全 文 ：①喜树果粗提液抗单纯疱疹病毒实验研究
李闻文 , 阎祖炜 , 施　凯
(中南大学湘雅医学院临床微生物学免疫学教研室 , 长沙 410078)
[ 摘要] 　目的:用药物喜树果提取液作用于单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2), 了解药物抗病毒作用。 方法:用不同浓
度的药物与病毒混合后在温箱中作用 4h , 或药物与病毒混合后 4℃过夜 ,吸附于单层 BGM 细胞 1.5h , 培养 7d ,在显微
镜下观察结果。结果:实验组 BGM 细胞未出现病变 ,对照组细胞出现明显病变。结论:喜树果有较强抗 HSV-2作用。
[ 关键词] 　喜树果;　单纯疱疹;　细胞病变效应＊;　BGM 细胞
[ 中图分类号] 　R752.11　　　[文献标识码] 　A　　　[ 文章编号] 　1000-5625(2002)02-0121-02
Experimental study on the viricidal effect of rough extracts of
camptothecine fruit on herpes simplex virus-2 in Vitro
LI Wen-wen , YAN Zu-wei , SHI Kai
(Department of Clinical Microbiology and Immunology , Xiangya School of Medicine , Central South University , Changsha 410078 , China)
Abstract:　Objective　To study the viricidal effect of rough extracts of camptothecine fruit on herpes sim-
plex virus-2(HSV-2).Methods　Rough extracts with different concentrations were mixed with HSV-2.The
mixture was incubated at 37℃for 4 h or at 4℃ overnight , adsorbed on monolayer cells of BGM for 1.5 h , and
cultured at 37℃for 7 d.Results　The BGM of the test group did not reveal cytopathic effects(CPE), while the
control group showed CPE under microscope observation.Concluson　Camptothecine has a strong viricidal effect
on HSV-2.
Key words:　camptothecine;　herpes simplex;　cytopathic effect＊;　BGM cells
[ Bull HunanMed Univ , 2002 ,27(2):0121-02]
　　单纯疱疹病毒 Ⅱ型(herpes simplex virus-2 , HSV-
2)在人群中感染较为普遍。孕妇生殖器感染可引起
早产 、流产 、死胎 、胎儿畸形以及智力低下等 ,并与子
宫颈癌的发生密切相关 。国外抗 HSV植物药的实
验研究始于六十年代 。国内亦于六十年代开始以组
织细胞培养技术的研究为主 。近 500种中草药的抗
HSV研究亦有报道[ 1 ～ 2] ,其中喜树果等有抗 HSV-1
作用[ 1] ,但单味中草药抗 HSV-2的实验研究未见报
道。本研究观察喜树果粗提液对HSV-2的杀灭和抑
制作用 ,并以病毒唑作为对照 。
1　材料与方法
1.1　材料　摘取喜树成熟果实 ,烘干去皮 , 10g 加
300ml蒸馏水煎至 140ml ,隔水加热浓缩至 10ml ,54.
04kPa , 30min 灭菌备用 。HSV-2 来自安徽医科大学
微生物学教研室 , BGM 细胞来自湖南省卫生防
疫站 。
1.2　方法
1.2.1　细胞培养　用中试管将 BGM细胞培养成单
层 ,培养基用MEM(minimal essential medium),营养液
含 15%小牛血清 ,维持液含5%小牛血清 。
1.2.2　药物的毒力试验　喜树果 、病毒唑对 BGM
细胞的毒力试验 ,采用两种方法:①把培养成单层的
BGM细胞管倒去上清液 ,加入不同浓度的药物作用
1.5h ,用 Hanks 液洗涤 3 次 ,加维持液 ,观察细胞病
变。 ②把不同浓度药物加在维持液中持续作用[ 3] 。
1.2.3　药物抗病毒试验 　用 100 个 TCID50(tissue
cell infection median dose)的 HSV-2吸附于单层 BGM
121
湖南医科大学学报
BULL HUNAN MED UNIV
　2002 , 27(2)
①收稿日期:2001-05-15　作者简介:李闻文(1957-),男 ,湖南益阳人 ,副教授 ,主要从事微生物学免疫学教学科研。
细胞 1.5h ,用 Hanks 液洗涤 3次 ,加喜树果提取液
37 ℃作用 1.5h(Ⅰ), 或该药液与病毒混合后吸
附1.5h ,用 Hanks液洗涤 3次 ,换 MEM 维持液(Ⅱ);
用不同浓度的喜树果提取液与HSV-2混合于 37℃作
用4h ,再吸附于单层 BGM 细胞 1.5h ,洗涤3次 ,加维
持液(Ⅲ);喜树果提取液与 HSV-2混合后 4℃过夜 ,
再于 37℃吸附 1.5h ,洗涤3次 ,加维持液(IV)。以细
胞病变效应(cytopathic effect , CPE)为观察病毒增殖
依据 ,如果有CPE ,则细胞变圆 ,融合 ,断层 ,脱落;同
时作正常细胞对照 ,病毒对照 ,药物对照;37℃,培养
7d后在光学显微镜下观察结果 。
1.2.4　结果判断　-:表示细胞无病变 ,即无病毒
生长繁殖;+:表示 25%的细胞有病变 ,即有病毒生
长繁殖;±:表示细胞有病变 ,但病变程度不足+,
培养延长 4 d细胞病变为+;++:表示有50%细胞
有病变;+++:表示 75%的细胞有病变;+++
+:表示全部细胞病变。
2　结　　果
2.1药物毒力试验结果　正常 BGM细胞能耐受稀释
度为 1:10喜树果和病毒唑 ,在小于或等于 1:5稀释
中不能生长(表 1)。
表 1　喜树果 、病毒唑对 BGM 细胞的毒力试验
药物浓度
1:2 1:5 1:10 1:100 1:1000
喜树果 全部死亡 一半死亡 基本正常 完全正常 完全正常
病毒唑 全部死亡 一半死亡 基本正常 完全正常 完全正常
表 2　喜树果对 HSV-2 的作用
药物浓度
1:10 1:100 1:1000 1:10 000
Ⅰ - + ++ ++++
Ⅱ - + + ++
Ⅲ - ± + ++
Ⅳ - - - ±
病毒唑对照 - - - +
病毒对照 ++++ ++++ ++++ ++++
空白对照 - - - -
2.2　药物抗病毒试验结果 　喜树果有较强抗
HSV-2作用 ,根据用药方法不同 ,药物效价亦不同 ,
在Ⅰ , Ⅱ中 ,喜树果为 1:10对 HSV-2有杀灭作用;而
Ⅲ ,喜树果为 1:100 对 HSV-2 有杀灭作用;Ⅳ则 1:
1000喜树果对HSV-2有杀灭作用;但 1:10 000喜树
果在 Ⅰ ～ Ⅳ种方法中对 HSV-2均无作用;对照组病
毒唑对HSV-2有杀灭作用;在病毒对照组病毒生长 ,
CPE均达++++,空白对照组细胞生长良好(表 2)。
3　讨　　论
喜树果系琪科植物喜树(Comptotheca Acuminata)
的果实 ,主要成分是喜树碱 。碘苷 ,阿糖腺苷 ,无环
鸟苷等核苷类药物已用于 HSV-2感染的临床治疗 ,
但多数有毒副作用[ 3～ 5] 。本研究结果表明喜树果有
杀灭HSV-2的作用 。近年来研究发现 ,HSV-2与宫
颈癌发生有密切关系 ,若能将喜树果的有效成分提
取精制应用于临床 ,对控制HSV-2感染 ,降低子宫颈
癌的发生率具有重要意义 。六十年代研究发现喜树
碱在体外对Hela细胞和 L1210细胞及啮齿类动物显
示较强抗癌活性[ 6] 。喜树果兼有抗 HSV-2及抗子宫
颈癌的作用 ,在临床上用喜树果治疗银屑病有一定
的疗效[ 7] 。虽然喜树果只对细胞外病毒有杀灭作
用 ,但通过机体的免疫调节 ,可望对细胞内生长繁殖
的病毒有杀灭作用 ,如热毒清具有抗炎 、解毒 、抗病
毒 、提高机体免疫功能 、抑菌等作用 ,经细胞培养及
动物实验证明该药物有效抑制流感病毒 、RSV 和
HSV-1病毒[ 8 ～ 10] 。本研究结果为喜树果抗 HSV-2的
临床应用提供了实验依据 。
参考文献:
[ 1] 　陈祖基 ,宋洁贞 ,张勇.中草药抗单纯疱疹病毒的实验研究[ J] .
中医杂志 , 1982 , 21(2), 153-155.
[ 2] 　郑民实.472种草药抗单纯疱疹病毒的实验研究[ J] .中西医结
合杂志 , 1990 , 9(1):39-41.
[ 3] 　郑民实 ,陆仲毅.芒果甙与异芒果甙的抗单纯疱疹病毒作用
[ J] .中国药理学报 ,1989 , 10(1):85-90.
[ 4] 　郑民实 ,施仲贤 ,陈瑞琪 ,等.中草药在组织培养内的抗病毒实
验研究[ J] .药学报道 ,1981 , 16(7):388-390.
[ 5] 　王志玉 ,韩世杰.异丙肌苷 、环胞苷对 HSV 的抑制作用[ J] .山
东医学院学报 ,1985 , 23(4):26-30.
[ 6] 　Beppino C, Giovanella John S , Stehlin Monroe E , et al.DNA topoi-
somerase I-targeted chemotheragy of human colon cancer in xenograf ts
[ J] .Science ,1989 , 246:1046-1048.
[ 7] 　林熙然 ,黄数.喜树酊治疗银屑病的临床观察及实验研究[ J] .
中华皮肤科杂志 ,1982 , 15(4):210-212.
[ 8] 　刘庄 ,傅希贤 ,张乃临 , 等.复方华蟾素口服液抗乙型肝炎病毒
体外实验研究[ J] .中国中西医结合杂志 , 1996, 16(12):738-
740.
[ 9] 　李双杰 ,张宝林 ,邓晖 ,等.苦瓜蛋白体外抗柯萨奇 B3病毒感染
[ J] .湖南医科大学学报 , 1999, 24(6):583-584.
[ 10] 　邢玮,闻良珍 ,董继华 ,等.热毒清抗人巨细胞病毒作用的临床
及实验研究[ J] .中国中西医结合杂志 , 2000 , 20(4):245-247.
(本文编辑　陈扬宝)
122 湖南医科大学学报 , 2002 ,27(2)