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于第Ⅱ组(P ＜ 0． 01) ，说明药物对配子生殖阶段也发
挥了作用，这与 R． B． Willlams［8］的研究结果一致，其
对配子生殖的作用机制尚需进一步研究。虽然配子
生殖阶段处于内生性发育的末期，不是球虫的主要致
病阶段，但未孢子化的卵囊不能造成新的感染，大大
减少了具有感染能力的球虫群落，降低了新鸡群感染
的强度和风险性。
参考文献:
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1998．
［2］ 王天奇，张玲，董发明，等． 鸡球虫的耐药性及解决措施［J］． 云
南畜牧兽医，2001(4) :17．
［3］ 索勋，崔凤山，沈建忠，等．癸氧喹酯预防人工感染肉仔鸡球虫
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tenella疗效的研究［J］．中国农学通报，2009，25(4) :6 － 9．
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［7］ 明道绪 ． 生物统计附试验设计［M］． 北京:中国农业出版社，
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［8］ WILLLAMS R B． The mode of action of anticoccidial quinolones
(6 － Decyloxy － 4 － hydroxyq － uinoline － 3 － carboxylates) in
Chickens［J］． Int J Parasitol，1997，27:101 － 111． (011)
收稿日期:2012-07-26;修回日期:2012-08-07
作者简介:张 平(1982 －)，女，讲师 /兽医师，硕士研究生，研
究方向为动物疾病的防治，zhangping5588@ 126． com．
复方土槿皮霜剂体外抗真菌活性研究
张 平1，向俊琳2
(1．成都农业科技职业学院，成都 611130;2．四川畜牧科学研究院，成都 610066)
中图分类号:S852． 61 文献标识码:B 文章编号:1004-7034(2013)04 － 0128 － 03
动物皮肤真菌病呈世界性流行。国外学者对意
大利西北的一个兔场进行真菌感染情况研究，结果
发现由须癣毛癣菌引起的兔皮肤真菌病的发病率高
达 50% ～70%。国内不少学者也对兔皮肤真菌病的
流行情况进行了不同程度的调查。邢兰君［1］对成都
周边的新津、雅安、邛崃、新北川等地大小兔养殖场进
行调查研究，结果发现在四川省大范围内引起兔皮肤
真菌病的主要病原为须癣毛癣菌。李德昊等［2］对雅
安市和绵阳市的兔养殖场进行了调查研究，首次发现
引起兔皮肤真菌病的病原除须癣毛癣菌外还有红色
毛癣菌。
复方土槿皮霜剂是由四川畜牧科学研究院养兔
研究所根据多年的临床实际工作经验总结出来的，处
方主要由君药土槿皮和臣药黄柏等按照一定配比制
成，本试验从科学角度验证该药物的体外抑菌情况，
为开发动物皮肤外用抗真菌霜剂提供试验依据。
1 材料
1． 1 菌种
须癣毛癣菌、红色毛癣菌标准株，均购自中国药
品生物制品检定所。
1． 2 培养基
液体沙式培养基(液体 SDA)、固体沙式培养基
(固体 SDA) ，自配。
1． 3 药品
复方土槿皮霜剂，由四川畜牧科学研究院养兔研
究所提供。
1． 4 主要仪器
隔水式恒温培养箱，上海妖进医疗器械厂生产;
超净工作台(型号为 SW － CJ － IF) ，苏州泰安空气技
术有限公司生产;高压湿热灭菌锅(型号为 mlS －
3020) ，SANYO(三洋)公司生产;振荡培养箱(型号为
HZQ － F16) ，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司
生产。
2 方法
2． 1 培养基的制备
2． 1． 1 液体沙式培养基的配制 用电子天平称取蛋
白胨 5 g、麦芽糖 20 g，放入 500 mL锥形容量瓶中;用
量筒取一定量(约占总量的 1 /2)纯化水倒入容量瓶
中，放在有石棉网的电炉上小火加热，并用玻璃棒搅
拌，以防液体溢出;待各种药品完全溶解后停止加热，
补足水分;用 5% NaOH 或 5% HCl 溶液将培养基的
pH值调至 5． 4;调好 pH 值后加棉塞或试管帽，再包
上 1 层防潮纸，用棉绳系好，115 ℃高压灭菌 20 min;
倒入经过灭菌的锥形瓶中，在标签纸上标明培养基名
称、制备组别、姓名、日期等，备用。
2． 1． 2 固体沙式培养基的配制 在液体沙式培养基
的基础上加 1． 5% ～2． 0%琼脂粉即得到固体沙式培
养基，放入高压蒸气灭菌锅中，115 ℃灭菌 20 min，在
821
Heilongjiang Animal Science
and Veterinary Medicine № 04 2013
DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2013.07.030
2013 年 04 月(上)
标签纸上标明培养基名称、制备组别、姓名、日期等，
备用。
2． 2 菌液的准备
在超净工作台上，将液体沙式培养基分装入小试
管中，用烧灼过的接种环将 2 种菌分别转接到对应的
液体沙式培养基中;做好标记，置于 35 ℃培养箱中振
荡培养 3 ～ 7 d，确认接种成功后用液体沙式培养基作
一定的稀释，备用。
菌液浓度的测定:采用麦氏比浊法测定菌液浓
度，用 0． 25%氯化钡 0． 2 mL，1%硫酸 9． 8 mL配制成
麦氏单位为 0． 5 的标准溶液;轻摇标准试管，以无菌
操作技术将待测定的液体培养物加到与标准管相同
直径(大小)的无菌试管中;以无菌操作技术向待测
定试管中加入无菌生理盐水，直到浊度与标准试管的
浊度相同。
2． 3 复方土槿皮霜剂对须癣毛癣菌和红色毛癣菌的
体外抑菌试验
2． 3． 1 复方土槿皮霜剂对须癣毛癣菌最小抑菌浓度
(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定 采用二倍稀
释法，取灭菌的试管(每种药物 11 支) ，编号排列在
试管架上;每支试管中先加入相应的无菌液体沙式培
养基 2． 0 mL，然后向第 1 号管加入灭菌的复方土槿
皮霜剂溶液 2． 0 mL，混匀后取出 2． 0 mL放入第 2 支
试管中，依次类推，直到第 9 号管取出 2． 0 mL 弃去，
使药液稀释度为 1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，
1∶256，1 ∶512，将复方土槿皮霜剂溶液稀释成 6． 25，
3． 125，1． 562 5，0． 781，0． 391，0． 195，0． 098，0． 049，
0． 024 5 mg /mL，共 9 个浓度梯度;第 10 号管不加药
物作为阳性对照管，以便观察培养基是否适合细菌的
生长;第 11 号管加受试药液 2． 0 mL，取出 2． 0 mL而
弃去，不加真菌以便观察受试药物是否被污染，作为
阴性对照管;取准备好的菌液 0． 1 mL 加入 1 ～ 10 号
管中，第 11 号管不加，混匀后将 11 支试管一起放入
35 ℃恒温培养箱中培养 72 h，观察结果，重复 3 次试
验。结果判定，试管内有絮状物生长，则表示有细菌
生长，透明则表示无细菌生长，以 3 次重复试验无细
菌生长的最小药液浓度的平均值作为该药的最小抑
菌浓度，具体操作方法见表 1。将未见絮状生长的试
管混匀，用棉签沾取试管内液体，涂抹于固体沙式培
养基上，抹匀后放于 35 ℃恒温培养箱中培养 72 h，观
察是否有菌落生长，重复 3 次试验，以 3 次重复试验
无菌落生长的最小药物浓度的平均值为该药物的最
小杀菌浓度。
2． 3． 2 复方土槿皮霜剂对红色毛癣菌最小抑菌浓度
和最小杀菌浓度的测定 方法同 2． 3． 1，但是复方土
槿皮霜剂溶液的浓度依次为 105，52． 5，26． 25，
13． 125，6． 563 ，3． 281 ，1． 641，0． 82 ，0． 41 mg /mL(依
次对应 1 ～ 9 号管)。
表 1 二倍稀释法的操作过程
试管编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
液体沙式培养基 /mL 2． 0 2． 0 2． 0 2． 0 2． 0 2． 0 2． 0 2． 0 2． 0 2． 0 2． 0
菌液 /mL 0． 1 0． 1 0． 1 0． 1 0． 1 0． 1 0． 1 0． 1 0． 1 0． 1
药液稀释度 1∶2 1∶4 1∶8 1∶16 1∶32 1∶64 1∶128 1∶256 1∶512 1∶2
药物浓度 /(mg·mL － 1) 6． 25 3． 125 1． 562 5 0． 781 0． 391 0． 195 0． 098 0． 049 0． 024 5 6． 25
3 结果与分析
3． 1 最小抑菌浓度和最小杀菌浓度的测定结果
3． 1． 1 对须癣毛癣菌最小抑菌浓度及最小杀菌浓度
的测定 结果见表 2。
表 2 药物对须癣毛癣菌最小抑菌浓度
及最小杀菌浓度的测定结果
试管编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
真菌生长情况 － － － － － + + + + + －
平板培养生长情况 － － － + + + + + + + －
注:“ +”表示有细菌生长，“ －”表示无细菌生长。
由表 2 可以看出，复方土槿皮霜剂对须癣毛癣菌
的最小抑菌浓度为第 5 号管的浓度，由试验方案浓度
可知第 5 号管的浓度为 0． 391 mg /mL。同样可得，复
方土槿皮霜剂对须癣毛癣菌的最小杀菌浓度为第 3
号管的浓度，由试验方案浓度可知第 3 号管的浓度为
1． 562 5 mg /mL。由试验结果可知，复方土槿皮霜剂
对须癣毛癣菌有显著的抑制作用。
3． 1． 2 对红色毛癣菌最小抑菌浓度及最小杀菌浓度
的测定 结果见表 3。
表 3 药物对红色毛癣菌最小抑菌浓度
及最小杀菌浓度的测定结果
试管编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
真菌生长情况 － － － － － － － + + + －
平板培养生长情况 － － － － － + + + + + －
注:“ +”表示有细菌生长，“ －”表示无细菌生长。
由表 3 可以看出，复方土槿皮霜剂对红色毛癣菌
的最小抑菌浓度为第 7 号管的浓度，由试验方案浓度
可知第 7 号管的浓度为 1． 641 mg /mL。同样可得，复
方土槿皮霜剂对红色毛癣菌的最小杀菌浓度为第
5 号管的浓度，由试验方案浓度可知第 5 号管的浓度
为 6． 563 mg /mL。由试验结果可知，复方土槿皮霜剂
对红色毛癣菌有显著的抑制作用。
4 讨论
随着人们生活水平的不断提高，各种经济动物的
皮张制品已进入人们的日常生活当中，人类健康需求
意识、药品安全性、人畜共患疾病等问题也受到普遍
关注，无公害优质的畜产品生产已成为畜牧业发展的
必然趋势［3］。近年来，毛用动物皮肤真菌病的发病
921《黑龙江畜牧兽医》科技版
率日渐上升，严重制约了毛皮生产的发展，而且目前
在临床工作中由于抗生素的不合理使用，临床耐药菌
株不断增加，使细菌的耐药性成为治疗的棘手问
题［4］。药品在使用中产生的残留、抗性和微生物再
猖獗的问题，引起人们对其高度重视和重新评价。面
对这一严峻现状，我国是中药大国，提取中药中的有
效成分应用于临床治疗感染病菌有着极大的应用前
景，有研究表明，单一的中药抑菌作用较弱，与复方中
药的协同作用相比，复方中药表现出较强抑菌作
用［5］。因此，提取中药中有效的抑菌成分，并利用与
药物的协同作用来增强抗菌效果充分显示其独特的
优势，不失为中药制剂领域中的一个重要分支［6］。
动物皮肤真菌病传播快，病情顽固且复杂，难以
根治，并可传染给人，引起人类发病。饶静等［7］用 6
种常用抗真菌的西药治疗由石膏样毛癣菌和红色毛
癣菌引起的兔皮肤真菌病，其效果都不理想，主要问
题是用药周期长、治疗成本高、临床疗效缓慢，且所
用药物只能缓解基本症状，停药后容易复发和难以
根治等多种情况。传统治疗为西药治疗，常用西药有
灰黄霉素、特比萘芬和阿莫罗芬等，西药存在较大的
不良反应，并且容易产生耐药性，而中药表现出不良
反应小、来源广、价格低、较少出现耐药性等优势，近
年来抗皮肤真菌中药的研发越来越受到广大学者的
关注。因此，开发价格适中、临床使用方便、安全性高
和符合我国畜牧业发展实际需要的抗皮肤真菌病的
新药具有良好的发展前景。
应用体外抑菌试验可以很直接地表现药物对病
原菌的抑制作用。本试验采用二倍稀释法定量评价
复方土槿皮霜剂对须癣毛癣菌和红色毛癣菌的抑制
作用，其结果重复性好，准确性高。本试验结果显示:
复方土槿皮霜剂对须癣毛癣菌和红色毛癣菌都有明
显的抑制作用，该制剂对须癣毛癣菌的抑菌效果显
著，其最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为
0． 391 mg /mL和 1． 562 5 mg /mL;对红色毛癣菌的抑
菌效果相对较弱，其最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分
别为 1． 641 mg /mL和 6． 563 mg /mL。
参考文献:
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收稿日期:2012-04-01;修回日期:2013-01-14
作者简介:柳志余(1972 －)，男，高级实验师，本科，研究方向
为动物科学与动物医学，
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1152375089@ qq． com．
黄芪多糖对珍珠鸡生长性能、免疫功能和
血液指标的影响
柳志余
(辽宁农业职业技术学院 畜牧兽医系，辽宁 营口 115009)
中图分类号:S853． 73 + 3 文献标识码:B 文章编号:1004-7034(2013)04 － 0130 － 03
珍珠鸡原产于澳大利亚东部，因羽毛散落小白点
形似珍珠而得名，具有生长快、适应性好、抗病力强、
耐粗饲、易饲养、食性广、肉质细嫩、味道鲜美等特点，
与普通肉鸡相比，蛋白质和氨基酸含量高，脂肪和胆
固醇含量很低，是一种具有野味的高档特禽，更是纯
天然的绿色滋补保健食品，深受消费者青睐。
黄芪多糖 (APS)是黄芪的干燥根经浓缩提取而
成的干燥粉末，呈棕(黄)褐色，味微甜。适用剂型为
饮水剂、拌料剂、口服液、针剂，可作为免疫促进剂或
调节剂，同时具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗
应激、抗氧化、降血糖和血脂等作用。因此，在珍珠鸡
生长的不同时期，将黄芪多糖添加到饲料中可防病抗
病，促进动物生长，提高其免疫力。
1 材料与方法
1． 1 试验日粮与试剂
雏鸡全价复合颗粒料，由海城禾丰饲料公司生
产;黄芪多糖，购自营口市某兽药店。
1． 2 试验动物与分组
将刚从沈阳市某饲养场购买的 160 只 1 日龄健
康珍珠鸡随机分为 4 组，每组设 4 个重复，每个重复
10 只鸡。试验期共 42 d。采用单因素完全随机分组
031
Heilongjiang Animal Science
and Veterinary Medicine № 04 2013