全 文 ：学 报
Journal of China Pharmaceutical University 2015，46(2) :219 － 223
收稿日期 2014-10-20 * 通信作者 Tel:025 － 83271090 E-mail:cqsongmin@ sina. com
HPLC法同时测定芦根中对香豆酸和阿魏酸含量
潘春燕，陈 静，杭太俊，宋 敏
*
(中国药科大学药物分析学教研室，南京 210009)
摘 要 采用 HPLC法同时测定对香豆酸和阿魏酸的含量以评价芦根质量。芦根经碱性乙醇水溶液回流提取对香豆
酸和阿魏酸，Diamonsil C18柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，乙腈-0. 3%醋酸水溶液流动相梯度洗脱分离，紫外 310 nm 波长检
测。对香豆酸和阿魏酸分别在 0. 2 ～ 200 μg /mL和 0. 1 ～ 120 μg /mL范围有良好线性，平均回收率分别为(96. 9 ± 2. 91)%
和(98. 7 ± 1. 78)%。测得 15 批市售芦根饮片中对香豆酸和阿魏酸的含量(珋x ± s，max ～ min)分别为(0. 88 ± 0. 16，1. 21 ～
0. 70)%和(0. 41 ± 0. 035，0. 49 ～ 0. 36)%。所建立的对香豆酸和阿魏酸含量的同时测定方法可用于芦根质量的评价。
关键词 芦根;对香豆酸;阿魏酸;含量测定;HPLC
中图分类号 Ｒ917 文献标志码 A 文章编号 1000 － 5048(2015)02 － 0219 － 05
doi:10． 11665 / j． issn． 1000 － 5048． 20150214
Simultaneous determination of p-coumaric acid and ferulic acid in Ｒhizama
Phragmitis by HPLC
PAN Chunyan，CHEN Jing，HANG Taijun，SONG Min*
Department of Pharmaceutical Analysis，China Pharmaceutical University，China
Abstract To determine the contents of p-coumaric acid and ferulic acid in Ｒhizama Phragmitis by HPLC for
quality evaluation. Ｒhizama Phragmitis alkaline alcoholic solution exact of p-coumaric acid and ferulic acid was
refluxed. An HPLC method was developed by using a Diamonsil C18 ( 4. 6 mm ×250 mm，5 μm) column，and the
mobile phase of acetonitrile and 0. 3% acetic acid with linear gradient elution at a flow of 1. 0 mL /min and UV
detection at 310 nm. Calibration curvers of p-coumaric acid and ferulic acid were linear over the range of 0. 2-200
μg /mL and 0. 1-120 μg /mL respectively. . Average recoveries were ( 96. 9 ± 2. 91) % and ( 98. 7 ± 1. 78) % ，
respectively. The average contents of p-coumaric acid and ferulic acid expressed as mean ± sd ( max-min) were
( 0. 88 ± 0. 16 ) % ( 1. 21% -0. 70% ) and ( 0. 41 ± 0. 035 ) % ( 0. 49% -0. 36% ) in 15 batches of Ｒhizama
Phragmitis. The established method will be beneficial to the quality evaluation of Ｒhizama Phragmitis.
Key words Ｒhizama Phragmitis; p-coumaric acid; ferulic acid; determination of content; HPLC
芦根(Phragmitis Ｒhizama)为禾本科植物芦苇
(Phragmites communis Trin. )的新鲜干燥根茎，收
载于《中华人民共和国药典:一部》［1］(2010 版)。
芦根性寒味甘，具有清热除烦、止呕利尿之功效，临
床主要用于治疗发热、支气管炎、尿路感染、止呕等
症［2］。芦根所含化学成分主要有多糖、甾体类和
酚酸类。目前芦根化学成分所进行的研究大部分
都针对其多糖类成分及酚酸类成分阿魏酸的分离
与测定［3－ 9］。药理学实验表明，酚酸类成分具有清
热、止呕、抗菌消炎的作用，与芦根的治疗发热、止
呕的功效相吻合［10－ 13］。《中华人民共和国药典》
(2010 版)中未见有芦根的含量测定控制项。
本研究针对芦根中的酚酸类成分进行了
HPLC-MS鉴定研究，首次证明了芦根中同时含有
阿魏酸和对香豆酸(图 1) ，研究建立了芦根中对香
豆酸和阿魏酸含量的 HPLC同时测定法，并对市售
不同产地芦根药材饮片进行测定分析，可为芦根的
质量控制提供参考。
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学 报 Journal of China Pharmaceutical University 2015，46(2):219 － 223 第 46 卷
Figure 1 Chemical structures of p-coumaric acid and ferulic acid
1 材 料
1. 1 药品与试剂
芦根饮片 15 批，分别收集于福建、河北、江苏、
新疆、四川、安徽和湖北药材产地，经鉴定均为芦根
(Phragmitis Ｒhizama)。
阿魏酸对照品(中国食品药品检定研究院，纯
度 99. 6%) ;对香豆酸对照品(Sigma Aldrich 公司，
纯度≥98. 0%) ;乙腈(分析纯，南京化学试剂公
司) ;乙酸(分析纯，南京化学试剂公司) ;氢氧化钠
(分析纯，国药集团化学试剂有限公司) ;盐酸(分
析纯，南京化学试剂公司) ;重蒸水(自制)。
1. 2 仪 器
Thermo-Finnigan TSQ Quantum Ultra AM 型液
质联用仪(美国 Thermo Fisher公司，Xcalibur1. 2 数
据处理系统) ;LC-2010HT 高效液相色谱仪(日本
岛津公司) ;Agilent 6224 TOF /MS 液质联用仪(美
国 Agilent 公司，MassHunter 数据处理系统) ;BS
21S、110S型电子天平(德国 Sartorius公司)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
Diamonsil C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱
柱，乙腈-0. 3%醋酸水溶液(5∶ 95)流动相 A，乙腈-
0. 3%醋酸水溶液(20∶ 80)流动相 B，线性梯度洗脱
(A∶ B) :0 min(100 ∶ 0)→30 min(0 ∶ 100)→36 min
(0∶ 100)→38 min(100∶ 0)→43 min(100∶ 0) ，流速
1 mL /min，柱温 40 ℃，紫外 310 nm 检测，进样量
10 μL。在此条件下，供试品溶液中对香豆酸和阿
魏酸分离度良好，不受其他成分干扰(图 2)。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液 取对香豆酸对照品约
20 mg，精密称定，置 100 mL量瓶中，加甲醇溶解并
定量稀释至刻度，摇匀，作为对香豆酸储备液;精密
量取该溶液 4 mL，置 10 mL量瓶，加初始比例的流
动相稀释至刻度，摇匀，制得对香豆酸对照溶液
(80 μg /mL)。取阿魏酸对照品约 12 mg，精密称
定，置 100 mL量瓶中，加甲醇溶解并定量稀释至刻
度，摇匀，作为阿魏酸储备液;精密量取该溶液
5 mL，置 10 mL 量瓶中，加初始比例的流动相稀释
至刻度，摇匀，制得阿魏酸对照溶液(60 μg /mL)。
2. 2. 2 供试品溶液 取药材粉末(过 40 目筛)约
0. 25 g，精密称定，置 100 mL 圆底烧瓶中，精密加
入含 0. 3 mol /L氢氧化钠的 70%乙醇溶液 25 mL，
精密称定总重量后，于沸水浴回流 1 h，取出，冷却
至室温后，用 70%乙醇溶液补足重量，摇匀，滤过，
精密量取续滤液与等量的含 0. 3 mol /L 盐酸的
70%乙醇溶液混合均匀后，经 0. 22 μm 有机微孔
滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2. 3 系统适用性试验
精密量取等量的对香豆酸与阿魏酸对照溶液，
混合均匀，即得系统适用性试验溶液。
精密吸取系统适用性溶液 10 μL，注入色谱
仪，记录色谱图(图 2) ，对香豆酸和阿魏酸色谱峰
之间的分离度应大于 5，以对香豆酸色谱峰计算理
论塔板数应大于 5 000。
1:p-Coumaric acid;2:Ferulic acid
Figure 2 HPLC chromatograms of system solution (A)and blank
extract solution (B)
2. 4 线性关系
精密吸取“2. 2. 1”项下的对照品储备液，分别
加起始比例流动相依次定量稀释 4 /5、3 /5、1 /5、1 /
20、1 /50、1 /100、1 /200 和 1 /1 000 倍，作为系列标
准溶液，各精密吸取 10 μL，注入液相色谱仪，记录
色谱图。分别以对香豆酸与阿魏酸的峰面积(Y)
为纵坐标，标准溶液的质量浓度(对香豆酸 0. 2 ～
200 μg /mL，阿魏酸 0. 12 ～ 120 μg /mL)为横坐标
进行线性回归。
结果表明，对香豆酸和阿魏酸分别在 0. 2 ～
200 μg /mL和 0. 12 ～ 120 μg /mL范围内线性良好。
对香豆酸的回归方程为 Y = 87 018X － 33 117(r =
0. 999 0) ，阿魏酸的回归方程为 Y = 53 092X －
22 703(r = 0. 999 0)。
022
第 46 卷第 2 期 潘春燕等:HPLC法同时测定芦根中对香豆酸和阿魏酸含量
2. 5 精密度
取同一供试品溶液，依“2. 1”项下条件连续
测定 6 次，记录对香豆酸和阿魏酸的色谱峰面
积。结果表明，对 香 豆 酸 峰 面 积 的 ＲSD 为
0. 45%，阿魏酸峰面积的 ＲSD 为 0. 24%。本法
测定精密度良好。
2. 6 重复性
取同一批(LG-2011-S-4，第 6 批)芦根药材 6
份，按“2. 2. 2”项下方法制备供试品溶液，按外标
法，以峰面积计算含量。结果，对香豆酸含量平均
值为 0. 68%(n = 6，ＲSD 0. 47%) ，阿魏酸含量平均
值为 0. 41%(n = 6，ＲSD 1. 8%)。结果表明，该测
定法重复性良好。
2. 7 稳定性
取供试品溶液，分别在 0 ～ 24 h 放置不同时间
后进样分析。测得对香豆酸峰面积的 ＲSD 为
1. 13%，阿魏酸峰面积的 ＲSD 为 1. 98%。说明供
试品溶液在 24 h内稳定。
2. 8 回收率
取已测定含量的芦根药材粉末约 0. 125 g，精
密称定 9 份，分别加入相当于已知含量的 80%、
100%、120%的对香豆酸和阿魏酸对照品溶液，配
制低、中、高水平的加样溶液各 3 份。按“2. 2. 2”
项下供试品溶液的制备方法进行制备，按“2. 1”项
下色谱方法进样分析，计算加样回收率。结果，对
香豆酸平均回收率为(96. 9 ± 2. 91)%，阿魏酸平
均回收率为(98. 7 ± 1. 78)%。
2. 9 样品测定
取芦根药材按上述方法制备供试品溶液，每批
样品制备两份，各份溶液在上述色谱条件下分别进
样 2 次，按外标法以峰面积计算含量。结果(表 1)
表明，市售芦根饮片中对香豆酸和阿魏酸的含量
(珋x ± s，max ～ min)分别为(0. 88 ± 0. 16，1. 21 ～
0. 70)%和(0. 41 ± 0. 035，0. 49 ～ 0. 36)%，芦根酚
酸类成分中对香豆酸的含量明显高于阿魏酸的含
量(约为 2 倍)。
Table 1 Contents of p-coumaric acid and ferulic acid in Phragmitis Ｒhizama from different origins (珋x ± s，n = 2)
No. Batch No. Origin Variety Harvesting time p-Coumaric acid /% Ferulic acid /%
1 LG-2010-A-1 Fujian Big Autumn，2010 1. 21 ± 0. 04 0. 42 ± 0. 01
2 LG-2010-A-2 Fujian Big Autumn，2010 1. 17 ± 0. 05 0. 41 ± 0. 00
3 LG-2011-S-1 Fujian Big Spring，2011 0. 87 ± 0. 02 0. 40 ± 0. 02
4 LG-2011-S-2 Fujian Big Spring，2011 1. 00 ± 0. 02 0. 39 ± 0. 01
5 LG-2011-S-3 Fujian Big Spring，2011 0. 92 ± 0. 04 0. 37 ± 0. 00
6 LG-2011-S-4 Fujian Big Spring，2011 0. 70 ± 0. 00 0. 40 ± 0. 01
7 LG-2011-S-5 Fujian Big Spring，2011 0. 72 ± 0. 02 0. 36 ± 0. 00
8 LG-2011-S-6 Fujian Big Spring，2011 0. 71 ± 0. 02 0. 39 ± 0. 01
9 140528 Hebei Big Spring，2014 0. 93 ± 0. 00 0. 42 ± 0. 00
10 140528 Hebei Small Spring，2014 0. 87 ± 0. 01 0. 49 ± 0. 04
11 140502 Jiangsu Small Spring，2014 0. 70 ± 0. 01 0. 46 ± 0. 00
12 20140615 Xinjiang Small Spring，2014 0. 78 ± 0. 00 0. 38 ± 0. 01
13 140608 Sichuan Small Spring，2014 0. 83 ± 0. 02 0. 43 ± 0. 00
14 140621 Anhui Small Spring，2014 0. 94 ± 0. 02 0. 39 ± 0. 03
15 140608 Hubei Small Spring，2014 0. 84 ± 0. 00 0. 37 ± 0. 01
3 讨 论
3. 1 对香豆酸的确定
参照文献［3］对芦根药材中的阿魏酸进行测
定，结果发现，阿魏酸色谱峰前存在含量较高的未
知特征成分峰，并且未有相关文献对此成分进行鉴
定或含量测定。
经 LC-TOF /MS分析可知，此成分［M + H］+为
165. 060 3，［M + Na］+为 187. 045 4，［M － H］－为
163. 010 1，此成分的质量数应为 164。经 LC-
ESI + -MS /MS分析得特征碎片离子峰有:91、119、
147。结合此化合物是经含氢氧化钠的乙醇溶液提
取产生，且极性与阿魏酸相近，证明为酚酸类成分。
同时根据 MS /MS 碎片的裂解(图 3)分析，推定为
对香豆酸。
取市售对香豆酸对照品进行对比分析确证。
结果表明，色谱保留时间、质谱准分子离子峰和
二级碎片离子，均与此未知成分一致。因此，首
次证明，芦根药材中同时含有对香豆酸和阿
魏酸。
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学 报 Journal of China Pharmaceutical University 2015，46(2):219 － 223 第 46 卷
Figure 3 LC-MS /MS spectrum and proposed fragmentation pathway of
p-coumaric acid
3. 2 测定波长的选择
分别取对香豆酸和阿魏酸对照品适量，用甲醇
溶解，在 200 ～ 400 nm波长范围内扫描。结果对香
豆酸和阿魏酸分别在 310 和 316 nm 处有最大吸
收，两者的最大吸收波长接近，故实验选择 310 nm
为测定波长。
3. 3 提取方法的优化
对香豆酸和阿魏酸溶于热水和乙醇、乙醚、甲
醇等有机溶剂，几乎不溶于苯和石油醚。《中华人
民共和国药典》(2010 版)中银翘伤风胶囊和维 C
银翘片均含有芦根药材，均以水提制得的浸膏入
药。本研究曾尝试用水、甲醇溶液、乙醇溶液对芦
根药材进行提取，发现阿魏酸和对香豆酸均为响应
最大的物质。《中华人民共和国药典》(2010 版)
未见有芦根的含量测定控制项。
结合阿魏酸和对香豆酸的性质和相关文
献［3，14－ 19］，用含碱的乙醇或甲醇溶液对芦根药材进
行回流提取，考察了甲醇、乙醇的比例以及氢氧化
钠的加入量。结果发现，乙醇提取能解决芦根药材
中淀粉水解的黏性问题，且较好地除去鞣质等不溶
物质，提取效果优于甲醇和水，而含碱的乙醇-水溶
液的提取效果要优于乙醇-水溶液。经优化最终选
定含 0. 3 mol /L NaOH 的 70%乙醇溶液作为提取
溶剂。
3. 4 含量差异分析
芦根在中国有两个品种及一个变种［20］，试验
所收集到的芦根药材主要为大、小芦根两个品种。
不同产地、不同采收时间及不同品种的芦根［21－ 23］
中，所含阿魏酸量均约在 0. 4%，含量波动较小，大
芦根中所含对香豆酸的含量均并明显高于小芦根
中对香豆酸的含量。试验还发现不论是何种提取
剂，芦根药材中对香豆酸的含量均比阿魏酸含
量高。
阿魏酸有顺反异构体，在药材同时存在。反式
阿魏酸更稳定，高浓度的反式阿魏酸在存放过程中
仅有少部分(约 1%)转换为顺式［24］。在色谱图
中，顺式阿魏酸紧邻反式阿魏酸后出峰，芦根药材
酚酸的定量分析中，均以反式阿魏酸作为对照品进
行测定。
4 小 结
对香豆酸与阿魏酸结构相似，同属于芳香族酚
酸类物质，具有抗高血脂、抗菌、抗真菌、抗肝毒等
作用［11］，药理活性良好。
国内外文献均未见芦根药材中对香豆酸含量
测定的报道。本研究采用联用技术鉴定确证芦根
药材中含有对香豆酸，并建立了适用于芦根中对香
豆酸与阿魏酸同时测定的 HPLC法，可为芦根药材
的开发研究与质量控制提供参考。
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