全 文 ：＊基金项目：广西自然科学基金资助项目（Ｎｏ．桂科自０５４２０５５）
△通信作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｒｓ．３１３００６４＠１６３．ｃｏｍ
１广西大学化学化工学院
２广西兽药监察所
收稿日期：２０１１－０８－３０
ＨＰＬＣ对广西不同采收期喜树果中喜树碱成分动态积累的研究＊
苏　青　黄瑞松△１　周芳礼１　叶云锋２　刘　婧
（广西民族医药研究院　南宁　５３０００１）
摘要　目的：考察广西不同采收期喜树果中喜树碱成分的动态积累情况，确定喜树果药材最佳采收期。方法：采用高效液相色
谱法（ＨＰＬＣ）测定广西部分地区同一植株不同采收期喜树果中喜树碱含量。色谱条件：色谱柱：Ｄｉｋｍａ　Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ（钻石）Ｃ１８柱
（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相：甲醇—水（５５∶４５），流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ，柱温：室温，检测波长：２５４ｎｍ。结果：测得喜树碱
在０．１１２～０．６７２μｇ范围内有良好线性关系，平均回收率为１０２．１６％，ＲＳＤ＝２．９１％（ｎ＝６）。不同采收期喜树果中喜树碱含
量在０．０６５％～０．２１％之间。结论：广西不同采收期喜树果中喜树碱成分的动态积累有一定差异，广西产喜树果最佳采收期应
为每年的８，９月份。
关键词　喜树果；喜树碱；动态积累；高效液相色谱法
中图分类号：Ｒ－３３　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００５－９３０Ｘ（２０１１）０５－０６７８－０３
ＳＴＵＤＹ　ＯＮ　ＴＨＥ　ＤＹＮＡＭＩＣ　ＡＣＣＵＭＵＬＡＩＯＮ　ＯＦ　ＣＡＭＰＴＯＴＨＥＣＩＮ　ＩＮ　ＣＯＭＭＯＮ　ＣＡＭＰＴＯ－
ＴＨＥＣＡ　ＦＲＵＩＴ　ＦＲＯＭ　ＤＩＦＦＥＲＥＮＴ　ＧＲＯＷＩＮＧ　ＰＥＲＩＯＤ　ＩＮ　ＧＵＡＮＧＸＩ　ＢＹ　ＨＰＬＣ
Ｓｕ　Ｑｉｎｇ，Ｈｕａｎｇ　Ｒｕｉｓｏｎｇ，Ｚｈｏｕ　Ｆａｎｇｌｉ，Ｙｅ　Ｙｕｎｆｅｎｇ，Ｌｉｕ　Ｊｉｎｇ．（Ｇｕａｎｇｘｉ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｍｉｎｏｒｉｔｙ　Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｙ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｉｎｓｐｅｃｔ　ｔｈｅ　ｄｙｎａｍｉｃ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ　ｉｎ　ｃｏｍｍｏｎ　ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ　ｆｒｕｉｔ
ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ａｒｅａｓ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇｒｏｗｉｎｇ　ｐｅｒｉｏｄ　ｉｎ　Ｇｕａｎｇｘｉ．Ａｔ　ｌａｓｔ，ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｈａｒｖｅｓｔ　ｐｅｒｉｏｄ　ｏｆ
ｃｏｍｍｏｎ　ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ　ｆｒｕｉｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ，ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　Ｃ１８ｃｏｌ－
ｕｍｎ（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），ｔｈｅ　ＣＨ３ＯＨ－Ｈ２Ｏ（５５∶４５）ａｓ　ａ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ，ｔｈｅ　ｆｌｏｗｒａｔｅ　ｗａｓ　０．８ｍＬ／
ｍｉｎ，ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　ｒｏｏｍ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ａｔ　２５４ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｒｅ
ｗａｓ　ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｆｏｒ　ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．１１２～０．６７２μｇ．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ
ｗａｓ　１０２．１６％，ＲＳＤ＝２．９１％（ｎ＝６）．Ｉｔｓ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　０．０６５％～０．２１％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｄｙｎａｍｉｃ
ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ　ｉｎ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａｅ　ｈａｓ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇｒｏｗｉｎｇ　ｐｅｒｉｏｄ
ｉｎ　Ｇｕａｎｇｘｉ，Ａｕｇｕｓｔ　ｏｒ　Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｈａｒｖｅｓｔ　ｔｉｍｅｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　ｃｏｍｍｏｎ　ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ　ｆｒｕｉｔ；ｃｏｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ；ｄｙｎａｍｉｃ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ；ＨＰＬＣ
　　喜树果是珙桐科植物喜树Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ　ａｃｕｍｉｎａｔａ　Ｄｅｃ－
ｎｅ．的干燥成熟果实，是中医和民间医常用药材，具有抗癌、
散结、破血化瘀的功效，广西民间用于治疗各种肿瘤［１］。喜
树主要分布于我国西南各省区，尤以广西资源丰富。现代研
究证实，喜树碱（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）为喜树果主要活性成分［２］。
在广西喜树的果期一般是每年的下半年（７～１２月份），关于
喜树果在果期间喜树碱成分的动态积累情况却鲜有研究报
道，因此无法确定其最佳采收期。前文我们已报道应用
ＨＰＬＣ测定不同产地喜树果中喜树碱含量［３］，本文则应用
ＨＰＬＣ测定分析广西不同采收期喜树果中喜树碱含量的动
态积累，以确定喜树果的最佳采收期。
１　仪器与试药
２６９５型 ＨＰＬＣ系统（带自动进样器），２４８７紫外检测器，
２９９６型二极管阵列检测器，Ｍｉｌｅｎｎｉｕｍ３２数据处理系统（均为
美国 Ｗａｔｅｒｓ公司），ＡＥ－２４０型１／１０５电子天平（瑞士梅特勒
公司），ＳＢ２２００超声波清洗器（上海必能信超声有限公司）。
喜树碱对照品（广西河丰药业有限公司，含量＞９８．０％）；
ＨＰＬＣ流动相所用甲醇为色谱纯（天津市四友生物医学技术
有限公司），水为重蒸馏水，其它化学试剂均为分析纯；喜树
果分别采于广西药用植物园（南宁）、广西中医学院（南宁）、
广西植物研究所（桂林）、兴安县、东兰县和龙州县等地，每处
均采自同一植株，每一植株分别在同一年的７～１２月份每月
各采集一次。经广西大学化学工学院黄瑞松主任药师鉴定
·８７６·
广 西 医 科 大 学 学 报
ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＧＵＡＮＧＸＩ　ＭＥＤＩＣＡＬ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ
　２０１１Ｏｃｔ；２８（５）
DOI:10.16190/j.cnki.45-1211/r.2011.05.007
均为喜树Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ　ａｃｕｍｉｎａｔａ　Ｄｅｃｎｅ．的果实，各样品来 源见表１。
表１　不同时期喜树果中喜树碱含量动态积累情况
产地 编号 采集时间 含量（％） 产地 编号 采集时间 含量（％）
南宁市 １－１　 ２００４－０７　 ０．１２１　５ 兴安县 ４－１　 ２００５－０７　 ０．０６５　４
（广西药用植物园） １－２　 ２００４－０８　 ０．１８０　６　 ４－２　 ２００５－０８　 ０．２０９　５
１－３　 ２００４－０９　 ０．１５７　４　 ４－３　 ２００５－０９　 ０．１４０　６
１－４　 ２００４－１０　 ０．１４６　１　 ４－４　 ２００５－１０　 ０．１２８　０
１－５　 ２００４－１１　 ０．１３２　０　 ４－５　 ２００５－１１　 ０．１２６　９
１－６　 ２００４－１２　 ０．１１９　３　 ４－６　 ２００５－１２　 ０．１２３　８
南宁市 ２－１　 ２００５－０７　 ０．０８７　３ 东兰县 ５－１　 ２００６－０７　 ０．１４２　８
（广西中医学院） ２－２　 ２００５－０８　 ０．１４０　８　 ５－２　 ２００６－０８　 ０．２０９　２
２－３　 ２００５－０９　 ０．１１２　０　 ５－３　 ２００６－０９　 ０．１８３　８
２－４　 ２００５－１０　 ０．１１０　８　 ５－４　 ２００６－１０　 ０．１５２　０
２－５　 ２００５－１１　 ０．１１０　４　 ５－５　 ２００６－１１　 ０．１４９　５
２－６　 ２００５－１２　 ０．０８９　８　 ５－６　 ２００６－１２　 ０．１４７　１
桂林市 ３－１　 ２００５－０７　 ０．０８４　８ 龙州县 ６－１　 ２００６－０７　 ０．０７１　４
（广西植物研究所） ３－２　 ２００５－０８　 ０．１１４　０　 ６－２　 ２００６－０８　 ０．１６１　１
３－３　 ２００５－０９　 ０．１５９　０　 ６－３　 ２００６－０９　 ０．１３９　４
３－４　 ２００５－１０　 ０．１４６　９　 ６－４　 ２００６－１０　 ０．１０９　８
３－５　 ２００５－１１　 ０．１４７　６　 ６－５　 ２００６－１１　 ０．０９８　０
３－６　 ２００５－１２　 ０．１５６　０　 ６－６　 ２００６－１２　 ０．１２４　９
２　方法与结果
２．１　色谱条件：色谱柱：Ｄｉｋｍａ　Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ　Ｃ１８柱（４．６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相：甲醇—水（５５∶４５），流速：０．８ｍＬ／
ｍｉｎ；检测波长：２５４ｎｍ；柱温：室温。
２．２　对照品、供试品及阴性对照品溶液制备
２．２．１　对照品溶液制备：精密称取喜树碱对照品１０．０８ｍｇ，
加甲醇定容至２００ｍＬ，摇匀。再精密吸取１ｍＬ，加甲醇定容
至１０ｍＬ，摇匀，即得。
２．２．２　供试品溶液制备：取喜树果粉末（过６０目筛）约０．１ｇ，
精密称定，置２５ｍＬ具塞锥形瓶中，精密加入甲醇１０ｍＬ，密
塞，称定重量。于６０℃水浴温浸提取１ｈ，不时轻轻振摇。
取出，放凉，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，滤
过，取续滤液，即得。
２．２．３　阴性对照品溶液制备：制备对照品及供试品溶液所
用的甲醇溶剂。
２．３　专属性试验：分别取２．２项下的对照品溶液、供试品溶
液和阴性对照品溶液各２０μＬ，注入高效液相色谱仪，照２．１
色谱条件测定。结果表明，供试品溶液的色谱图中均有与喜
树碱保留时间相同的吸收峰，阴性对照品溶液的色谱图则无
此吸收峰。说明用本方法测定喜树碱含量无阴性溶剂干扰，
专属性强，见图１。
图１　喜树碱对照品、喜树果样品及阴性对照品的 ＨＰＬＣ色谱图
Ａ喜树碱对照品；Ｂ喜树果样品；Ｃ阴性对照品；＊－喜树碱
２．４　方法学考察：线性关系考察：分别精密吸取喜树碱对照
品溶液（０．０５０　６ｇ／Ｌ）１．０，２．０，３．０，４．０，５．０，６．０ｍＬ置１０
ｍＬ量瓶中，各加甲醇至刻度，摇匀。分别进样２０μＬ。以峰
面积积分值为纵坐标，进样量（μｇ）为横坐标，绘制标准曲线，
·９７６·苏　青，等 ．ＨＰＬＣ对广西不同采收期喜树果中喜树碱成分动态积累的研究
得回归方程为Ｙ＝５．３０５×１０６　Ｘ－８８　６６２，ｒ＝０．９９９　５。喜树
碱在０．１１２～０．６７２μｇ范围内与峰面积呈良好线性关系。
２．５　精密度试验：精密吸取同一供试品溶液各２０μＬ，连续
进样５次。计算各次测得喜树碱含量相对标准偏差。结果
表明，本品同一供试品溶液的５次重复测定，喜树碱含量相
差不大，ＲＳＤ＝０．３１％。
２．６　重复性试验：精密吸取同一批号药材粉末（过６０目筛）
制备的６个供试品平行溶液各２０μＬ，分别进样，同法测定喜
树碱峰的峰面积积分值，计算喜树碱含量和相对标准偏差。
结果表明，同一批号药材的６个供试品溶液喜树碱含量相差
不大，ＲＳＤ＝２．００％。
２．７　稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液２０μＬ，分别于
０，２，４，６，８ｈ和２４ｈ进样测定，计算各次喜树碱含量及相对
标准偏差。结果表明：２４ｈ内各次测得的喜树碱含量变化不
大，ＲＳＤ＝１．０７％。
２．８　回收率试验：采用加样回收法，分别称取同一批号药材
粉末（过６０目筛）０．０５ｇ共６份，精密称定，各加入喜树碱对
照品溶液（０．００５　０１ｇ／Ｌ）１０ｍＬ，按照上述２．２项下方法制备
供试品溶液，同法测定喜树碱含量，计算平均回收率及ＲＳＤ。
结果表明，本方法测定喜树碱含量平均回收率为１０２．１６％，
ＲＳＤ＝２．９１％，见表２。
表２　加样回收率试验结果
原有量
（ｍ／ｍｇ）
加入量
（ｍ／ｍｇ）
实测量
（ｍ／ｍｇ）
回收率
（％）
平均回
收率（％）
ＲＳＤ
（％）
０．０６３　１　 ０．０５０　１　 ０．１１４　０　 １０１．６０
０．０６２　１　 ０．０５０　１　 ０．１１１　３　 ９８．２０
０．０６５　４　 ０．０５０　１　 ０．１１７　９　 １０４．７９　 １０２．１６　 ２．９１
０．０６４　８　 ０．０５０　１　 ０．１１４　５　 ９９．２０
０．０６５　１　 ０．０５０　１　 ０．１１７　２　 １０３．９９
０．０６６　３　 ０．０５０　１　 ０．１１９　０　 １０５．１９
２．９　样品测定：分别取表１各样品粉末（过６０目筛）约０．１ｇ，
按上述２．２的方法制备供试品和对照品溶液，并按２．１色谱
条件进行测定。结果表明，同一植株不同时期采收的喜树果
药材喜树碱含量有一定差异，其中以８月份或９月份采集的
样品含量最高，７月份采集的样品含量最低，见图２。
图２　不同时期喜树果中喜树碱含量动态积累情况
３　讨　论
文献记载，张丽艳等［４］曾利用 ＨＰＬＣ测定９～１２月份采
收期的喜树果药材喜树碱含量。结果含量随采收月份的提
高而增加，含量最高为１２月份采收的样品，最低为９月份采
收的样品。本文研究的结果（表１及图２）则表明，７月份采收
的喜树果中的喜树碱含量最低，８月份或９月份采收的喜树
碱含量最高，以后含量又逐月下降。本文的研究结果与文献
报道的结果不同，这可能是两者的产地来源及环境气候不同
造成的。文献［４］试验所用样品采自贵州省贵阳市，本文试
验所用样品采自广西部分地区。因为贵州省贵阳市属高寒
气候地区，气温相对偏低，潮湿，植物果实的成熟期可能延
缓。而广西处于亚热带地区，气候炎热，雨量充沛，植物果实
成熟期提前。因此，喜树果中喜树碱成分的动态积累可能与
产地及气候环境等有关，不同地区喜树果的最佳采收期可能
有所不同。我们目前的研究只是针对广西地区而言，不同省
区不同采收期的喜树果药材喜树碱成分的动态积累及喜树
果的最佳采收期有何不同有待进一步研究。
参考文献：
［１］　广西壮族自治区食品药品监督管理局．广西壮族自治
区壮药质量标准［Ｍ］．南宁：广西科技出版社，２００８：
１８６．
［２］　陈　鹏，雷德林，刘　冰，等．羟基喜树碱对人舌癌细胞
的抑制作用及端粒酶活性的影响［Ｊ］．中国现代医学杂
志，２００４，１４（１）：７２－７４．
［３］　黄瑞松，叶云峰，梁启成，等．ＨＰＬＣ法测定不同产地喜
树果中喜树碱［Ｊ］．中草药，２００９，４０（１）：１３７－１４０．
［４］　张丽艳，杨玉琴．反高效液相色谱法测定喜树果实中喜
树碱的含量［Ｊ］．中国中药杂志，１９９７，２２（４）：２３４－２３５．
·０８６· 广西医科大学学报　２０１１Ｏｃｔ；２８（５）