全 文 ：化学与生物工程 ２０１５，Ｖｏｌ．３２Ｎｏ．０７　ｗｗｗ．ｈｘｙｓｗｇｃ．ｃｏｍ 　 　
　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　＆Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
４１　
收稿日期：２０１５－０２－１４
作者简介：张曜武（１９５５－），男，山东烟台人，副教授，研究方向：天然产物提取分离和中药制剂现代化，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｙｗ９８３３＠１６３．ｃｏｍ。
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－５４２５．２０１５．０７．０１１
红松松塔残渣多糖的抗氧化活性研究
张曜武，高　原
（青岛科技大学化工学院，山东 青岛２６６０４２）
摘　要：采用水提醇沉法从红松松塔残渣中提取多糖，从还原能力、清除羟基自由基和ＤＰＰＨ自由基能力等３个方
面研究该多糖的体外抗氧化活性。结果表明，红松松塔残渣中的多糖具有较强的还原能力及清除羟基自由基和ＤＰＰＨ
自由基能力，并且呈现良好的量效关系。红松松塔残渣中的多糖仍具有较好的体外抗氧化活性，松塔残渣的综合利用值
得关注。
关键词：红松；松塔残渣；多糖；抗氧化活性
中图分类号：ＴＱ　４６１　Ｒ　２８４　　　　文献标识码：Ａ　　　　文章编号：１６７２－５４２５（２０１５）０７－００４１－０３
　　研究表明，植物多糖具有抗肿瘤［１］、抗病毒［２］、抗
菌［３］、抗氧化［４］等重要生物活性，其中的抗氧化活性已
引起许多学者的关注。已知抗氧化剂能够阻止或延缓
体内的脂质过氧化，减少自由基对机体细胞及细胞组
分的损伤，降低相关疾病的发病率［５］。因此，从植物中
寻找天然抗氧化剂已成为当前的研究热点。
本实验所用的松塔来自松科松属植物红松（Ｐｉｎｕｓ
ｋｏｒａｉｅｎｓｉｓ）的球果，是摘除松子后的松球鳞片，其中含
有挥发油、多糖等多种活性成分，以往大多废弃。提取
过挥发油的红松松塔残渣中的多糖成分是否仍具有抗
氧化活性尚未见报道。作者从还原能力、清除羟基自
由基和ＤＰＰＨ 自由基能力等３个方面研究红松松塔
残渣中多糖成分的体外抗氧化活性，以期为松塔资源
的综合利用提供参考。
１　实验
１．１　材料、试剂与仪器
红松松塔，青岛天元普康生物技术有限公司。
无水葡萄糖、浓硫酸、苯酚、抗坏血酸、硫酸亚铁、
水杨酸、ＤＰＰＨ、铁氰化钾、三氯化铁、三氯乙酸、磷酸
氢二钠、磷酸二氢钠、乙醇（９５％）等均为分析纯。
ＦＡ１００４Ｎ型电子天平，上海精密科学仪器有限公
司；ＴＧＴ－１６Ｃ型台式高速离心机，上海安亭科学仪器
厂；Ｔ６新世纪紫外可见分光光度计，北京普析通用仪
器有限公司；ＫＤＭ型调温电热套，山东甄城华鲁仪器
厂；水浴恒温振荡器，上海跃进医疗器械厂；循环水式
多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；ＲＥ－５２型旋转
蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂。
１．２　方法
１．２．１　红松松塔残渣多糖的提取
取红松松塔干燥粉碎，以水蒸气蒸馏法提取挥发
油后，所得残渣加水煎煮，过滤，滤液浓缩、醇沉、干燥
得松塔残渣多糖。
１．２．２　松塔残渣多糖含量的测定
依据改良差示酚硫法测定［６］。配制葡萄糖对照品
溶液，依法测定，求得标准曲线回归方程 △Ａ＝
０．０１７７ｃ＋０．００１５（Ｒ＝０．９９９１）。
另精密称取２５ｍｇ松塔残渣多糖于１０ｍＬ具塞
试管中，依次用石油醚、乙醚、乙醇洗涤，离心，挥干乙
醇后置于锥形瓶中，加５０ｍＬ蒸馏水，于沸水浴中加
热使多糖溶解，趁热过滤，用热水冲洗锥形瓶和滤渣，
将洗液、滤液混合，转移至１００ｍＬ容量瓶中，定容，即
得多糖样品溶液。定量移取多糖样品溶液１．０ｍＬ，加
入显色液５．０ｍＬ，于沸水浴中保温３０ｍｉｎ，取出，流水
冷却，加入蒸馏水１．０ｍＬ，混匀后于４９０ｎｍ处测定吸
光度（Ａ１）；另取多糖样品溶液１．０ｍＬ，加入８３３ｍＬ·
Ｌ－１硫酸溶液５．０ｍＬ，于沸水浴中保温３０ｍｉｎ，取出，
流水冷却，加入５０ｇ·Ｌ－１苯酚溶液１．０ｍＬ，混匀后
于４９０ｎｍ处测定吸光度（Ａ２），由Ａ１、Ａ２ 两者之差求
得△Ａ。
　 张曜武等：红松松塔残渣多糖的抗氧化活性研究／２０１５年第７期４２　
根据标准曲线回归方程，计算样品液中的单糖质
量浓度（ｃ′），按下式计算红松松塔残渣多糖含量：
多糖含量＝ｃ′Ｄ／Ｗ×１００％
式中：ｃ′为样品液中单糖浓度，ｍｇ·ｍＬ－１；Ｄ为多
糖样品液的稀释倍数；Ｗ 为松塔残渣多糖样品质量，
ｍｇ。
１．２．３　松塔残渣多糖的抗氧化活性研究
１）还原能力测定
精密量取１ｍＬ不同质量浓度的多糖样品液，加
入２．５ｍＬ磷酸盐缓冲溶（０．２ｍｏｌ·Ｌ－１，ｐＨ值７．４）、
２．５ｍＬ铁氰化钾溶液（１．０％），混合均匀后置于５０℃
恒温水浴中保温２０ｍｉｎ，取出，迅速冷却，加入２．５ｍＬ
三氯乙酸溶液（１０％），混合均匀，于３　０００ｒ·ｍｉｎ－１离
心１０ｍｉｎ，吸取上清液２．５ｍＬ于另一试管中，加入
２．５ｍＬ蒸馏水和０．５ｍＬ三氯化铁溶液（０．１％），混
匀后静置１０ｍｉｎ，于７００ｎｍ处测定吸光度［７］。吸光
度越大，表明其还原能力越强。以抗坏血酸（Ｖｃ）为对
照。
２）清除羟基自由基能力测定
反应体系中依次加入９×１０－３　ｍｏｌ·Ｌ－１　ＦｅＳＯ４
溶液１ｍＬ、９×１０－３　ｍｏｌ·Ｌ－１水杨酸－乙醇溶液１ｍＬ
及１ｍＬ不同质量浓度的多糖样品液，最后加入６×
１０－３　ｍｏｌ·Ｌ－１　Ｈ２Ｏ２１ｍＬ，启动反应，３７℃水浴中反
应０．５ｈ，在５１０ｎｍ下测定各样品的吸光度，空白组
以相同体积蒸馏水代替样品溶液［８］。以 Ｖｃ为对照，
按下式计算样品对羟基自由基的清除率：
羟基自由基清除率＝Ａ０－
（ＡＸ－ＡＸ０）
Ａ０ ×１００％
式中：Ａ０ 为空白对照液的吸光度；ＡＸ 为加入多糖
样品液的吸光度；ＡＸ０为不加 Ｈ２Ｏ２ 时多糖样品液的本
底吸光度。
３）清除ＤＰＰＨ自由基能力测定
取不同质量浓度的多糖样品液２ｍＬ，分别加入１
×１０－４　ｍｏｌ·Ｌ－１的ＤＰＰＨ 溶液２ｍＬ，摇匀，室温避
光静置３０ｍｉｎ，以蒸馏水代替样品液为空白，在５１７
ｎｍ处测定吸光度［９］。以Ｖｃ为对照，按下式计算各样
品对ＤＰＰＨ自由基的清除率：
ＤＰＰＨ自由基清除率＝Ａ０－
（Ａｉ－Ａｊ）
Ａ０ ×１００％
式中：Ａ０ 为蒸馏水加ＤＰＰＨ溶液的吸光度；Ａｉ为
多糖样品液加ＤＰＰＨ溶液的吸光度；Ａｊ为多糖样品液
的本底吸光度。
２　结果与讨论
２．１　多糖含量测定
按１．２．２方法测得松塔残渣多糖的含量为３８％。
２．２　松塔残渣多糖的还原能力（图１）
图１　多糖和Ｖｃ的还原能力
Ｆｉｇ．１　Ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｃａｐａｃｉｔｙ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ａｎｄ　Ｖｃ
　　由图１可知，松塔残渣多糖表现出较强的还原能
力，但弱于 Ｖｃ。其还原能力随多糖浓度的升高而增
强，当多糖浓度为１．５ｍｇ·ｍＬ－１时，松塔残渣多糖在
７００ｎｍ下的吸光度最大为０．７０２。
２．３　松塔残渣多糖对羟基自由基的清除能力 （图２）
多糖浓度，１～５：１、２、５、８、１０　Ｖｃ浓度，１～５：０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３
图２　多糖和Ｖｃ对羟基自由基的清除能力
Ｆｉｇ．２　Ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ
ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ａｎｄ　Ｖｃ
　　由图２可知，随着松塔残渣多糖与 Ｖｃ浓度的升
高，对羟基自由基的清除能力增强，当多糖浓度为１０
ｍｇ·ｍＬ－１时，对羟基自由基的清除率达到７３．６５％。
Ｖｃ对羟基自由基的清除能力优于松塔残渣多糖，当
Ｖｃ的浓度为０．３ｍｇ·ｍＬ－１时，清除率达到９１．９４％。
松塔残渣多糖和Ｖｃ对羟基自由基的清除活性的ＩＣ５０
值分别为３．６９０ｍｇ·ｍＬ－１和０．１２０ｍｇ·ｍＬ－１。
２．４　松塔残渣多糖对ＤＰＰＨ自由基的清除能力（图３）
由图３可知，在实验浓度范围内，松塔残渣多糖对
ＤＰＰＨ自由基清除能力随多糖浓度的升高而逐渐增
强。松塔残渣多糖对 ＤＰＰＨ 自由基清除能力弱于
Ｖｃ。当多糖浓度为１０ｍｇ·ｍＬ－１时，对ＤＰＰＨ自由
张曜武等：红松松塔残渣多糖的抗氧化活性研究／２０１５年第７期 　４３　
多糖浓度，１～５：１、２、５、８、１０　Ｖｃ浓度，１～５：０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３
图３　多糖和Ｖｃ对ＤＰＰＨ自由基的清除作用
Ｆｉｇ．３　ＤＰＰＨ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ
ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ａｎｄ　Ｖｃ
基清除率为８０．５７％。Ｖｃ浓度为０．３ｍｇ·ｍＬ－１时，
清除率达到９３．６２％。松塔残渣多糖和 Ｖｃ对ＤＰＰＨ
自由基的清除活性ＩＣ５０值分别为２．７９４ｍｇ·ｍＬ－１和
０．１１２ｍｇ·ｍＬ－１。
３　结论
研究了水蒸气蒸馏法提取挥发油后的红松松塔残
渣中的多糖的体外抗氧化活性。结果表明，在实验浓
度范围内，多糖的还原能力随浓度的升高而增强，当浓
度为１．５ｍｇ·ｍＬ－１时，吸光度最高为０．７０２。松塔残
渣多糖对羟基自由基和ＤＰＰＨ 自由基的清除能力也
随浓度的增大而升高，其ＩＣ５０值分别为３．６９０ｍｇ·
ｍＬ－１和２．７９４ｍｇ·ｍＬ－１。提取挥发油后的红松松
塔残渣中的多糖成分具有较好的体外抗氧化活性，其
综合利用和开发值得重视。本研究可为红松松塔残渣
中活性成分的综合利用提供参考。
参考文献：
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ｃｒｏｗａｖｅ　ｈｅａｔｉｎｇ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．Ｓｅｐａｒａ－
ｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，７３（３）：３７１－３７６．
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｆｒｏｍＰｉｎｕｓ
Ｋｏｒａｉｅｎｓｉｓ　Ｐｉｎｅ　Ｃｏｎｅ　Ｒｅｓｉｄｕｅ
ＺＨＡＮＧ　Ｙａｏ－ｗｕ，ＧＡＯ　Ｙｕａｎ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｑｉｎｇｄａｏ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｑｉｎｇｄａｏ　２６６０４２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｆｒｏｍＰｉｎｕｓ　ｋｏｒａｉｅｎｓｉｓ　ｐｉｎｅ　ｃｏｎｅ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｌ－
ｃｏｈｏｌ　ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ．Ｉｔｓ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｗａｓ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｂｙ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｃａｐａｃｉｔｙ，ｈｙ－
ｄｒｏｘｙｌ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ＤＰＰＨ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｂｉｌｉｔｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ，ｔｈｅ　ｐｏｌｙ－
ｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｆｒｏｍＰｉｎｕｓ　ｋｏｒａｉｅｎｓｉｓ　ｐｉｎｅ　ｃｏｎｅ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ｈａｄ　ｓｔｒｏｎｇｅｒ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｃａｐａｃｉｔｙ，ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎ－
ｇｉｎｇ　ａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ＤＰＰＨ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄ　ｉｔｓ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｈａｄ　ｇｏｏｄ　ｄｏｓｅ－ｅｆｆｅｃｔ　ｒｅｌａｔｉｏｎ－
ｓｈｉｐ．Ｔｈｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｐｉｎｕｓ　ｋｏｒａｉｅｎｓｉｓ　ｐｉｎｅ　ｃｏｎｅ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ｓｔｉｌ　ｈａｓ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ．Ｔｈｅ
ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｉｎｅ　ｃｏｎｅ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ｄｅｓｅｒｖｅｓ　ａｔｔｅｎｔｉｏｎ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｉｎｕｓ　ｋｏｒａｉｅｎｓｉｓ；ｐｉｎｅ　ｃｏｎｅ　ｒｅｓｉｄｕｅ；ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ