全 文 ：2011 年 2月第 8卷第 4期 ·实验研究·
CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报
复方肝康颗粒（以下简称复方）是由五指毛桃根、羊蹄
根、淫羊藿等多味中药制成，具有保护肝脏和抗病毒作用 [1]。
五指毛桃根为该方主药，呋喃香豆素类化合物补骨脂素是其
主要有效成分，也是该方的主要有效成分之一，具有较强的
药理作用，如抗菌、抗病毒、抑制肿瘤、抗凝、免疫调节、雌激
素样作用和影响药物代谢等作用[2-5]。本研究采用高效液相色
谱法研究复方与五指毛桃根提取物中补骨脂素在大鼠体内
的药代动力学差别，探讨复方中药配伍对补骨脂素代谢的影
响。
1 仪器与试药
岛津公司高效液相色谱（HPLC）系统：SPD-10A VP 紫外
检测器，LC-10AT VP 泵, CBM-102 Communication Bus Mod-
ule 工作站及 HT-230A 柱温箱；复方（自制，批号 060305）；五
指毛桃根药材提取物（自制）；补骨脂素对照品（中国药品生
物制品检定所，批号 110739-200512）；氯霉素对照品（中国
药品生物制品检定所，批号 0303-9613）；乙腈（色谱纯，美国
TEDIA 公司）；冰醋酸（分析纯，天津化学试剂有限公司）；乙
酸乙酯（分析纯，天津化学试剂有限公司）；甲醇（分析纯，天
津化学试剂有限公司）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱: Shim-pack VP-ODS（4.6 mm ×150 mm，5.0 μm）；
流动相：乙腈-水（30∶70）；检测波长：295 nm；流速：1.0 ml/min；
内标：氯霉素；柱温：室温；进样量：20 μl。
[作者介绍] 段菊屏（1980- ），女，汉族，湖南衡阳人，长沙市第八医院药剂
科，主要从事临床药学研究。
中药复方及单味五指毛桃根中补骨脂素
大鼠体内药动学研究
段菊屏
（长沙市第八医院药剂科，湖南长沙 410010）
[摘要] 目的：建立反相高效液相色谱法，分别比较中药复方与单味五指毛桃根提取物中补骨脂素大鼠体内的药动学
差别，探讨中药复方对药效成分体内过程的影响。方法：实验大鼠分别灌胃中药复方、五指毛桃根提取物后，测定不同
时间点大鼠血浆中补骨脂素浓度，采用药动学程序 3P97 对数据进行统计学处理，进行药动学模型拟合并计算相关
药代动力学参数。 结果：复方及五指毛桃根中补骨脂素在大鼠体内均呈一室模型，复方中补骨脂素的吸收滞后时间
（Lag time）长于单味药材，其吸收速率常数（Ka）小，吸收半衰期 t1/2（ka） 长，吸收速度较慢，使得复方两次达峰时间较
晚；两者消除速率常数（Ke）、消除半衰期 t1/2（ke） 比较表明复方排泄较慢，在体内的作用时间稍长；曲线下面积复方大
于五指毛桃根，吸收多于后者，生物利用度相对高，两者在 Lag time、Tmax（1）及 Tmax（2）上存在显著性差异。 结论：中药复
方与单味药材体内药动学之间存在差异，其产生的原因可能与复方间的相互配伍，复方成型工艺或其中添加辅料有关。
[关键词] 药代动力学；五指毛桃根；补骨脂素；HPLC
[中图分类号] R969.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2011）02（a）-029－03
The pharmacokinetics of psoralen in compound recipe and hispid fig root in
rats
DUAN Juping
(Department of Pharmacy, the Eighth Hospital of Chasha City, Changsha 410010, China)
[Abstract] Objective: To compare the pharmacokinetics of psoralen in compound recipe and the extractive of hispid fig
root, through Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC) in rats respectively. To provide a new
way to investigate the effect of combination in physiological disposition. Methods: The rats were intragastric administered
with compound recipe and hispid fig root. The blood concentration of different time point were tested by the proposed es -
tablished RP-HPLC and sample processing. The blood concentration data analyzed by the pharmacokinetics program 3P97
were used to determine the parameters of pharmacokinetics and the compart-mental model. Results: Psoralen in compound
recipe and the extractive of hispid fig root showed one compartment model in rats. There were significant difference be -
tween compound recipe and hispid fig root in Lag time,Tmax(1) and Tmax(2). Compound recipe had slower absorption rate,
higher AUC and bioavailability than hispid fig root. Conclusion: There is significant difference between compound recipe
and hispid fig root on pharmacokinetics in vivo. The probably reason of them are intercompatibility, modeling technique
and adjuvant of compound recipe.
[Key words] Pharmacokinetics; Hispid fig root; Psoralen; HPLC
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2.2 血浆样品的处理方法
取血浆样品 0.5 ml 加入乙醚 2 ml，旋涡混合提取 3 min，
离心（3 000 r/min，5 min）取乙醚层，水相再用 2 ml 乙醚同法
萃取一次，合并乙醚液，37℃水浴氮气吹干，残渣加入 100 μl
甲醇漩涡振荡 1 min 溶解，高速离心（10 000 r/min，2 min），
取上清液 20 μl进样。
2.3 药动学研究
取健康雄性 SD 大鼠 120 只，体重（200±20）g，随机分为
24 组，每组 5只，其中 12 组给予复方，另 12 组给予五指毛桃
根提取物。 实验前禁食（不禁水）12 h，第 2 天按体重灌胃给
予复方（4.30 g/kg）和五指毛桃根提取物[2.24 g（生药）/kg]，相
当于补骨脂素 3.20 mg/kg， 灌胃后于 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、
3.0、3.5、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0 h 尾静脉采血 1 ml，置于预先
肝素化的试管中，离心（3 000 r/min，10 min），取上层血浆 0.5 ml
放入-20℃冰箱保存备用，每 1 个时间点取 5只大鼠。
2.4 分析方法验证
2.4.1 系统适用性试验 理论塔板数按补骨脂素计算不小于
5 000，该峰与其相邻色谱峰的分离度大于 1.5，对称因子小
于 1.20。
2.4.2 方法专属性 0.5 ml 空白血浆不加样，0.5 ml 空白血浆
中加入补骨脂素和内标物氯霉素对照品及 0.5 ml 给药后大
鼠血浆，按照“2.2”项下处理血浆样品后，分别观察其色谱行
为，结果表明血浆中内源性物质不干扰补骨脂素和内标物的
测定，并且二者峰形良好。 补骨脂素和内标物氯霉素的保留
时间分别是 14.4、6.6 min，见图 1。
图 1 典型色谱图
（A.空白血浆；B.空白血浆+补骨脂素标准品+内标氯霉素；C.大鼠灌
胃复方后的血浆样品；D.大鼠灌胃五指毛桃根提取物后的血浆样品）
Fig.1 Representative chromatograms
(A.Blank plasma;B.Blank plasma with psoralen standard and
internalstandard chlormycetin;C.Plasma sample of rat intragastric
administration with compound recipe;D. Plasma sample of a rat intragastric
administration with extractive of hispid fig root)
2.4.3 标准工作曲线及最低检测限测定 精密量取补骨脂素
贮备液适量 ， 用甲醇稀释制成 10.0、5.0、2.5、1.0、0.5、0.25、
0.062 5 μg/ml 的补骨脂素系列对照品溶液， 于 4℃保存，备
用。标准工作曲线的绘制：取 500 μl空白血浆 7份，分别加入
不同浓度补骨脂素系列标准品溶液 100 μl及内标溶液 50 μl，
漩涡振荡混匀后，按“2.2”项下操作，分别记录色谱图。 以补
骨脂素与内标物的峰面积比值为纵坐标（Y），补骨脂素浓度
为横坐标（X，μg/ml）作图进行直线回归，得标准曲线和回归
方程：Y=0.049 3X+0.004 8，r=0.999 3，本方法补骨脂素 0.062
5~10.0 μg/ml 范围内线性良好。以信噪比 S/N≥3时的浓度定
为最低检测浓度，得方法定量限为 0.062 5 μg/ml。
2.4.4 精密度试验 取空白血浆 500 μl， 精密加入浓度分别
为 10.0、5.0、0.5 μg/ml 的补骨脂素标准品 100 μl 及内标溶液
50 μl，漩涡振荡混匀后，按“2.2”项下处理，每一浓度进行 6个
样本分析，与标准工作曲线同时进行计算血浆样品的浓度，求
得方法的日内与日间精密度 RSD： 日内 RSD 分别为 4.38%、
5.10%、8.33%；日间 RSD 分别为 4.68%、5.37%、8.02%。
2.4.5 提取回收率 取空白血浆 500 μl，精密加入浓度分别为
10.0，5.0 ，0.50 μg/ml的补骨脂素对照品 100 μl， 每个浓度取
6个样本，按“2.2”项下操作，测得血浆样品浓度，以样品经提
取后的色谱峰面积与未经提取直接进样获得的色谱峰面积
之比，考察样品的提取回收率及其 RSD，结果分别为：回收率
81.39%、81.07%、80.97%；RSD 2.35%、3.37%、3.14%。
2.4.6 重复性试验 精密称取适量补骨脂素标准品 6 份，分
别置具塞试管中用 10 ml 甲醇溶解，每份样品取 100 μl 加入
500 μl 的空白血浆中，并加入 50 μl 内标溶液，按“2.2”项下
处理，依法测定，记录色谱图，求得 RSD 为 4. 54%，表明本法
重复性好。
2.4.7 溶液稳定性 取空白血浆 500 μl， 精密加入浓度分别
为 10.0、5.0、0.5 μg/ml 的补骨脂素对照品 100 μl 及内标溶液
50 μl，每个浓度取 6 个样本，按“2.2”项下操作，进样 20 μl
记录样品的峰面积，剩余样本置于室温保存（约 28℃）6、12、
24 h 后重新测定，将三个浓度各时间点所测得的峰面积比进
行对照，计算 RSD（%）。测得各浓度样品的 RSD分别为 0.97%、
6.31%、8.48%，实验结果表明，血浆样品经处理后于室温保存
24 h 后，血浆中补骨脂素浓度仍可被准确测定。
2.5 药动学研究结果
复方和五指毛桃根中补骨脂素在大鼠体内均呈一室模
型主要药代动力学参数主要药动学参数见表 1， 其平均药-
时曲线见图 2。
3 讨论
补骨脂素作为五指毛桃根中最有价值的质量评价指标，
对机体具有抗菌、抗病毒、抑制肿瘤、抗凝、免疫调节、雌激素
样作用和影响药物代谢等多种作用，已引起了大家的关注和
兴趣。 目前对于它的研究已经由简单测定药物中其含量，转
化为药物体内代谢动力学等方面的研究，如 GC 法测定人血
浆中补骨脂素和异补骨脂素的浓度 [6]LC-MS 法测定大鼠体
内补骨脂素及异补骨脂素的药动学、组织分布和代谢 [7]，利
用UPLC/MS/MS 研究口服给药海狗丸后大鼠血浆中补骨脂
素及异补骨脂素药代动力学变化 [8]，研究中涉及 GC、LC-MS、
UPLC/MS/MS 等仪器， 在生物样品的分析中 MS 较 HPLC 具
有更高的灵敏度及定性能力，但 MS 存在仪器价格高，使用
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A（μg/ml）
Cmax（1）（μg/ml）
Cmax（2）（μg/ml）
t1/2（ka）（h）
t1/2（ke）（h）
Lag time（h）
Ke（/h）
Ka（/h）
Tmax（1）（h）
Tmax（2）（h）
AUC0-24（μg·h/ml）
CL（s） [L/（h·kg）]
V/F（c） （L）
参数 复方 五指毛桃根提取物
8.123±1.000
2.705±0.459
2.491±0.380
1.262±0.132
2.745±0.360
1.118±0.109
0.256±0.032
0.554±0.055
3.000±0.000
4.000±0.000
18.469±4.286
0.038±0.009
0.148±0.019
9.327±1.829
2.772±0.221
2.422±0.165
1.148±0.168
2.317±0.526
0.954±0.095*
0.311±0.069
0.613±0.079
2.600±0.224*
3.600±0.224*
15.051±2.632
0.044±0.007
0.141±0.011
成本费远高于 HPLC 的缺点，因此 HPLC 法仍是目前中药活
性成分体液药物浓度测定的不可缺少的办法。本研究中为了
将血浆中多种成分很好的分离，分别比较乙酸乙酯–正己烷
（13∶1，V/V）萃取法，乙醚萃取法，甲醇和乙腈沉淀法处理样
品，及采用不同比例的流动相体系进行筛选，以色谱图和回
收率作为指标， 最后确定使用乙醚萃取法处理， 以乙腈∶水
（30∶70）为流动相能将补骨脂素与相邻峰的完全基线分离（分离
度大于 1.5），所得补骨脂素峰形良好（对称因子小于 1.2），其
保留时间和峰面积能够准确测定。
大鼠灌胃后复方和五指毛桃根后，血药浓度数据经房室
拟合后显示，补骨酯素在大鼠体内均呈一室模型，复方中补
骨脂素的吸收滞后时间（Lag time）长于单味药材，其吸收速
率常数（Ka）小，吸收半衰期 t1/2（ka） 长，吸收速度较慢，使得
复方两次达峰时间较晚；两者消除速率常数（Ke），消除半衰
期 t1/2（ke） 比较，表明复方排泄较慢，在体内的作用时间稍
长；曲线下面积复方大于五指毛桃根，吸收多于后者，生物利
用度相对高 ，两者 Lag time， Tmax （1）及 Tmax （2）经 t 检验 （P＜
0.05），说明之间具有显著性差异，其他参数在复方和单味药
材之间经 t 检验后并无显著性差异。 从血药浓度-时间曲线
可以看出，血浆中补骨脂素皆出现明显的“双峰”现象，与文
献报道 [9-10]情况相符，它可引起药物向组织和器官再分布，延
长药物在体内的逗留时间，相应延长药物的作用时间。 双峰
现象产生的原因有多种，其中主要的有肠-肝循环，胃-肠循
环，肠-肠循环，药物吸收时间与吸收速率不一致，伪双峰现
象等[11]。 补骨酯素双峰现象的原因可能与肠-肝循环有关，因
补骨脂素在体内可经胆汁排泄而清除[12]， 胆汁中的补骨脂素
在肝内经历Ⅱ相代谢反应，60%～70%以结合型式存在， 补骨
脂内酯的葡萄糖醛酸结合物由胆汁排泄进入小肠，被肠内菌
丛水解，补骨脂素从结合物中释放出来，被肠上皮吸收，经过
肝脏重新进入血液循环。
该研究发现，复方与五指毛桃根相比较大鼠体内药动学
上存在差异，其产生的原因可能是复方间的相互配伍，复方
成型工艺或其中添加辅料的影响，说明中药复方药理作用的
发挥并不是简单的单味药效相加或减，而是方中药物互相发
生协同、制约等作用；研究同时说明不能以用单味药的药动
学研究结果，来代替复方在体内的药动学。 该研究对于阐明
中药复方的配伍规律、作用机制，指导临床合理用药和促进
中药现代化等有重要意义。
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（收稿日期：2010-12-06）
表 1 大鼠口服复方和五指毛桃根提取物后的主要药动学参数（n=5）
Tab.1 Main kinetic parameter of compound recipe and extractive of
hispid fig root (n=5)
两组间比较，*P<0.05， **P<0.01
Between the two groups, *P<0.05,**P<0.01
图 2 复方和五指毛桃根中补骨脂素药-时曲线
Fig.2 The concetration-curve of the plasma aftert intragastric
administration with compound recipe and extractive of hispid fig root
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