妊娠的妇女
的分娩方式的选择已成为一个重要的研究课题。
现对我科收治的64例疤痕子宫再次妊娠分娩患者的临床资料进行
回顾性分析总结,旨在探讨疤痕子宫再次妊娠经阴道分娩的可行性及安
全性。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取我科2005年1月~2010年12月收治的再次妊娠产妇132例。其
中,64例剖宫产术后疤痕子宫再次妊娠作为治疗组,年龄在24~38岁,平
均31.2岁,孕周36~41周,平均37.8周;68例经阴道分娩后再次妊娠产妇
作为对照组,年龄25~39岁,平均31.4岁,孕周36~42周,平均37.9周。两
组患者在年龄、孕周等资料方面无显著性差异,具有可比性。
1.2 疤痕再次妊娠分娩采用阴道分娩的指征[2]
①既往剖宫产采用的是子宫下段横切口,无晚期产后出血、感染等
情况发生,B超提示子宫下段延续好,无缺陷;②此次妊娠分娩距上次剖
宫产接近两年以上时间;③既往剖宫产的手术指征已不存在,又未出现
新的剖宫产手术指征;④骨盆内外测量正常,估计胎儿体重3700g以下,
不影响阴道分娩;⑤患者知情同意阴道分娩。
1.3 分娩方法
患者入院后进行常规检查,产前测量骨盆,宫底高度,抬头大小及位
置,监测胎心,并预测胎儿体重计宫颈成熟度情况,以此决定是否可行阴
道分娩,排除具有剖宫产指征者,若宫口未开全者可使用催产素催产,手
术中密切观察羊水性质,胎心变化,尽快结束第一产程。胎儿分娩后常规
肌注10U催产素,帮助子宫收缩,减少出血,同时查探子宫腔是否出现破
裂,若出现破裂者紧急输液,输血,抗休克抢救,并行子宫切除术;若产后
出血达到200ml以上者则静脉滴注20u催产素,分娩结束后常规应用抗生
素抗感染。
1.4 观察指标
观察治疗组与对照组产妇经阴道分娩的成功率、产后婴儿APORG
评分及术后并发症发生率的问题。
1.5 统计学方法
数据处理采用SPSS11.0软件处理,其中计量资料采用t检验,计数
资料采用卡方检验,p〈0.05认为有统计学意义。
组别 n 阴道分娩成功率 婴儿APORG评分 术后并发症发生率
研究组 64 27(42.19%) 10.8±1.3 5(7.35%)
对照组 68 66(97.06%) 10.9±1.9 2(2.94%)
表1 两组产妇经阴道分娩其指标评分比较
两组比较,p〈0.05
卷柏为卷柏科卷柏的干燥全草,生于干旱岩石上,目前共发现约有700 种,分布于世界各地,我国约有50余种,已知药用的有25种[1]。卷柏属药用
反高效液相色谱法测定卷柏中穗花杉双黄酮含量的研究
杜震龙
(河北远征药业有限公司 河北 石家庄 050041)
【摘要】 目的 建立测定穗花杉双黄酮含量的反高效液相色谱法,并对常见的5种卷柏属药材中穗花杉双黄酮进行含量测定。 方法 采用RP-HPLC
法,色谱柱为Purospher star C18柱(250×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(65:35),流速0.8ml/min,柱温为30 ℃,检测波长为
337nm。 结果 测得穗花杉双黄酮的线性范围为0.05-0.60μg/ml,回归方程为Y=3853.510X+17.426 (r=0.9994,P=0.018),线性关系良好,加标回收
率为98.5%,且稳定性和重现性良好;测得5种常见卷柏中穗花杉双黄酮含量分别为0.338±0.012、0.068±0.003、0.155±0.019、0.238±0.021和0.453
±0.017g/ml。结论 本法准确、灵敏度较高,可用于卷柏类药物中穗花杉双黄酮含量的测定。
【关键词】 卷柏;穗花杉双黄酮;高压液相;色谱法
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】B 【文章编号】1672-2523( 012)04-0241-02
2 结果
两组产妇经阴道分娩后观察其指标如下表1。
3 讨论
随着围产医学、麻醉技术的发展,目前我国临床上使用剖宫产术的
几率越来越高,但同时也导致了疤痕子宫逐渐增多,因此,对剖宫产术后
再次妊娠的妇女的分娩方式的选择已成为一个重要的研究课题。传统观
点指出,既往有剖宫产的产妇若选择再次阴道分娩,将会加大其手术风
险率,尤其会促使子宫破裂及术后并发症发生。但随着临床医术的发展,
若严格掌握试产条件以及严密监测产程进展,疤痕子宫再次妊娠进行引
导试产的成功率将达到82.71%,疤痕子宫破裂的发生率也极低,据报道
仅为2.7‰~3.5‰[3 ]。
笔者在研究中发现,68例有剖宫产史产妇再次经阴道分娩过程中,
有32例产妇转剖宫产,主要是因为在分娩过程中发现有新的剖宫产指征
出现,如宫缩乏力等,其阴道分娩的成功率也远远低于无剖宫产史的产
妇;并且术后并发症的发生率也远远高于后者。因此,疤痕子宫再次妊娠
的产妇在选择阴道分娩前应严格掌握其手术指征,评估其风险系数,提
高手术的安全率。再者,在对两组产后婴儿的APORG进行评分时发现,
两组婴儿的评分无显著性差异,说明无论是否有剖宫产史,两者只要在
等同安全分娩情况下,仍能保证婴儿的安全。
为了进一步提高再次阴道分娩手术的成功率及安全性,应严格掌握
其指征,并做好术前充分的准备工作,如紧急输血,抢救等,并严密监护
宫缩情况,监测胎心,阴道流血,羊水性状等。在试产过程中,应放宽其剖
宫产手术的指征,一旦发现有其征兆应立即转为剖宫产手术,尽量缩短
第二产程,必要时采用阴道助产,产后要加强宫缩,应用抗生素抗感染,
必要时探查宫腔。
综上所述,疤痕子宫产妇再次分娩时若具备阴道分娩条件并自愿接
受,临场医师在严格评估其手术风险后,可以采用阴道分娩的方式分娩。
参考文献
[1]应豪,段涛.剖宫产后再次妊娠的流行病学调查.实用妇产科杂志,
2004,20:26.
[2]颜立新.疤痕子宫再次妊娠分娩60例临床分析.中国民族民间医药.
2010:122.
[3]Jeanne-Marie Guise.Vaginal delivery after caesarean section.BMJ,
2004,329(7462):359.
242 《求医问药》下半月刊Seek Medical And Ask The Medicine 2012 年第 10 卷 第 4 期
植物中主要成分是双黄酮,其中包括由芹菜素、穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮
和异柳杉素等活性物质,广泛用于经闭痛经、癜瘕痞块、跌打损伤、化淤止
血、吐血、崩漏、便血、脱肛等治疗中[2]。其中以穗花杉双黄酮是卷柏的代表
性、特征性化学成分,具有广泛的药理活性,研究表明穗花杉双黄酮及其衍
生物可作为一类新的天然的人组织蛋白酶抑制剂,具有神经保护作用,且
其在卷柏中的含量远高于其他中草药[3]。但《中国药典》质量标准中缺乏对
常见卷柏中穗花杉双黄酮含量的测定,本文旨在建立测定穗花杉双黄酮含
量的反高效液相色谱法,并对常见的5种卷柏属药材中穗花杉双黄酮进行
含量测定,为有效控制卷柏药材及其制剂质量提供了科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料
仪器:Agilent110高效液相色谱检测仪(二极管阵列检测器);超纯水
器(960002型,美国Labconco公司);分析天平(沈阳龙腾电子有限公司);超
声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司,KQ-250型);奥立龙828酸度计(美
国奥立龙公司)。
试剂:穗花杉双黄酮标准品和测定样品:江南卷柏、簿叶卷柏、深绿卷
柏、单籽卷柏、兖州卷柏)购置于中国药品生物制品检定所;甲醇(色谱纯,山
东禹王实业有限公司化工分公司);磷酸(优级纯,天津科密欧化学试剂有
限公司);水为重蒸水。
1.2 方法
1.2.1 色谱条件
色谱柱为PurospherstarC18柱(250×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-
0.1%磷酸水溶液(65:35);超声波脱气;流速设定为0.8ml/min;柱温设定
为30℃;检测波长为337nm;理论塔板数按穗花杉双黄酮峰计算不低于
6000。
1.2.2 对照品溶液的配置
准确称取穗花杉双黄酮准品10.3mg,置于50ml容量瓶中,用甲醇溶解
并稀释定容至刻度,涡旋振荡充分溶解,此溶液为0.206g/L的穗花杉双黄
酮准储备液,放入4℃冰箱中备用。
1.2.3 测试样品的制备
将上述5种样品粉碎,过筛后精确称取1g,置于索氏提取器中,以70ml
氯仿回流脱色至无色后过滤,残渣加入70ml甲醇,充分溶解后加热回流提
取至溶液呈无色,过滤,将提取液蒸干,残渣复加甲醇溶解并定容至50ml。
1.3 统计学方法
所有数据分析采用SPSS13.0进行统计学分析,均数以(`x ±s)表示,以
α=0.05为检验水准。
2 结果
2.1 方法专属性考察
流动相未干扰穗花杉双黄酮出峰,出峰时间为19.83±0.14min,见图
1-2。
2.2 标准曲线和线性范围
精密吸取穗花杉双黄酮标准品3、6、9、12和15μl依次进样,每个进样
5次,以穗花杉双黄酮峰面积(Y)对浓度(X)进行线性回归,得标准曲线方
程:Y=3853.510X+17.426(r=0.9994,P=0.018),线性范围为0.05-0.60
μg。
2.3 精密度与回收率实验
精密吸取同一标准品溶液15μl,重复进样5次,分别测定峰面积,计算
RSD%。精密称取已知含量的样品约1.5g,共6份,精密吸取并加入0.2mg/
ml的穗花杉双黄酮溶液1.0ml,按供试液的处理方法,制备溶液。分别量取
进样15μl,计算加标回收率。经测定RSD%=4.3%,回收率为98.5%,表明本
方法准确,可靠,精密度高。
2.4 稳定性测定
取同一浓度标准品溶液,每隔2h进样一次,共5次,测定峰面积,计算
RSD%,结果表明RSD=0.15%,稳定性良好。
2.5 样品浓度检测
5种卷柏样品分别称取相同重量,按照项目“1.2.3”程序制备溶液,并
按“1.2.1”色谱条件进样,每次进样10μl,每个样品进样5次,测定样品中穗
花杉双黄酮浓度,见表1。
3 讨论
卷柏类药物临床应用广泛,具有多种药理学作用,研究表明其主要活
性物质穗花杉双黄酮具有组织蛋白酶抑制剂作用,可对氧化和β淀粉状蛋
白质引起的神经细胞毒性有较强的保护作用,且可以对局部脑组织缺血性
抽搐和阿尔兹海默症等神经退化性病变具有一定的治疗效果[3],因此受到
医药领域的广泛关注。
《中国药典》对卷柏类药物中穗花杉双黄酮的作用等虽然有明确记载,
但却缺乏对常见卷柏中穗花杉双黄酮含量的测定标准,极大程度上限制了
临床药物质量的检验工作。液相色谱法在穗花杉双黄酮的含量检测方面已
有应用,检测效果比较好,但部分研究表明梯度洗脱有程序繁琐,且耗时长
等缺点,因此,本研究采用RP-HPLC的方法,以甲醇-0.1%磷酸水溶液作
为流动相,结果表明测得穗花杉双黄酮的线性范围为0.05-0.60μg/ml,
回归方程为Y=3853.510X+17.426(r=0.9994,P=0.018),线性关系良好,
加标回收率为98.5%,且稳定性和重现性良好,未出现部分报道所叙述的峰
形拖尾严,出峰良好,掩盖了杂质和流动相出峰。
总之,本法准确、灵敏度较高,可用于卷柏类药物中穗花杉双黄酮含量
的测定。且不同卷柏之间的穗花杉双黄酮含量差别较大,可利用本方法作
为进一步评价测定的参考。
参考文献
[1]于健东,胡军影,程显隆,等.卷柏药材质量标准研究[J].中国药事,
2008,22(8):661-663.
[2]戴忠,王钢力,张尊建,等.卷柏属药用植物的成分分析[C].2001中国药
学会学术年会论文集.上册.北京:2001,64:167-167.
[3]龙红萍,徐康平,李炜,等.不同生长季节兖州卷柏中穗花杉双黄酮的
含量变化[J].湖南师范大学学报(医学版),2011,8( ):76-78.
参考文献
杜震龙(1976.3-)男汉籍贯:吉林省磐石市,1997年于沈阳药科大学本科毕
业,医药工程,工程师,主要从事物制剂及质量标准研究工作。
图1 穗花杉双黄酮准品HPLC色谱图
图2 待测样品中穗花杉双黄酮HPLC色谱图
表1 5种卷柏样品中穗花杉双黄酮浓度测定结果(n=5,`x ±s)