全 文 ：168.6(C=O), 150.4(C-5), 146.5(C-4), 124.1(C-
7), 121.6(C-2), 114.2(C-6), 112.2(C-3), 55.7(-
OCH3)。以上数据与文献 〔8〕报道一致 ,故鉴定化合
物 6为香草酸(vanilicacid)。
化合物 7:白色方晶(MeOH), mp168 ～ 170℃。
ESI-MSm/z365[ M+Na] + , 341 [ M-H] -。13 C-NMR
(125MHz, D2O)δ:103.7(C-2′), 92.2(C-1), 81.4
(C-3′), 76.4(C-4′), 74.0(C-5′), 72.6(C-3), 72.4
(C-2), 71.1(C-5), 69.2(C-4), 62.3(C-1′), 61.4
(C-6′), 60.1(C-6)。以上数据与文献 〔9〕报道一致 ,
故鉴定化合物 7为蔗糖(sucrose)。
参 考 文 献
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(2007-09-28收稿)
基金项目:广西自然科学基金项目(桂科自 0542055);广西大型仪器协作共用网资助项目(327-2006-016)作者简介:蒋明廉(1962-),男 ,广西桂林人 ,副主任中药师 ,硕士生导师 ,从事中药新产品开发和质量标准研究;Tel:0771-3122698, E-mail:jnl@nnifdc.com。
TLCS法对广西产喜树果中喜树碱含量动态积累的研究
蒋明廉 1, 3 ,黄瑞松2, 3 ,吴 毅 1 ,周芳礼 3 ,苏 青 2 ,韦爱艳 4
(1.广西南宁食品药品检验所 ,广西南宁 530001;2.广西民族医药研究所 ,广西南宁 530001;3.广西大学
化学化工学院 ,广西南宁 530004;4.广西中医学院 ,广西南宁 530001)
摘要 目的:建立喜树果药材中喜树碱含量的 TLCS测定方法 , 并对喜树果药材中喜树碱含量的动态积累进行
分析 , 确定喜树果的最佳采收期。方法:采用硅胶 H-CMC-Na薄层板 , 展开剂为氯仿-丙酮(7∶3), 单波长线性扫描 ,
λs=360 nm。结果:喜树碱在 0.0542 ～ 0.3252 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系 , 平均回收率为
97.13%, RSD=1.76%;6个产地不同时间采集喜树果药材喜树碱含量的动态积累情况相似 , 均为 8 ～ 9月份喜树碱
含量较高。结论:该方法简便 、准确 、可靠 ,可作为喜树果中喜树碱含量的测定方法;广西产喜树果最佳采收期应为
每年的 8 ～ 9月份。
关键词 喜树果;喜树碱;动态积累;薄层扫描法
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2008)05-0684-03
TheStudyofDynamicAcccumulationofCamptothecinin
CamptothecaacuminataFruitbyTLCS
JIANGMing-lian1 , 3 , HUANGRui-song2 , 3 , WUYi1 , ZHOUFang-li3 , SUQing2 , WEIAi-yan4
(1.NanningInstituteforFoodandDrugControl, Nanning530001, China;2.GuangxiInstituteofMinorityNationalityMedicineand
Pharmacology, Nanning530001, China;3.ColegeofChemistryandChemicalEngineering, GuangxiUniversity, Nanning530004,
China;4.GuangxiColegeofTraditionalChineseMedicine, Nanning530001, China)
Abstract Objective:ToestablishTLCscanningmethodforthedeterminationofcamptothecininCamptothecaacuminatafruit,
andanalysisthedynamicaccumulationofcamptothecininCamptothecaacuminatafruittofindoutthebestcolectionperiod.Methods:
SilicagelH-CMC-Nathinlayerplatewasadoptedinthedeterminationwithchloroform-acetone(7∶3)usedasdeeloper, Single-wave-
lengthandlinearscanningofTLCwasused, andthedetectionwavelengthwas360nm.Results:Therewasagoodlinearrelationship
forComptothecinwithintherangeof0.0542 ～ 0.3252 μg, theaveragerecoverywas97.13%, RSDwas1.76%.Conclusion:The
·684· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials 第 31卷第 5期 2008年 5月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.05.025
methodisaccurate, simpleandreliable, andcanbeusedforthedeterminationofcamptothecininCamptothecaacuminatafruitanddy-
namicaccumulationresearch.
Keywords Camptothecaacuminatafruit;Camptothecin;Dynamicaccumulation;TLCs
喜树果为珙桐科植物喜树 Camptothecaacumi-
nataDecaisne的干燥果实 。喜树亦称为旱莲 ,干张
树 ,水桐树。主要分布于我国西南各省区 ,特别是广
西境内资源丰富 。广西壮族民间常使用该药治疗各
种肿瘤 〔1〕。喜树碱(camptothecin)是喜树果中所含
的吲哚类生物碱〔2〕 ,具有显著的抗癌活性 ,是至今
发现的唯一专门通过抑制拓扑异构酶 Ⅰ发挥细胞毒
性的天然植物活性成分 〔3〕。喜树果现收载于 《广西
中药材标准 》,该标准没有含量测定项目〔1〕 ,未能严
格控制喜树果药材的质量 ,以至影响生产相关产品
的质量及药材临床应用的安全有效。文献报道多采
用 HPLC法测定喜树果中喜树碱含量 〔4〕 ,笔者在此
基础上 ,建立 TLCS法测定喜树果中喜树碱含量 ,取
得满意的结果 ,并对不同时期喜树果中喜树碱成分
的动态积累进行了研究 ,为确定广西产喜树果最佳
采收期提供科学依据 。
1 仪器与材料
1.1 仪器 CS-9301PC薄层扫描仪(日本岛津),
939型全自动薄层制板仪(重庆南岸贝尔德仪器技
术厂),定量毛细管 (USADrummondScientificlo),
AE-240型 1 /105 电子天平 (瑞士梅特勒公司),
SB2200超声波清洗器(上海必能信超声有限公司)。
1.2 材料 喜树碱对照品(广西河丰药业有限公
司 ,含量 >98%),所用化学试剂均为分析纯;6个产
地的样品均采自同一植株不同时期 ,均采自同一年
的 7 ～ 12月 ,每月采集 1次 ,由广西民族医药研究所
黄瑞松主任药师等人采集 ,并鉴定为珙桐科植物喜
树 CamptothecaacuminataDecaisne的干燥果实。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备 取喜树碱对照品 10mg,
精密称定 ,置 200ml量瓶中 ,加甲醇 180 ml,超声处
理 3 min,再加甲醇至刻度 ,摇匀 ,即得 。
2.2 供试品溶液的制备 取喜树果药材粉末(过
60目筛)0.2g,精密称定 ,置 25 ml具塞锥形瓶中 ,
精密加甲醇 15ml,称定重量 ,于 60℃水浴温浸 1 h
(不时轻轻振摇),冷却至室温 ,再称定重量 ,用甲醇
补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,即得。
2.3 色谱与扫描条件 薄层板:硅胶 H-0.5%
CMC-Na板(110℃活化 30 min);展开剂:氯仿-丙酮
(7∶3);展开方式:上行展开 ,展距 15cm。取对照品
溶液 1、3 μl,样品溶液 5 ～ 10 μl,交叉点于同一薄层
板上 。以紫外光灯(360 nm)定位 ,单波长线性扫
描 , λs=360 nm,狭缝 0.4×10.0 nm, SX=3。外标
两点法计算。
2.4 线性关系 吸取对照品溶液(浓度为 0.0542
mg/ml)1、2、3、4、5、6 μl,分别点于同一硅胶 H薄层
板上 ,按 2.3项下条件展开 、测定 。以对照品量
(μg)为横坐标 ,斑点峰面积积分值为纵坐标 ,绘制
标准曲线 。结果表明 ,喜树碱在 0.0542 ～ 0.3252μg
范围内具有良好的线性关系。其回归方程为:Y=
97.188X-55.07, r=0.9928。
2.5 精密度试验 精密吸取同一供试品(7号)溶
液 5μl,分别于同一块薄层板上点样 5个点 ,按 2.3
项下条件进行展开 、扫描测定 ,求得其峰面积积分值
的 RSD=1.46%;另精密吸取同一供试品溶液 5μl,
分别于 5块不同薄层板上点样 ,按 2.3项下条件进
行展开 、扫描测定 ,求得其喜树碱含量的 RSD=
3.01%;对同一斑点连续扫描测定 5次 ,其峰面积积
分值的 RSD=1.67%。说明仪器的精密度较高 。
2.6 重复性试验 精密吸取同一批号药材(7号)
制备的 6份供试品平行溶液各 5 μl,于同一薄层板
点样 ,按 2.3项下条件进行展开 、扫描测定。计算喜
树碱含量 ,求得 RSD=3.08%。说明本方法重复性
好。
2.7 稳定性试验 取同一供试品(7号)溶液 ,分
别于 0、2、4、6、8、24 h各点样 5 μl,按 2.3项下条件
进行展开 、扫描测定。计算并求得喜树碱含量的
RSD=1.57%。说明供试品溶液在 24h内稳定性良
好。
2.8 加样回收率试验 取喜树果样品粉末(过 60
目筛)0.1g各 6份 ,精密称定 ,精密加入 喜树碱对
照品甲醇溶液(0.00852mg/ml)15mg。按 2.2项下
方法制备供试品溶液 ,并按 2.3项下条件进行展开 、
扫描测定 。结果表明 ,平均回收率为 97.13%, RSD
=1.76%。
2.9 样品含量测定 取各批样品各 0.2 g,精密称
定 ,按 2.2项下方法制备供试品溶液 ,按 2.3项下方
法测定。结果表明 ,同一产地不同时期采集的喜树
果中喜树碱含量的动态积累均有一定的差异 ,其中
7月份含量均较低 , 8月份含量均最高 ,大部分 9月
份含量也较高 ,此后含量逐渐下降 , 6个不同产地采
集的样品情况基本相似 。见表 1。
·685·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials 第 31卷第 5期 2008年 5月
表 1 不同时期喜树果中喜树碱含量动态积累情况
编号 产地 采集时间 含量(%) 编号 产地 采集时间 含量(%)
1-1 南宁市 2004-07 0.142
1-2 (广西药用植物园) 2004-08 0.169
1-3 2004-09 0.162
1-4 2004-10 0.149
1-5 2004-11 0.137
1-6 2004-12 0.129
2-1 南宁市 2005-07 0.103
2-2 (广西中医学院) 2005-08 0.137
2-3 2005-09 0.129
2-4 2005-10 0.112
2-5 2005-11 0.110
2-6 2005-12 0.091
3-1 桂林市 2005-07 0.120
3-2 (广西植物研究所) 2005-08 0.172
3-3 2005-09 0.166
3-4 2005-10 0.157
3-5 2005-11 0.162
3-6 2005-12 0.139
4-1 兴安县 2005-07 0.061
4-2 2005-08 0.217
4-3 2005-09 0.142
4-4 2005-10 0.145
4-5 2005-11 0.132
4-6 2005-12 0.118
5-1 东兰县 2006-07 0.149
5-2 2006-08 0.213
5-3 2006-09 0.193
5-4 2006-10 0.154
5-5 2006-11 0.160
5-6 2006-12 0.151
6-1 龙州县 2006-07 0.077
6-2 2006-08 0.162
6-3 2006-09 0.142
6-4 2006-10 0.113
6-5 2006-11 0.100
6-6 2006-12 0.128
3 讨论
3.1 文献记载 ,喜树果中喜树碱含量测定多采用
HPLC法 ,尚无 TLC法报道。本文采用 TLCS法对喜
树果中的喜树碱进行含量测定 ,取得满意效果 。笔
者在实验中发现 ,喜树果提取液的 TLC层析分离效
果较好 ,层析结果无需显色剂显色 , 其荧光斑点稳
定 、集中 、明显 ,可直接进行扫描 。TLCS法可作为喜
树果中喜树碱的含量测定方法之一。
3.2 关于不同时期喜树碱含量动态积累的情况文
献曾有初步报道 ,在 9至 12月份期间 ,含量随着月
份增加而递增〔4〕。本文主要采用 TLCS法对广西产
喜树果中喜树碱含量的动态积累进行测定分析 。广
西产喜树一般结果期为每年的 7 ～ 12月份 ,本文共
观察广西南宁市(2个区域)、桂林市 、兴安县 、东兰
县和龙州县等 6个产地的同一植株喜树 ,在结果期
的不同时期喜树碱含量动态积累的情况 ,区域分布
具有一定的代表性 。测定结果表明 ,广西 6个产地
喜树果中喜树碱含量的动态积累均有一定的规律 ,
均为 7月份含量最低 , 8月份含量最高 ,大部分 9月
份含量亦较高 ,以后含量逐月下降。这一实验结果
与文献报道有所不同 ,可能与产地的气候 、土壤等环
境条件及植株的树龄有关 ,有待进一步探讨 。
致谢:实验所用部分样品分别由中国科学院广西植物研究所梁
小燕副研究员 、广西龙州县食品药品监督管理分局和广西药用植物
园药用植物保育中心采集提供。
参 考 文 献
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(2007-11-27收稿)
·686· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials 第 31卷第 5期 2008年 5月