全 文 ：［收稿日期］ 20120515(015)
［基金项目］ 福建省教育厅科技项目(JB09259) ;福建省科技
厅重点项目(2011Y0015)
［第一作者］ 倪峰，博士，研究员，从事中药活性成分研究，Tel:
0591-22869895，E-mail:nf5910@ 163． com
［通讯作者］ * 黄仁杰，硕士，副教授，从事新药开发，Tel:0591-
22869860，E-mail:hrj3@ 163． com
微波辅助半仿生法提取藤茶的工艺优选
倪峰，黄仁杰 *
(福建卫生职业技术学院，福州 350101)
［摘要］ 目的:优选中药藤茶的微波辅助半仿生法提取工艺。方法:以蛇葡萄素为评价指标，HPLC 测定指标成分含量，
采用均匀设计法优选藤茶提取工艺参数。结果:最佳提取工艺为 3 次提取用水 pH 分别为 6. 0，7. 5，9. 0，微波处理时间依次为
3，1. 5，1. 5 min。结论:微波辅助半仿生提取法可有效、快捷地提取藤茶中有效成分。
［关键词］ 半仿生提取;微波辅助;藤茶;蛇葡萄素;均匀设计
［中图分类号］ R283. 6 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)18-0027-03
Optimization of Extraction Technology for Ampelopsis grossedentata
by Microwave-assisted Semi-bionic Method
NI Feng，HUANG Ren-jie*
(Fujian Health College，Fuzhou 350101，China)
［Abstract］ Objective:To optimize microwave-assisted semi-bionic extraction technology of Ampelopsis
grossedentata． Method:With ampelopsin as index which was determined by HPLC， extraction technology
parameters was optimized by uniform design． Result:Optimum extraction technology were:pH values of water in
three times for extracting were 6. 0，7. 5，9. 0，microwave processing time of 3，1. 5，1. 5 min，respectively．
Conclusion:Microwave-assisted semi-bionic extraction technology could effectively and quickly extract effective
components from A． grossedentata．
［Key words］ semi-bionic extraction; microwave-assisted; Ampelopsis grossedentata; ampelopsin;
uniform design
藤茶又名甜茶藤、藤婆茶、霉茶，味甘、性凉，具
有清热解毒、祛风湿、强筋骨之功效。其最主要活性
成分为蛇葡萄素(又名二氢杨梅素) ，属二氢黄酮醇
类化合物，具有广泛的药理活性，极具开发潜力［1］。
近年来报道了很多藤茶提取技术，如逆流法［2］、微
波辅助法［3］、乙醇辅助法［4］、超声波辅助溶剂法［5］
等。这极大地促进了藤茶的研究利用，但普遍存在
费时、耗能、有机溶剂污染等缺点。
半仿生提取法(SBE)是将整体药物研究法与分
子药物研究法相结合，从生物药剂学角度模拟口服
给药及药物经胃肠道转运的原理，为经消化道给药
的中药制剂设计的一种新的提取工艺［6］。本研究
将微波辐射替代传统的煎煮加热方式，达到均匀加
热、破坏细胞结构和缩短加热时间的同时，以提取液
中蛇葡萄素含量为考察指标，通过均匀设计法优选
半仿生提取工艺，以建立一种高效、环保，可有效避
免因长时间的加热处理而引起有效成分破坏的新
方法。
1 材料
LC-2010A 型高效液相色谱仪(日本岛津，LC-
solution 色谱工作站) ，EL204-2C 型电子分析天平
(瑞士梅特勒公司) ，VIP272 型微波萃取器(上海惠
而浦家用电器有限公司) ，蛇葡萄素对照品(纯度 ＞
98%，张家界生力生物有限公司，批号 060629) ，藤
茶购于福建泰宁县开善食用菌公司，经我院中药教
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第 18 卷第 18 期
2012 年 9 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 18
Sep．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.18.026
研室魏捷副教授鉴定为葡萄科植物显齿蛇葡萄
Ampelopsis grossedentata (Hand． -Mazz．)W． T． Wang
的干燥茎叶。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂
均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 均匀试验设计 根据 SBE 法理论，在药材粒
度、提取用水倍数、微波功率、滤过等条件不变的前
提下，以提取液中蛇葡萄素含量为考察指标，选用
U9(9
1 × 33)均匀设计拟水平表安排试验［7-8］，见
表 1。
表 1 藤茶微波辅助半仿生法提取工艺优选 U9
(91 × 33)均匀试验因素水平
No．
A
第 1 煎水
pH
B
第 2 煎水
pH
C
第 3 煎水
pH
D
总时间
/min
1 2. 0 7. 0 8. 0 6
2 4. 0 6. 5 9. 0 2
3 2. 5 6. 5 9. 0 4
4 3. 0 7. 5 8. 5 2
5 5. 5 7. 0 8. 5 2
6 3. 5 7. 0 8. 0 6
7 4. 5 7. 5 9. 0 4
8 5. 0 7. 5 8. 0 4
9 6. 0 6. 5 8. 5 6
注:3 次微波处理时间分配比为 2∶ 1∶ 1。
2. 2 溶液配制
2. 2. 1 对照品溶液 精密称取蛇葡萄素对照品适
量，加甲醇溶解，定容摇匀，制得 0. 1 g·L － 1对照品溶
液，备用。
2. 2. 2 提取液的制备 称取藤茶药材粉末 9 份(40
目) ，每份 10 g，按均匀设计表安排，分别经微波辐
射处理 3 次(3 次加水量依次为药材量 10，8，8 倍，
水 pH 按表 1 且均预先煮沸) ，用 4 层纱布加 100 目
筛网趁热过滤，以转速 3 000 r·min － 1离心 15 min，合
并上清液，加乙醇定容至 300 mL，摇匀备用。
2. 3 蛇葡萄素含量测定
2. 3. 1 色 谱 条 件 Hypersil ODS2 色 谱 柱
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，LC-10VP 紫外检测器，
流动相甲醇-水-磷酸(65 ∶ 35 ∶ 0. 2) ，流速 1 mL·
min － 1，检测波长 292 nm，进样量 20 μL，柱温 25 ℃。
此条件下，蛇葡萄素与其他组分达到基线分离，对测
定无干扰。见图 1。
2. 3. 2 线性关系的考察 取蛇葡萄素对照品溶液
适量，以甲醇稀释成 4. 0，8. 0，12. 0，16. 0，24. 0，32. 0
A．对照品;B．样品;1．蛇葡萄素
图 1 藤茶提取液 HPLC
mg·L － 1系列质量浓度溶液，经 0. 45 μm 微孔滤膜滤
过，分别进样 20 μL，记录峰面积。以蛇葡萄素质量
浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程 Y =
1. 82 × 107C + 2. 27 × 102(r = 0. 999 5) ，蛇葡萄素质
量浓度在 4. 0 ～ 32. 0 mg·L － 1与峰面积呈良好的线
性关系。
2. 3. 3 精密度试验 量取同一蛇葡萄素对照品溶
液，连 续 进 样 5 次，测 定 各 峰 面 积，结 果 RSD
0. 34%，表明仪器精密度良好。
2. 3. 4 重复性试验 取同一批号藤茶样品 6 份，按
2. 2. 2 项下方法操作，依法进样，记录峰面积，计算
RSD 2. 21%，表明样品的制备与检测方法稳定，重
复性良好。
2. 3. 5 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于
0，1，2，4，8，12 h 依法进样，测定峰面积，计算 RSD
1. 56%，表明样品溶液在 12 h 内稳定。
2. 3. 6 加样回收率试验 精密量取已知含量的藤
茶供试品溶液 6 份，分别加入蛇葡萄素对照品溶液
2. 0 mL，依法测定，结果见表 2，说明该检测方法的
准确度较好。
表 2 蛇葡萄素加样回收率试验
No．
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
/%
1 0． 199 0． 1931 97． 02
98． 13 2． 33
2 0． 199 0． 1916 96． 28
3 0． 199 0． 2020 101． 53
4 0． 199 0． 1932 97． 11
5 0． 199 0． 2000 100． 54
6 0． 199 0． 1917 96． 31
2. 3. 7 样品含量测定 精密吸取供试品溶液 1. 0
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第 18 卷第 18 期
2012 年 9 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 18
Sep．，2012
mL，置 10 mL 量瓶中，甲醇稀释定容，经 0. 45 μm 微
孔滤膜滤过，分别进样 20 μL，记录峰面积，计算含
量，结果均匀设计安排的 9 个提取液样品中蛇葡萄
素质量浓度分别为 4. 37，3. 55，4. 14，3. 31，3. 73，
4. 72，4. 45，4. 61，5. 16 g·L － 1(n = 3)。
2. 4 均匀设计分析 将均匀设计试验数据用 SPSS
11. 5 for window 统计软件进行多元线性回归，采用
Enter 法拟合得回归方程 Y = － 0. 579 + 0. 186A +
0. 140B + 0. 198C + 0. 351D，复相关系数 0. 981，决定
系数 R2 = 0. 963，经方差分析 P = ＜ 0. 01，回归方程
有效。通过对回归方程分析，可知各因素对结果的
影响顺序为 D ＞ C ＞ A ＞ B，且各因素水平与指标值
呈正相关，即在所考察水平范围内，各因素水平值越
大，提取液中蛇葡萄素的含量越高。故确定藤茶的
半仿生提取法最佳工艺条件为 3 次提取用水 pH 依
次为 6. 0，7. 5，9. 0，微波处理时间依次为 3，1. 5，1. 5
min。理论预测值 5. 475 g·L － 1。
2. 5 验证试验 分别称取藤茶药材粉末(40 目)50
g 共 3 份，按照优化所得工艺条件，制备 3 批样品，
分别测定提取液中蛇葡萄素的含量。结果，提取液
中蛇葡萄素的平均质量浓度为 5. 12 g·L － 1，RSD
3. 42%，接近预测值，说明优选条件合理、可行。
3 讨论
半仿生提取法是模拟药物经胃肠道的转运过
程，药物应依次经过酸性、碱性溶液的处理。研究中
发现蛇葡萄素在偏碱性溶液中受热易变色，为尽量
缩短在提取过程中药物的受热过程，减少不稳定现
象的发生，采用具有加热快速、均匀且能有效破坏细
胞结构的微波处理代替长时间煎煮，既能保证藤茶
的提出率，减少耗能，又不破坏有效成分。
本试验研究对象为单味药材，蛇葡萄素为其最
主要活性成分，且含量占药材干重达 20% ～ 28%，
此外还有极少量的杨梅黄素、豆甾醇、β-谷甾醇
等［9］。因此，浸膏量大小不能直接反映提取效率的
高低，故选取蛇葡萄素含量为唯一评价指标。
提取工艺筛选结果显示，微波处理时间对藤茶
的提取效率有很大的影响，为确证半仿生提取法对
藤茶提取效果的影响，研究中曾设计将 3 次提取溶
剂均改为未经调 pH 的纯化水，同样以微波处理相
同时间，结果发现纯化水为溶剂的提取量仅为半仿
生提取法 40%左右，说明半仿生提取法的酸碱连续
提取能有效提高藤茶提取物中活性成分的含量。
［参考文献］
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［责任编辑 仝燕］
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倪峰，等:微波辅助半仿生法提取藤茶的工艺优选