全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
表水溶性和挥发油成分，能比较全面的对提取工艺
进行评价［4］。
预试验 TLC［5］证明，药材水提液中均不含桂皮
醛成分，油水混合物中均含桂皮醛成分。故用样品
的油水混合物来测定桂皮醛含量。桂皮醛为芳香性
易挥发成分，提取后应及时测定成分，不过本试验样
品较多，故经较长时间才测定含量，在等待期间，样
品用磨口瓶存放，在冰箱冷藏，且各样品等待时间基
本相同，可作为相对含量测定进行比较。
［参考文献］
［1］ 刘亚男，樊金伟 ． 巴布剂的研究现状及发展前景［J］．
黑龙江医药，2010，25(3) :89．
［2］ 林佳，徐丽珍，刘江云，等 ． 桂枝中桂皮醛，肉桂酸的含
量与 分 布 研 究 ［J］． 中 国 药 学 杂 志，2005，40
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［3］ 刘光斌，毛和平，姜芳宁，等 ． HPLC 法测定和胃散中桂
皮醛的含量［J］． 中国实验方剂学杂志，2010，16
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透性实验［J］．中国实验方剂学杂志，2010，16(7) :25．
［5］ 何姣，张雅惠，孙文基 ． 肉桂、桂枝薄层鉴别方法之改
进初探［J］．中国药品标准，2008，9(1) :35．
［责任编辑 仝燕］
［收稿日期］ 20120424(003)
［通讯作者］ * 谢郁峰，本科，讲师，从事天然药物研究，Tel:020-39352140，E-mail:phytochemistry@ 163. com
响应面分析法优化藤茶中二氢杨梅素的提取工艺
谢郁峰 * ，陈卓瀚，吕华冲
(广东药学院药科学院药物化学系，广州 510006)
［摘要］ 目的:优选藤茶中二氢杨梅素的提取工艺。方法:以二氢杨梅素提取率为考察指标，在单因素试验基础上，选取
乙醇体积分数、料液比、提取时间为自变量，二氢杨梅素提取率为响应值，采用三因素三水平的响应面分析法优选二氢杨梅素
的提取工艺条件。结果:最佳提取工艺条件为 17 倍量 81% 乙醇回流提取 95 min。在此条件下，二氢杨梅素提取率可达
9. 58%，与理论值 9. 72%仅相差 0. 14%。结论:采用响应面法优选的二氢杨梅素提取工艺是可行的。
［关键词］ 响应面;藤茶;二氢杨梅素;提取工艺
［中图分类号］ R283. 6 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)17-0046-04
Optimization of Extraction Technology for Dihydromyricetin from
Ampelopsis grossedentata by Response Surface Analysis Methodology
XIE Yu-feng* ，CHEN Zhuo-han，LV Hua-chong
(Department of Pharmaceutical Chemistry，College of Pharmacy，Guangdong Pharmaceutical
University，Guangzhou 510006，China)
［Abstract］ Objective:To optimize extraction process of dihydromyricetin from Ampelopsis grossedentata
by response surface methodology． Method:With extraction ratio of dihydromyricetin as index，based on single
factor test， the concentration of ethanol， liquid-solid ratio and extraction time were selected as independent
variables and extraction rate of dihydromyricetin as response value，response surface methodology with three-factors
and three-levels was carried out for optimizing extraction process of dihydromyricetin from A． grossedentata．
Result:Optimum extraction conditions of dihydromyricetin were as followed: refluxing extracted 95 min with 17
times the amount of 81% ethanol． Under these conditions， extraction ratio of dihydromyricetin was 9. 58%，
relative error in comparison with the predicted one was 0. 14% ． Conclusion: This optimized technology was
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第 18 卷第 17 期
2012 年 9 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 17
Sep．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.17.026
reliable，it showed that was feasible for optimizing extraction technology of dihydromyricetin by response surface
methodology．
［Key words］ response surface;Ampelopsis grossedentata;dihydromyricetin;extraction technology
藤茶主要分布于广东、云南、贵州等省区［1］，其
味甘、淡，性凉，具有清热解毒、消炎、镇痛之功效，主
治感冒风热、黄疸型肝炎、咽喉肿痛等［2］。其主要
有效成分是黄酮类化合物，其中以二氢杨梅素
(DMY)含量最高［3］。现代药理研究表明，二氢杨梅
素具有保肝、抗菌、抗肿瘤、降血糖、降血脂等作
用［4-5］。本研究以醇提法提取藤茶中的二氢杨梅
素，在单因素考察的基础上，利用响应面分析法对各
主要提取工艺条件进行优化，为二氢杨梅素的深入
开发及应用提供试验依据。
1 材料
岛津 LC-10ATVP 型高效液相色谱系统(日本岛
津仪器有限公司) ，Phenomenex 00G-4252-E0 型 C18
色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，AUW220D 型电
子天平(日本岛津仪器有限公司) ，FW100 型高速万
能粉 碎 机 (天 津 市 泰 斯 特 仪 器 有 限 公 司) ，
LABOROTA4000 型旋转蒸发仪(德国 Heidolph)。
藤茶购自广东连州，经本校中药鉴定教研室刘
基柱 副 教 授 鉴 定 为 葡 萄 科 植 物 显 齿 蛇 葡 萄
Ampelopsis grossedentata (Hand-Mazz)W． T． Wang
的茎叶。二氢杨梅素对照品(成都曼斯特生物科技
有限公司，批号 MUSG-10122901，纯度≥98%) ，甲
醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 二氢杨梅素含量测定
2. 1. 1 色谱条件［6］ Phenomenex 00G-4252-E0 型
C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相甲醇-
水-磷酸(27∶ 73 ∶ 0. 1) ，流速 1. 0 mL·min － 1，进样量
10 μL，柱温 25 ℃，检测波长 290 nm。
2. 1. 2 对照品溶液的制备 精密称取二氢杨梅素
对照品 10. 0 mg，加甲醇溶解，定容至 10 mL。精密
吸取 1 mL 溶液，加甲醇定容至 10 mL，配成 0. 100
g·L － 1的对照品溶液，精密吸取 0. 2，0. 4，0. 6，0. 8，
1. 0 mL，分别置于 1 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，
摇匀。
2. 1. 3 线性关系考察 分别精密吸取上述系列对
照品溶液 10 μL，注入高效液相色谱仪，记录峰面
积，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归
方程为 Y = 5. 70 × 107X + 3. 49 × 103(r = 0. 999 1) ，
二氢杨梅素在 0. 020 ～ 0. 100 g·L － 1线性关系良好。
2. 1. 4 样品的提取与测定 分别称取粉碎后并过
20 目筛的干燥藤茶粉末 5 g，按中心组合试验设计
原理设计试验方案，用乙醇进行提取，回收醇提液至
无醇味，用水进行重结晶，得浅黄色针晶。精密称取
该结晶 20. 0 mg，加甲醇溶解，定容至 100 mL，过
0. 45 μm 滤膜，即得供试品溶液。按 2. 1. 1 项下测
定方法测定峰面积，计算二氢杨梅素的提取率。
二氢杨梅素提取率 =
干燥提取物质量 ×二氢杨梅素纯度
藤茶粉末质量
× 100%
2. 2 单因素试验考察
2. 2. 1 乙醇体积分数考察 准确称取藤茶粉末 5
份，每份 5 g，固定液料比 20 mL·g － 1，提取时间 60
min，提取 1 次，分别选取体积分数 60%，70%，
80%，90%，100%的乙醇溶液，按 2. 1. 4 项下方法进
行试验，二氢杨梅素提取率分别 5. 39%，6. 12%，
6. 92%，6. 49%，5. 71%。结果表明提取率先随乙醇
体积分数的增加而升高，80%乙醇时最高，之后提取
率开始下降。
2. 2. 2 液料比考察 准确称取藤茶粉末 5 份，每份
5 g，固定乙醇体积分数 80%，提取时间 60 min，提取
1 次，分别加入 5，10，15，20，25 倍量乙醇，按 2. 1. 4
项下方法进行试验，二氢杨梅素提取率分别为
4. 43%，6. 14%，6. 84%，6. 22%，5. 83%。结果表明
当液料比 15 mL·g － 1时，二氢杨梅素的提取率最高。
2. 2. 3 提取时间考察 准确称取藤茶粉末 5 份，每
份 5 g，固定乙醇体积分数 80%，液料比 15 mL·g － 1，
提取 1 次，提取时间分别为 30，60，90，120，150 min，
按 2. 1. 4 项下方法进行试验，二氢杨梅素提取率分
别为 5. 83%，6. 92%，8. 12%，7. 42%，7. 12%。结
果表明当提取时间为 90 min 时，二氢杨梅素的提取
率最高。
2. 2. 4 提取次数选择 精密称取藤茶粉末 5 份，每
份 5 g，固定乙醇体积分数 80%，液料比 15 mL·g － 1，
提取 90 min，分别提取 1，2，3，4，5 次，按 2. 1. 4 项下
方法进行试验，二氢杨梅素提取率分别为 6. 03%，
7. 88%，7. 94%，7. 89%，7. 86%。结果表明当提取
次数 ＞ 2 次时，二氢杨梅素的提取率趋于平稳，几乎
不再增加。故本工艺确定最佳提取次数为 2 次，不
再进行优化。
·74·
谢郁峰，等:响应面分析法优化藤茶中二氢杨梅素的提取工艺
2. 3 响应面优化试验
2. 3. 1 试验设计 根据中心组合设计原理，综合单
因素考察结果，选取乙醇体积分数、液料比、提取时
间三因素为自变量，二氢杨梅素提取率为响应值，设
计三因素三水平共 17 个试验点的响应面分析试验，
其中 12 个析因试验，5 个中心试验，并根据单因素
试验结果确定零水平和波动区，因素水平见表 1。
表 1 藤茶中二氢杨梅素提取工艺优选响应面分析法因素水平
水平
X1 乙醇体积
分数 /%
X2 液料比
/mL·g － 1
X3 提取时间
/min
－ 1 70 10 60
0 80 15 90
1 90 20 120
对乙醇体积分数、提取时间、液料比作如下变换
X1 =(n － 80)/10，X2 =(z － 15)/5，X3 =(t － 90)/30，
以 3 次试验所得二氢杨梅素提取率的平均值为响应
值(Y) ，试验设计与结果见表 2，方差分析见表 3。
将表 2 中数据用软件 Design-Expert Version
8. 0. 5 进行多元回归分析，由于各因素对响应值的
影响并不是简单的线性关系，故试验因素对响应值
影响的回归方程为 Y = 9. 35 + 0. 25X1 + 0. 045X2 +
0. 11X3 － 0. 097X1X2 + 0. 17X1X3 + 0. 062X2X3 －
0. 25X21 － 0. 27X
2
2 － 0. 43X
2
3。
回归方程中各因素对指标(响应值)影响的显
著性，可通过 F 检验来判定，即 P 越小，相应因素的
显著程度越高。由表 3 结果可知，各因素中一次项
乙醇体积分数 X1 对二氢杨梅素提取率影响高度显
著，而二次项中 X21，X
2
2，X
2
3 对二氢杨梅素提取率影
响高度显著，回归方程也是高度显著，相关系数
R2 = 2. 275 /2. 363 = 0. 962 8，即说明响应值(二氢
杨梅素提取率)的变化有 96. 28% 是来源于所选的
因素，即乙醇体积分数、提取时间和液料比。相关系
数 R2 同时说明模型的拟合度较好。此外，本试验的
回归方程失拟项检测 P = 0. 150 3 ＞ 0. 05，说明影响
不显著;回归方程显著性检测 P = 0. 000 3 ＜ 0. 01，
说明影响高度显著。综上所述，应用响应曲面法优
化藤茶中二氢杨梅素的提取工艺是可行的，故可利
用回归方程确定最佳提取工艺条件。
2. 3. 2 响应曲面分析 提取过程中，各因素对二氢
杨梅素提取率影响的二维等高线和三维响应曲面见
图 1 ～ 3。
由图 1 可知，随液料比增大，二氢杨梅素提取率
增加后减小;在提取时间确定的情况下，二氢杨梅素
表 2 藤茶中二氢杨梅素提取工艺优选响应面分析法安排
No． X1 X2 X3 Y /%
1 1 0 － 1 8. 57
2 － 1 － 1 0 8. 32
3 － 1 0 1 8. 44
4 － 1 1 0 8. 69
5 0 0 0 9. 22
6 0 1 － 1 8. 47
7 0 1 1 8. 84
8 0 0 0 9. 42
9 1 － 1 0 9. 16
10 0 0 0 9. 41
11 0 0 0 9. 38
12 0 － 1 1 8. 71
13 0 － 1 － 1 8. 59
14 0 0 0 9. 34
15 1 1 0 9. 14
16 1 0 1 9. 11
17 － 1 0 － 1 8. 56
表 3 二氢杨梅素提取率方差分析
方差来源 f SS MS F P
X1 1 0. 485 0. 485 38. 635 0. 000 4
X2 1 0. 016 0. 016 1. 290 0. 293 4
X3 1 0. 104 0. 103513 8. 244 0. 024 0
X1 X2 1 0. 038 0. 038 3. 029 0. 125 4
X1 X3 1 0. 109 0. 109 8. 673 0. 021 6
X2 X3 1 0. 016 0. 016 1. 244 0. 301 5
X21 1 0. 273 0. 273 21. 719 0. 002 3
X22 1 0. 312 0. 312 24. 809 0. 001 6
X23 1 0. 777 0. 777 61. 858 0. 000 1
模型 9 2. 275 0. 253 20. 134 0. 000 3
残差 7 0． 088 0． 013
失拟项 3 0． 062 0． 021 3． 119 0． 150 3
总离差 16 2. 363
注:P ＜ 0. 05 表示影响显著;P ＜ 0. 01 表示影响高度显著。
在乙醇体积分数 82%左右，液料比 16 mL·g － 1左右
的区域内提取率较高。由图 2 可知，提取时间的影
响相对于乙醇体积分数更为显著。随乙醇体积分数
增大，二氢杨梅素提取率增加;随着提取时间增加，
二氢杨梅素提取率是先增后减，提取时间增长，二氢
杨梅素提取率反而降低，可能由于提取时间过长，对
二氢杨梅素的结构有所破坏。当液料比确定时，提
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第 18 卷第 17 期
2012 年 9 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 17
Sep．，2012
图 1 液料比和乙醇体积分数对二氢
杨梅素提取率的影响
图 2 提取时间和乙醇体积分数对二氢杨梅素提取率的影响
取时间 90 min 左右和乙醇体积分数 80%左右的区
域内二氢杨梅素较高。由图 3 可知，当液料比为 15
mL·g － 1左右，提取时间为 90 min 附近时，二氢杨梅
素提取率达到最高。
2. 3. 3 提取工艺条件优化 为确定二氢杨梅素的
最佳提取工艺条件。对回归方程取一阶偏导数且令
其 Y = 0，通过解方程得到 3 个因素最佳水平值分别
为 X1 = 0. 044，X2 = 0. 310 5，X3 = 0. 117 2，通过变换
公式的转换可得提取工艺的最佳条件为乙醇体积分
数 80. 5%，液料比 16. 5 mL·g － 1，提取时间 93. 6
min，为方便工业的生产，将 3 个因素调整为乙醇体
积分数 81%，液料比 17 mL·g － 1，提取时间 95 min，
图 3 提取时间和液料比对二氢杨梅素提取率的影响
在此修正条件下，二氢杨梅素的理 论 提 取 率
9. 72%。根据修正的试验条件重复试验 3 次，得二
氢杨梅素实际平均提取率 9. 58%，即比理论提取率
少 0. 14%，说明方程可较好的预测二氢杨梅素的理
论提取率。
3 讨论
本研究通过单因素实验和 3 因素 3 水平响应面
法试验，建立了二氢杨梅素提取率与各影响因素之
间的二次多项式模型，通过该模型不仅可以预测二
氢杨梅素理论提取率，还能确定二氢杨梅素的最佳
提取工艺参数，在优选的工艺条件下二氢杨梅素提
取率较高，其实际提取率可达到 9. 58%。
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［责任编辑 仝燕］
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谢郁峰，等:响应面分析法优化藤茶中二氢杨梅素的提取工艺