全 文 ：Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology,2010 March,Vol．21 No．2
复方壁虎藤梨根对肝癌细胞的抑制作用研究
张 虹，向俊锋，戴 玮，金 雪，刘 岩，管 烨，唐亚林（中国科学院化学研究所分子动态与稳态结构国家
重点实验室，北京 100190）
摘要：目的：观察复方壁虎藤梨根对肝癌细胞的抑制作用。方法：采用体外抗肿瘤药物筛选的SRB法，考察壁
虎粉、藤梨根及其复方对肝癌细胞的抑制作用。结果：在体外试验中，壁虎粉、藤梨根及复方壁虎藤梨根均对
肝癌细胞表现出一定的生长抑制作用，在相同的条件下，复方壁虎藤梨根的抑制效果均要优于单独的壁虎粉和
藤梨根。在体内的抗肿瘤药效评价中，复方壁虎藤梨根能有效抑制肿瘤生长，瘤重与肿瘤对照组比较明显降低
（P < 0.05），肿瘤抑制率可达37.9 %，且对荷瘤小鼠体重无任何影响。结论：复方壁虎藤梨根在体外及体内的
3 讨论
中药血清药理学研究方法是目前联系体内与体外
研究、揭示中药作用机理的重要桥梁，它既能反应药
物中可吸收部分的直接作用，也能反应药物成分在机
体作用下形成的代谢产物和药物诱生的机体内源性物
质的间接效果[6]。该方法弥补了中药粗制剂用于体外
研究的局限性，同时又能体现并深化体内实验的研究
成果。本研究探索并成功建立了平肺口服液血清药理
学研究方法，主要依据以下两个方面：第一，平肺口
服液 20 g/kg灌服（造模前一周开始灌服，每日一次，
每周 5 d，共 5周）可有效预防大鼠放射性肺损伤[3]；
第二，血清药理学通法给药和采血原则，即将待测药
每天给药两次，连续给药 3 d，末次给药后 1 h～2 h
采血[5]。另外，实验还设立了血清对照，对正常大鼠
血清在常规培养体系中对细胞生长的影响进行了研
究。确定了在含 10 %FBS的高糖 DMEM培养体系
中，添加 10 %大鼠血清研究 CCC- HPF- 1 的生长是
可行的。
为了对比血清药理学方法与普通的生药添加法对
中药机理研究的影响，实验同时设立了生药对照。直
接添加平肺口服液 30 mg/mL、 60 mg/mL 和 100
mg/mL可不同程度地抑制 CCC- HPF- 1的生长，其中
30 mg/mL可轻度抑制细胞生长，100 mg/mL可强烈抑
制细胞生长，后者与阳性对照顺铂 6.25μg/mL对细
胞的抑制作用程度相似（结果未列出）。因此选择中间
剂量 60 mg/mL作为生药对照组的添加剂量。虽然生
药直接添加与含药血清均对 CCC- HPF- 1的生长产生
抑制作用，但平肺口服液 20 g/kg灌服所获含药血清
还能明显诱导细胞凋亡，使细胞周期发生 G1/G0 期
阻滞，而生药直接添加则不能诱导细胞凋亡。这一方
面说明生药直接添加法在中药作用机理研究的局限
性，更重要在于提示平肺口服液经过体内代谢之后可
能产生了一些内源性代谢产物，在抑制成纤维细胞生
长、尤其是诱导凋亡方面发挥重要作用。
研究显示，平肺口服液 20 g/k g灌服所获含药
血清作用 96 h 能抑制人胚肺成纤维细胞的生长，
诱导细胞凋亡，以及使细胞周期发生 G1/G0期阻滞。
结合体内研究结果[3，4]，我们认为，该药有可能从抑制
肺成纤维细胞增殖和诱导凋亡方面预防放射性肺
损伤的发生。
参考文献：
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力学［J］.世界科学技术－中药现代化，2002，4（3）：53- 55.
（编辑：邓响潮）
收稿日期：2009- 08- 14
作者简介：张虹 (1980- )，女，硕士，助理研究员,主要从事天然抗肿瘤药物的机理研究。通讯作者：唐亚林，研究员，博士生导师，主要从事抗
肿瘤药物的研发工作，Tel：010- 62522090，Email: tangyl@iccas.ac.cn.
·130·
中药新药与临床药理 2010年 3月第 21卷第 2期
癌症的侵袭转移是癌症患者死亡的主要原因，寻
找高效、低毒的天然药物作为肿瘤细胞增殖、侵袭转
移抑制剂和细胞调亡诱导剂对于临床应用具有重要的
意义。我国历史文化悠久，在民间散落着许多的单、
验方，在治疗癌症中常有较好的作用。温州民间流传
用壁虎粉，藤梨根煮红枣用以治疗胃癌、食道癌恶性
肿瘤[1]。在近十几年，壁虎被广泛应用于临床多种疾
病，特别是在用于多种恶性肿瘤、结核病、骨髓病、
瘘病、窦道以及外科抗感染等疑难杂症时，均有确切
疗效 [2- 3]。藤梨根为猕猴桃科植物猕猴桃（Actinidia
chinensis Planch）和软枣猕猴桃（A . arguta Planch） 的
根，始载于《开宝本草》，具有健胃、清热、利湿的功
效[4- 6]。近几年，已有多篇文献报道了壁虎粉及藤梨
根药材的抗肿瘤活性[2- 3，7- 10]，而复方壁虎藤梨根抗肿
瘤药效的报道却少有报道。为了明确该复方的药效，扩
宽其应用范围，我们对该复方进行抗肝癌方面的研究。
1 材料与方法
1.1 体外抗肿瘤实验材料
1.1.1 肿瘤细胞株 人肝癌Bel- 7402细胞株由上海细
胞所提供。
1.1.2 受试样品 壁虎粉药材购自济南市中九顶山天
然养殖场。按照5∶1的比例，将壁虎粉和大米混合均
匀，然后放入砂锅内进行翻炒，直至大米深黄色，去
米，取出壁虎粉晾凉，备用（Ⅰ）。藤梨根药材购自安
徽亳州市天马药业有限公司。将藤梨根切碎、烘干后
用水回流提取，提取液浓缩得浸膏，真空干燥后，备
用（Ⅱ）。将壁虎粉（Ⅰ）和藤梨根药材按重量比1∶5混
合后，加入蒸馏水，加热回流进行浸提，得到壁虎藤
梨根的水提取液；然后在45 ℃旋转蒸发除去溶剂，
直至得到棕色膏状物，真空干燥24 h，得到壁虎藤
梨根的水提取物（Ⅲ）。
1.2 体内抗肿瘤实验材料
1.2.1 肿瘤细胞株 小鼠移植性肿瘤肝癌H22由中国医
学科学院药物研究所提供。
1.2.2 受试样品 复方壁虎藤梨根提取物（Ⅲ）。小鼠
给药剂量设定为：5.76 g/kg（大剂量）和2.88 g/kg（小
剂量）。阳性对照药：注射用环磷酰胺，山西普德药
业有限公司，批号：20051104。小鼠给药剂量25
mg/kg。阴性对照：生理盐水。
1.2.3 实验动物 健康昆明种小鼠，雄性，体重20～
24 g。动物来源：中国医学科学院实验动物研究所，
抗肝癌实验中均表现出明显的抑瘤作用。
关键词：复方壁虎藤梨根；抑瘤作用；肝癌；小鼠
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1003-9783（2010）02-0130-04
Inhibition of Compound Gecko-Tengligen on Hepatoma Cells
ZHANG Hong, XIANG Junfeng, DAI Wei, JIN Xue, LIU Yan, GUAN Ye, TANG Yalin（State Key Laboratory for
Structural Chemistry of Unstable and Stable Species, Institute of Chemistry, Chinese Academy of Sciences, Beijing
100190, China）
Abstract: Objective To explore the anti -tumor effect of the Compound Gecko-Tengligen in human liver cancer
cells. Methods The SRB method was employed to investigate the inhibitory effects of Gecko, Tengligen alone and
their complex on the human liver cancer cells. Moreover, in order to determine the anti-tumor effect in vivo of this
compound, the experiment in mice was carried out. Results In the in-vitro and in-vivo anti-liver cancer experi－
ments, the Gecko-Tengligen Complex showed significant anti-tumor effect. In the in-vitro test, Gecko, Tengligen and
their complex had the growth-inhibition effect on human liver cancer cells. Moreover, under the same conditions, the
Compound Gecko-Tengligen had higher inhibitory rate than the Gecko and Tengligen alone. In the in-vivo antitumor
experiment, the Compound Gecko-Tengligen could effectively inhibit the tumor growth, and the tumor mass weight de－
creased significantly as compared with the control group（P < 0.05）. The tumor inhibitory rate in Compound Gecko-
Tengligen group was up to 37.9 % and Compound Gecko-Tengligen had no effect on the mice body weight. Conclu－
sion Compound Gecko-Tengligen has obvious anti-tumor effect and low toxicity for liver cancer.
Keywords：Compound Gecko-Tengligen；Anti-tumor；Liver cancer；Mice
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Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology,2010 March,Vol．21 No．2
许可证编号：SCXK- 2004- 0001。
1.3 体外抗肿瘤作用实验 磺酰罗丹明B（Sulforho-
damine B，SRB）蛋白染色法。取对数生长期的肝癌细
胞株Bel- 7402接种于96孔培养板，将细胞置于37℃、
5％ CO2培养箱中预贴壁24 h后，弃去上清液，加入
不同浓度的I、II、III 样品。每个浓度设有三复孔。
并设有相应浓度的生理盐水对照及无细胞凋零孔。肿
瘤细胞在37℃，5％ CO2条件下培养72 h，倾去培养
液，依次加入SRB溶液和三羟甲基氨及甲烷（Tris）溶
液，在 515 nm波长下利用酶标仪测定各孔吸光度。
并按下式进行计算，结果见图1。抑制率计算方法：
细胞抑制率（％）= 对照组瘤重－给药组瘤
对照组瘤重
×100
1.4 体内抗肿瘤作用实验 小鼠腋窝皮下接种H22肝癌
细胞（1×107），0.2 mL /只，24 h后随机分4组（每组
12只）：肿瘤阴性对照组（水）、环磷酰胺对照组、复
方大、小剂量组，各组按所设剂量连续灌胃给药/水
10 d，每天给药1次，末次给药24 h后，将小鼠脱颈处
死，剖取瘤块称重，按下列公式计算各给药组的肿瘤
抑制率，结果见表 2及图1所示。抑制率计算公式：
肿瘤抑制率（％）＝ 对照组瘤重－给药组瘤
对照组瘤重
×100
1.5 数据处理 所有实验数据以平均数±标准差
（x±s）表示。
2 结果
2.1 壁虎粉（Ⅰ）、藤梨根（Ⅱ）及复方壁虎藤梨根
（Ⅲ）对肝癌细胞株的体外抑制实验 利用SRB法检测
壁虎粉（Ⅰ）、藤梨根（Ⅱ）及复方壁虎藤梨根（Ⅲ）在不
同浓度下对肝癌细胞生长的影响，结果见图1所示。
从图1中可以看出，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ样品均对肝癌细胞表现
出一定的生长抑制作用且在相同的条件下，复方壁虎
藤梨根的抑制效果均要优于单独的壁虎粉（Ⅰ）和藤梨
根（Ⅱ）。尤为重要的是，在0.063 mg/mL的较低浓度
下，图B所示，该复方对肝癌细胞仍具有较高的抑
制效果。
图1 壁虎粉（Ⅰ）、藤梨根（Ⅱ）及复方壁虎藤梨根（Ⅲ）
对人肝癌细胞株（Bel- 7402）的抑制作用
2.2 复方壁虎藤梨根对小鼠肝癌H22的体内抑制作用
体内抗肿瘤实验结果如表1及图2所示，由阴性对照组
可以看出，小鼠肿瘤生长良好。复方壁虎藤梨根大、
小剂量组均能抑制肿瘤生长，瘤重与肿瘤对照组比较
明显降低（P < 0.05），肿瘤抑制率分别为37.9 %和
24.2 %。阳性对照组（环磷酰胺）显著抑制肿瘤生长，
抑制率达到72.7 %，与肿瘤对照组比较P < 0.01。
表1 治疗10天后各组的小鼠体重和剥离瘤体称重（g）
及瘤重抑制率（%）（x ± s，n=12）
注：与阴性对照组比较， * P < 0.05， **P < 0.01。
图 2 各组剥离的瘤体图
除此之外，从表1中可以看出，对比阳性对照组
的体重显著降低，复方壁虎藤梨根给药组，即使是在
大剂量给药的情况下，小鼠的体重几乎与阴性对照组
相当，即对荷瘤小鼠体重无影响。
3 讨论
肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，人称“癌中之
王”。我们将复方壁虎藤梨根进行体内及体外的抗肝
癌实验，其结果表明：复方壁虎藤梨根具有显著抑制
肝癌细胞生长的作用，且其抑制效果优于单独的壁虎
粉及藤梨根药材。体内抗肿瘤实验结果表明，该复方
能明显抑制肝癌细胞的生长，与肿瘤对照组比较，其
瘤重显著降低（P < 0.05~0.01），且对荷瘤小鼠体重无
任何影响。中药复方药效的发挥并非单味药成分的简
单相加，而是复方中各成分之间存在协同作用或产生
新的药理作用。本试验我们观察到，由于壁虎粉和藤
梨根之间产生的协同作用使其在很低的浓度下，对肝
癌的抑制效果仍优于单味中药。复方壁虎藤梨根在体
外及体内的抗肝癌实验中均表现出明显的抑瘤作用，
提示该复方在防治肝癌方面具有一定的开发价值。
样品组
大剂量组
小剂量组
剂量 g/kg
-
0.025
5.76
2.88
开始
21.1±1.48
21.7±0.92
21.0±1.25
20.7±1.08
结束
34.0±2.97
29.3±2.64**
32.6±2.44
33.4±3.62
瘤重 /g
2.64±0.907
0.72±0.356**
1.64±0.959*
2.00±0.478*
肿瘤抑制率 / %
72.7
37.9
24.2
组 别
阴性对照组
阳性对照组
体重 /g
阴性对照组
大剂量组
小剂量组
阳性对照组
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中药新药与临床药理 2010年 3月第 21卷第 2期
收稿日期：2009- 11- 05
作者简介：朱善意（1971-），男，从事中药与天然药物的研制与开发。通讯作者：邱丽颖，教授，研究方向：心血管药理学研究。 Email:
qiulydoc@sina.com。
颐和春口服液对肾阳虚大鼠睾丸功能的影响
朱善意1，2，高越颖1，陈 爽1，刘玲艳1，冯 磊1，邱丽颖（1.江南大学医药学院生物制药系，江苏 无锡
214122；2.江苏省姜堰市苏中制药集团有限公司，江苏 姜堰 225500）
摘要：目的 观察颐和春口服液对肾阳虚大鼠睾丸功能的影响并探讨其机制。方法 用腺嘌呤制备肾阳虚大鼠
模型。实验分为正常对照组、肾阳虚模型组、阳性药物治疗组和颐和春治疗组。观察颐和春口服液对肾阳虚大
鼠睾丸形态学、血清雄性激素及睾丸组织MDA和SOD的影响，并观察对腺垂体细胞凋亡及下丘脑区兴奋性及抑
制性氨基酸比值的影响。HE染色观察睾丸形态学改变、放免法测定血清雄性激素、生化法测定睾丸组织MDA
和SOD，末端标记法测定腺垂体细胞凋亡，HPLC测定脑组织氨基酸。结果 颐和春明显改善肾阳虚引起的睾
丸损伤，提高雄性激素水平，降低睾丸组织MDA， 提高SOD ，减少腺垂体细胞凋亡，调节下丘脑兴奋性和抑
制性氨基酸比值。结论 颐和春口服液对肾阳虚大鼠生殖能力有一定改善作用，可能与其对下丘脑-腺垂体-
睾丸轴的调节作用有关。
关键词：颐和春口服液；肾阳虚；睾丸功能；下丘脑-腺垂体-性腺轴
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1003-9783（2010）02-0133-04
Effects of Yihechun Oral Liquid on Testicular Function of Kidney-yang Deficiency Rats
ZHU Shanyi1，2 ，GAO Yueying1，CHEN Shuang1，LIU Lingyan1，FENG Lei1，QIU Liying1（1. Department of Bio－
Pharmaceutics，School of Medicine and Pharmaceutics, Jiangnan University ,Wuxi 214122 Jiangsu, China; 2. Suzhong
Pharmaceutical Group Co., Ltd., Jiangyan 225500 Jiangsu, China )
Abstract: Objective To observe the effect of Yihechun oral liquid（YOL）on testicular function of kidney-yang defi－
ciency rats and to explore its mechanism. Methods The kidney-yang deficiency rat model was induced by gastric
infusion of adenine. The rats were divided into four groups: normal control group, kidney -yang deficiency model
group, positive drug group, and YOL group. We observed the effect of YOL on testis morphology, serum androgen
level, MDA and SOD activities in testicular tissue. Meanwhile, the apoptosis of adenopituicytes and the ratio of excita－
tory and inhibitory amino acids in brain were also observed. Testicular morphological changes were observed by HE
staining, radioimmunoassay was used to detect serum androgen, and biochemical determination was used to observe
MDA and SOD activities in testicular tissue. The adenopituicyte cell apoptosis was detected by terminal -labeling
method, amino acid content in brain tissue was determined by HPLC. Results YOL obviously relieved testicular
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