全 文 ：书石上柏抗肿瘤活性部位及其化学成分研究
黄建勇１，２，李少光１，李宇翔１，赵美凤１，姚　宏１，林新华１
摘要：　目的　研究石上柏提取物、各萃取部位抗肿瘤活性及石上柏的抗肿瘤作用物质基础。　方法　采用
ＭＴＴ法以人癌细胞评估石上柏乙醇总提取物及其石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取部位和溶剂萃取后剩余水部位
的体外抗肿瘤活性，筛选出抗肿瘤活性较好的部位，并采用制备型液相色谱分离纯化及波谱技术鉴定其主要化学
成分结构。　结果　石上柏二氯甲烷和乙酸乙酯萃取部位具有较好的体外抗肿瘤活性，从乙酸乙酯萃取部位中分
离鉴定出４个化合物：穗花杉双黄酮（Ⅰ）、罗伯斯特双黄酮（Ⅱ）、２″，３″－二氢－３′，３′′′－双芹菜素（Ⅲ）及３′，３′′′－双柚皮
素（Ⅳ），其中Ⅲ和Ⅳ为首次从该植物中分离得到。　结论　石上柏抗肿瘤活性成分可能集中在二氯甲烷和乙酸乙
酯萃取部位，化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ可能是其发挥抗肿瘤作用的物质基础。
关键词：　石上柏；化学，分析；抗肿瘤药；肿瘤
中图分类号：　Ｒ２８２．７１；Ｒ９１６．４；Ｒ９７９．１　　文献标识码：　Ａ　　文章编号：　１６７２－４１９４（２０１３）０１－０００１－０５
收稿日期：２０１３－０１－０７
基金项目：国家自然科学基金（８１２０２９８７，２１２７５０２８）；福建省自然科
学基金（２０１２Ｊ０１１３１）
作者单位：福建医科大学　１．药学院 药物分析系 福州　３５０００４；
２．附属协和医院 药学部 福州　３５０００１
作者简介：黄建勇（１９７６－），男，主管药师
通讯作者：林新华．Ｅｍａｉｌ：ｘｈｌｉｎ１９６３＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
　　石上柏（Ｓｅｌａｇｉｎｅｌｌａ　ｄｏｅｄｅｒｌｅｉｎｉｉ　Ｈｉｅｒｏｎ）为蕨
类植物门卷柏科卷柏属植物深绿卷柏的全草，又名
大叶菜、地侧柏、水柏枝等，主产于贵州、云南、广
东、广西、福建、浙江及台湾等地，其性味甘、微苦、
涩、性凉，有清热解毒，祛风除湿、抗癌止血等功
效［１］。临床上用于治疗咽喉肿痛、风湿痹痛、鼻咽
癌、绒毛膜上皮癌、肺癌、宫颈癌及外伤出血等各种
疾病［２－３］。笔者对石上柏进行初步提取和分离，并研
究其乙醇总提取物、不同极性有机溶剂萃取部位及
溶剂萃取后剩余水部位的体外抗肿瘤活性，以体外
筛选结果为导向，采用制备型液相色谱进行分离纯
化合物及鉴定其结构，探讨石上柏抗肿瘤作用的物
质基础。
１　材料与方法
１．１　材料
１．１．１　试剂和仪器　ＲＰＭＩ　１６４０培养基（批号：
７８５９１４，美国Ｇｉｂｃｏ公司），胎牛血清（批号：１１０６２９，
杭州四季青生物工程材料有限公司），胰蛋白酶（批
号：０７９３，美国Ｄｉｆｃｏ公司），注射用多柔比星（规格：
１０ｍｇ，批号：２０１１３０６，深圳万乐医药股份有限公
司），四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ，批号：Ａｍｒｅｓｃｏ－０７９３，
美国Ｂｉｏｓｈａｒｐ公司），乙腈（色谱纯，国药试剂），水
（双蒸水，本实验室制备），其余试剂均为国产分
析纯。
　　ＣＯ２培养箱 （ＢＢ１６ＵＶ／ＢＢ５０６０ＵＶ 型，德国
Ｈｅｒａｅｕｓ公 司），全 自 动 酶 标 仪 （ＭＵＬＴＩＳＫＡＮ
ＭＫ３，美国Ｔｈｅｒｍｏ公司），制备液相色谱仪（ＬＣ－６Ａ
型，日本ＳＨＩＭＡＤＺＵ公司），电喷雾离子化质谱仪
器（Ｆｉｎｎｉｇｎ　ＬＣＱ　Ｄｅｃａ　ＸＰ　ＭＡＸ，美国 Ｔｈｅｒｍｏ公
司），核磁共振波谱仪（４００ＭＨｚ，德国Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ公
司）。
１．１．２　药材　石上柏购自福州西洋药店，经福建
医科大学药学院姚宏副教授鉴定为蕨类植物门卷
柏科卷柏属植物深绿卷柏的全草。
１．１．３　肿瘤细胞　人大细胞肺癌细胞株 Ｈ４６０、人
食管癌细胞株 Ｅｃａ－１０９和人乳腺癌细胞株 ＭＤＡ－
ＭＢ－２３１，均由福建医科大学药理教研室冻存提供。
１．２　方法
１．２．１　抗肿瘤活性试验
１．２．１．１　样品制备　取石上柏药材２００ｇ，粉碎成
粗粉，用７０％乙醇于８５ ℃回流提取３次，每次
１　６００ｍＬ、回流２ｈ，合并提取液，浓缩回收乙醇，得
到醇浸膏２０．８ｇ。取醇浸膏２０ｇ，用水２００ｍＬ复
溶，依次用石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯萃取，每种
萃取溶剂各萃取３次，２００ｍＬ，分别得到各萃取液，
浓缩回收溶剂，得到各个萃取部位浸膏０．７４，２．５６
和０．８９ｇ，剩余水相经浓缩得到水部位浸膏
１４．５３ｇ。分别称取乙醇总提取物２０ｍｇ、石油醚萃
取部位４ｍｇ、二氯甲烷萃取部位４ｍｇ、乙酸乙酯萃
取部位４ｍｇ和萃取后剩余水部位４ｍｇ，用２０μＬ
二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）溶解，４℃保存。给药前乙醇
总提取物样品准备液以ＲＰＭＩ　１６４０培养液依次稀
释 成 终 浓 度 为 ５　０００，２　５００，１　２５０，６２５，
３１２．５μｇ／ｍＬ的５个浓度的供试液，石油醚、二氯甲
烷、乙酸乙酯萃取部位、萃取后剩余水部位样品准备
液以ＲＰＭＩ　１６４０培养液分别依次稀释成终浓度为
１
福建医科大学学报
Ｊ　Ｆｕｊｉａｎ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ　２０１３Ｆｅｂｒｕａｒｙ
，Ｖｏｌ　４７Ｎｏ　１
１　０００，５００，２５０，１２５，６２．５μｇ／ｍＬ的５个浓度供试液。
１．２．１．２　细胞培养　取人大细胞肺癌细胞株
Ｈ４６０、人食管癌细胞株Ｅｃａ－１０９和人乳腺癌细胞株
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞株，接种于含８％胎牛血清、青
霉素１００ＩＵ／ｍＬ及链霉素１００μｇ／ｍＬ的 ＲＰＭＩ
１６４０培养基培养，置于３７℃、饱和湿度、体积分数
为０．０５的ＣＯ２培养箱中培养。
１．２．１．３　种板及给药　取对数生长期 Ｈ４６０、Ｅｃａ－
１０９和 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１，用０．２５％胰酶（含ＥＤＴＡ）充
分消化后，以 ＲＰＭＩ　１６４０培养基稀释成２×１０４
ｍＬ－１单细胞悬液，分别接种于９６孔细胞培养板，每
孔１００μＬ。种板后继续置于ＣＯ２ 培养箱培养２４ｈ，
更换新的培养液后给药，药物组每孔加药１０μＬ，每
个浓度设３个平行孔；用等体积的ＲＰＭＩ　１６４０培养
液代替受试药物作为阴性对照组；阳性对照组注射
用多柔比星配成５，２．５，１．２５μｍｏｌ／Ｌ　３个浓度，每
个浓度设３个平行孔，每孔１０μＬ。
１．２．１．４　抗肿瘤活性测定　给药后继续培养４８ｈ，
每孔加入５ｍｇ／ｍＬ　ＭＴＴ溶液２０μＬ，继续培养４ｈ
后，吸尽上清液，每孔加入ＤＭＳＯ　１５０μＬ，置于酶标
仪上振荡５ｍｉｎ，充分溶解 ＭＴＴ 还原产物。在
４９２ｎｍ波长处测定各孔吸光值（ＯＤ），计算得到药
物对肿瘤细胞生长的抑制率（ＩＲ）以及半数抑制浓
度（ＩＣ５０），并对药效进行初步评价。ＩＣ５０用ｏｒｉｇｉｎ
７．５软件计算。
　　ＩＲ／％＝［１－（加药组平均ＯＤ值－空白孔ＯＤ值）／（阴
性组平均ＯＤ值－空白孔ＯＤ值）］×１００％。
１．２．２　化合物分离制备　样品准备：石上柏乙酸
乙酯部位６００ｍｇ，用乙醇２ｍＬ溶解，１２　０００ｒ／ｍｉｎ
离心后，０．４５μｍ滤膜滤过，进样。制备条件：制备
柱Ｕｌｔｉｍａｔｅ　Ｃ１８柱（２５０ｍｍ×２１．２ｍｍ，７μｍ）；流
动相：水－乙腈（５５∶４５，ｖ／ｖ），流速：７ｍＬ／ｍｉｎ；检测
波长：２０３，２５４ｎｍ；进样量：２００μＬ。
２　结　果
２．１　石上柏提取物对三种肿瘤细胞的抑制作用　
乙醇总提取物、石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯及萃取
后剩余水部位对 Ｈ４６０、Ｅｃａ－１０９和 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１
细胞的抑制作用，呈浓度依赖关系（图１），半数抑制
率结果见表１。
２．２　化合物分离纯化　石上柏二氯甲烷和乙酸乙
酯萃取部位抗肿瘤活性较好，表明该萃取部位可能
含有较好抗肿瘤作用的化合物。采用制备型液相
色谱对乙酸乙酯萃取部位化学成分进行进一步分离
纯化研究。如制备色谱图（图２）所示，４个成分峰达
　　Ａ：乙醇总提取物；Ｂ：石油醚萃取部位；Ｃ：二氯甲烷萃取部
位；Ｄ：乙酸乙酯萃取部位；Ｅ：萃取后剩余水部位．
图１　石上柏乙醇总提取物和石油醚、二氯甲烷、乙酸乙
酯萃取部位及其萃取后剩余水部位对三种肿瘤细
胞的抑制作用
Ｆｉｇ　１　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ，ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ　ｅｔｈｅｒ，ｄｉ－
ｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ，ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｗａｔｅｒ　ｓｏｌｕ－
ｂｌｅ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍＳ．ｄｏｅｄｅｒｌｅｉｎｉｉ　ｏｎ　ｔｈｅ
ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｈｕｍａｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅｓ　ｉｎ
ｖｉｔｒｏ
到较好分离。分别将收集所得的制备溶液，旋转蒸
发后冷冻干燥得到４个化合物Ⅰ（１２．８ｍｇ）、Ⅱ
（７．８ｍｇ）、Ⅲ（７．２ｍｇ）和Ⅳ（８．９ｍｇ）；经高效液相
色谱分析，用峰面积归一化计算各化合物纯度分别
为９５％，９２％，９９％及９８％。
２ 福建医科大学学报　２０１３年２月　第４７卷第１期
表１　石上柏乙醇总提取物、不同极性有机溶剂萃取部位及萃取后剩余水部位对３种细胞的ＩＣ５０值
Ｔａｂ　１　Ｔｈｅ　ＩＣ５０ｖａｌｕｅｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｅｘｔｒａｃｔ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍＳ．ｄｏｅｄｅｒｌｅｉｎｉｉ　ｏｎ　ｔｈｒｅｅ　ｈｕｍａｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅｓ　ｉｎｖｉｔｒｏ
肿瘤细胞株
ＩＣ５０／（μｇ·ｍＬ－１）
乙醇总提取物 石油醚萃取部位 二氯甲烷萃取部位 乙酸乙酯萃取部位 萃取后剩余水部位
Ｈ４６０　 ４７１．６±３．４ ＞１００ ＞１００　 ３９．２３±５．４ ＞１００
Ｅｃａ－１０９　 ３８２．１±１２．１ ＞１００　 ９５．８７±９．６　 ５６．３３±２．９ ＞１００
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１　 ２６８．９±２．１ ＞１００　 ３８．１２±１１．２　 ３３．２５±３．２ ＞１００
１：化合物Ⅰ；２：化合物Ⅱ；３：化合物Ⅲ；４：化合物Ⅳ．
图２　石上柏乙酸乙酯部位制备液相色谱图
Ｆｉｇ　２　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ　ＨＰＬＣ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ａｃｅｔｉｃ　ｅｔｈｅｒ　ｅｘ－
ｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｓ．ｄｏｅｄｅｒｌｅｉｎｉｉ
２．３　化合物结构鉴定　化合物（Ⅰ）为淡黄色粉
末。其质谱数据为：（－）ＥＳＩ－ＭＳ　ｍ／ｚ　５３７．２［Ｍ－
Ｈ］–，说明其分子量为５３８。１　Ｈ　ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６，
ＴＭＳ）δｐｐｍ：８．０１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．６Ｈｚ，
６′′′－Ｈ），８．０ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．６，２′′′－Ｈ），７．５７
（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２′－Ｈ，６′－Ｈ），７．１５（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝８．４Ｈｚ，５′′′－Ｈ），６．８４（１Ｈ，ｓ，３－Ｈ），６．８０
（１Ｈ，ｓ，３′′－Ｈ），６．７２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，３′－Ｈ，
５′－Ｈ），６．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，８－Ｈ′′），６．４１
（１Ｈ，ｓ，５－Ｈ），６．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，６－Ｈ′′）；
１３Ｃ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，ＴＭＳ）δｐｐｍ：１８２．６（Ｃ－４），
１８２．２ （Ｃ－４′′），１６４．６ （Ｃ－７′′），１６４．３ （Ｃ－２′′），
１６４．２（Ｃ－２），１６２．３（Ｃ－７），１６１．９（Ｃ－５′′），１６１．５
（Ｃ－５），１６１．０（Ｃ－４′′′），１６０．０（Ｃ－４′），１５７．８（Ｃ－
９′′），１５５．０（Ｃ－９），１３１．９（Ｃ－２′′′），１２８．７（Ｃ－２′，
Ｃ－６′），１２８．３（Ｃ－６′′′），１２１．９（Ｃ－１′′′），１２１．４（Ｃ－
１′），１２０．４（Ｃ－３′′′），１１６．６（Ｃ－５′′′），１１６．２（Ｃ－３′，
Ｃ－５′），１０４．４ （Ｃ－３′′），１０４．２ （Ｃ－３），１０４．１ （Ｃ－
１０′′），１０３．４（Ｃ－８），１０３．０（Ｃ－１０），９９．３（Ｃ－６），
９９．１（Ｃ－６′′），９４．５（Ｃ－８′′）。
　　上述波谱数据与文献报道的穗花杉双黄酮数
据一致［４］，因此，鉴定化合物（Ⅰ）为穗花杉双黄酮
（结构式见图３）。
　　化合物（Ⅱ）为淡黄色粉末。其质谱数据为：
（–）ＥＳＩ－ＭＳ　ｍ／ｚ　５３７．２［Ｍ－Ｈ］–，说明其分子量
为５３８。１　Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６，ＴＭＳ）δｐｐｍ：８．２４５
（１Ｈ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，２′′′－Ｈ），７．８８６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８
Ｈｚ，２′－Ｈ，６′－Ｈ），７．７０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．８，１．６
Ｈｚ，６′′′－Ｈ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，５′′′－Ｈ），
６．９２ （２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，３′－Ｈ，５′－Ｈ），６．７９
（２Ｈ，ｓ，３－Ｈ，３′′－Ｈ），６．５６（１Ｈ，ｓ，８′′－Ｈ），５．７９
（１Ｈ，ｓ，６′′－Ｈ）；１３Ｃ　ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６，ＴＭＳ）
δｐｐｍ：１８２．３ （Ｃ－４），１８２．２ （Ｃ－４′′），１６４．４ （Ｃ－
７′′），１６４．５（Ｃ－２′′），１６４．５（Ｃ－２），１６４．０（Ｃ－７），
１６１．９ （Ｃ－５′′），１６０．４ （Ｃ－４′），１５９．５ （Ｃ－４′′′），
１６１．５（Ｃ－５），１５７．７（Ｃ－９′′），１５６．７（Ｃ－９），１２７．８
（Ｃ－６′′′），１３１．２（Ｃ－２′′′），１２８．８（Ｃ－２′，６′），１２１．４
（Ｃ－１′′′），１２１．１（Ｃ－３′′′），１２１．６（Ｃ－１′），１１６．４（Ｃ－
３′，５′），１１６．７（Ｃ－５′′′），１０４．１（Ｃ－１０′′），９４．０４
（Ｃ－８），１０３．８（Ｃ－１０），１０３．２（Ｃ－３′′），１０３．２（Ｃ－
３），９９．２５（Ｃ－６′′），１０９．５（Ｃ－６），９４．４８（Ｃ－８′′）。
　　上述波谱数据与文献报道的罗伯斯特双黄酮
数据一致［５］，因此，鉴定化合物（Ⅱ）为罗伯斯特双黄
酮（结构式见图３）。
　　化合物（Ⅲ）为淡黄色粉末。其质谱数据为：
（－）ＥＳＩ－ＭＳ　ｍ／ｚ５３９．１［Ｍ－Ｈ］－，说明其分子量为
５４０。１　Ｈ　ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６，ＴＭＳ）δｐｐｍ：７．８６
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，２′－Ｈ），７．６８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
８．０，１．６Ｈｚ，６′－Ｈ），７．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，
２′′′－Ｈ），７．２１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，１．６Ｈｚ，６′′′－
Ｈ），６．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，５′－Ｈ），６．６３（１Ｈ，
ｓ，３－Ｈ），６．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，５′′′－Ｈ），６．４５
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，８－Ｈ），６．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．６
Ｈｚ，６－Ｈ），５．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，８′′－Ｈ），
５．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，６′′－Ｈ），５．５０（１Ｈ，ｄｄ，
Ｊ＝２．８，２．８Ｈｚ，２′－Ｈ），２．７５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．４，
２．８Ｈｚ，３′′－Ｈａ）；１３Ｃ　ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６，ＴＭＳ）
δｐｐｍ：１９７．１（Ｃ－４′′），１８２．０（Ｃ－４），１６８．０（Ｃ－７），
１６７．２ （Ｃ－７′′），１６５．２ （Ｃ－５′′），１６４．４ （Ｃ－９′′），
１６３．９（Ｃ－２），１６３．６（Ｃ－５），１６２（Ｃ－５′′），１６１．９
（Ｃ－９），１５７．８（Ｃ－４′′′），１５１．３（Ｃ－４′），１３２．０（Ｃ－
２′），１３０．７（Ｃ－３′），１３０．１６（Ｃ－１′′′），１２９．８ （Ｃ－
３黄建勇等：石上柏抗肿瘤活性部位及其化学成分研究
２′′），１２８．６ （Ｃ－６′），１２８．２ （Ｃ－３′′′），１２７．４ （Ｃ－
６′′′），１２７．３（Ｃ－１′），１２７．２（Ｃ－５′′′），１１７．５（Ｃ－
５′），１０４．０（Ｃ－３），１０２．２（Ｃ－１０），１０２．０（Ｃ－１０′′），
９９．１（Ｃ－６），９６．２（Ｃ－６′′），９５．５（Ｃ－８），９４．４（Ｃ－
８′′），７９．３（Ｃ－２′′），４２．６（Ｃ－３′′）。上述波谱数据
与文献报道的２′′，３′′－二氢－３′，３′′′－双芹菜素数据
一致［６］，因此，鉴定化合物（Ⅲ）为２′′，３′′－二氢－３′，
３′′′－双芹菜素（结构式见图３），属首次从该植物中
发现该化合物。
　　化合物（Ⅳ）为淡黄色粉末。其质谱数据为：
（－）ＥＳＩ－ＭＳ　ｍ／ｚ　５４１．２［Ｍ－Ｈ］–，说明其分子量
为５４２。１　Ｈ　ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６，ＴＭＳ）δｐｐｍ：７．３
（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，２′，２′′′－Ｈ），７．２７（２Ｈ，ｄｄ，
Ｊ＝８．０，１．６Ｈｚ，６′，６′′′－Ｈ），６．８５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝
８．０Ｈｚ，５′，５′′′－Ｈ），５．８９（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，１．６
Ｈｚ，８，８′′－Ｈ），５．８７（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，１．６Ｈｚ，
６，６′′－Ｈ），５．５０（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．４，２．４Ｈｚ，２－Ｈ，
２′′－Ｈ），２．７５（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．８，２．４Ｈｚ，３′′－
Ｈａ）；１３Ｃ　ＮＭＲ （ＤＭＳＯ－ｄ６，ＴＭＳ）δｐｐｍ：１９６．９
（Ｃ－４，Ｃ－４′′），１６７．３（Ｃ－７，Ｃ－７′′），１６４．０（Ｃ－５，Ｃ－
５′′），１６３．５（Ｃ－８，Ｃ－８′′），１３０．５（Ｃ－１′，Ｃ－１′′′），
１２８．２（Ｃ－２′，Ｃ－２′′′），１２７．３（Ｃ－３′，３′′′），１２６．８
（Ｃ－６′，Ｃ－６′′′），１１６．８（Ｃ－５′，５′′′），１０２．２（Ｃ－１０，
Ｃ－１０′′′），９６．３（Ｃ－６，Ｃ－６′′′），９５．５（Ｃ－８，Ｃ－８′′′），
７９．２（Ｃ－２），４２．５（Ｃ－３）。上述波谱数据与文献报
道的３′，３′′′－双柚皮素数据一致［７］，因此，鉴定化合
物（Ⅳ）为３′，３′′′－双柚皮素数（结构式见图３），属首
次从该植物中发现该化合物。
　　Ａ：穗花杉双黄酮（化合物Ⅰ）；Ｂ：罗伯斯特双黄酮（化合物Ⅱ）；Ｃ：２′′，３′′－二氢－３′，３′′′－双芹
菜素（化合物Ⅲ）；Ｄ：３′，３′′′－双柚皮素（化物Ⅳ）．
图３　化合物结构式
Ｆｉｇ　３　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ａｍｅｎｔｏｆｌａｖｏｎｅ（ＣｏｍｐｏｕｎｄⅠ），ｒｏｂｕｓｔａｆｌａｖｏｎｅ（Ｃｏｍ－
ｐｏｕｎｄⅡ），２″，３″－ｄｉｈｙｄｒｏ－３′，３′″－ｂｉａｐｉｇｅｎｉｎ（ＣｏｍｐｏｕｎｄⅢ），３′，３′″－ｂｉｎａｒｉｎ－
ｇｅｎｉｎ（ＣｏｍｐｏｕｎｄⅣ）
３　讨　论
　　本研究采用 ＭＴＴ法对石上柏的乙醇总提取
物、不同极性有机溶剂萃取部位和萃取后剩余水部
位进行体外抗肿瘤活性筛选。结果表明，乙醇总提
取物、石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取部位和萃取
后剩余水部对三种癌细胞有不同程度的抑制作用，
石上柏二氯甲烷和乙酸乙酯萃取部位具有较好的
体外抗肿瘤活性，尤其是乙酸乙酯萃取物抗肿瘤活
性最强，说明石上柏抗肿瘤作用化合物可能集中在
二氯甲烷和乙酸乙酯萃取部位。
　　以体外筛选结果为依据（活性为导向），对乙酸
乙酯萃取部位进行化学成分制备性分离，得到四个
双黄酮成分。其中，穗花杉双黄酮、罗伯斯特双黄
酮和３′，３′′′－双柚皮素文献已报道其具有显著的抗
肿瘤活性［８－１１］。因此，本文分离得到的四个双黄酮
４ 福建医科大学学报　２０１３年２月　第４７卷第１期
成分可能是石上柏发挥抗肿瘤作用的主要物质基
础，这为石上柏药材后续的研究开发（质量控制、药
理作用机制等研究）提供了基础。
参考文献：
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ｃｈｅｍ，１９９０，２９（２）：５０１－５０７．
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１９９６，４２（４）：１１９９－１２０１．
［６］　Ｓｉｌｖａ　Ｇ　Ｌ，Ｃｈａｉ　Ｈ，Ｇｕｐｔａ　Ｍ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ｂｉｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｆｒｏｍＳｅｌａｇｉｎｅｌｌａ　ｗｉｌｌｄｅｎｏｗｉｉ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ，１９９５，４０（１）：
１２９－１３４．
［７］　Ｓｅｅｇｅｒ　Ｔ，Ｇｅｉｇｅｒ　Ｈ，Ｚｉｎｓｍｅｉｓｔｅｒ　Ｈ　Ｄ，ｅｔ　ａｌ．Ｂｉｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｍｏｓｓ　Ｈｏｍａｌｏｔｈｅｃｉｕｍ　ｌｕｔｅｓｃｅｎｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ，
１９９３，３４（１）：２９５－２９６．
［８］　Ｌｅｅ　Ｎ　Ｙ，Ｍｉｎ　Ｈ　Ｙ，Ｌｅｅ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｎｅｗ　ｃｙｔｏ－
ｔｏｘｉｃ　ｂｉｆｌａｖａｎｏｎｅ　ｆｒｏｍ　Ｓｅｌａｇｉｎｅｌｌａ　ｄｏｅｄｅｒｌｅｉｎｉｉ［Ｊ］．Ｃｈｅｍ
Ｐｈａｒｍ　Ｂｕｌｌ（Ｔｏｋｙｏ），２００８，５６（９）：１３６０－１３６１．
［９］　Ｓｉｌｖａ　Ｇ　Ｌ，Ｃｈａｉ　Ｈ，Ｇｕｐｔａ　Ｍ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ｂｉｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｆｒｏｍＳｅｌａｇｉｎｅｌｌａ　ｗｉｌｌｄｅｎｏｗｉｉ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ，１９９５，１（４０）：
１２９－１３４．
［１０］Ｇｕｒｕｖａｙｏｏｒａｐｐａｎ　Ｃ，Ｋｕｔｔａｎ　Ｇ．Ａｍｅｎｔｏｆｌａｖｏｎｅ，ａ　ｂｉｆｌａｖｏｎｏｉｄ
ｆｒｏｍ　Ｂｉｏｐｈｙｔｕｍ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｕｍ　ａｕｇｍｅｎｔｓ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａ－
ｔｉｏｎ，ｎａｔｕｒａｌ　ｋｉｌｅｒ　ｃｅｌ　ａｎｄ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｃｅｌｕｌａｒ　ｃｙｔｏ－
ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｅｎｈａｎｃｅｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＩＬ－２ａｎｄ　ＩＦＮ－ｇａｍｍａ
ａｎｄ　ｒｅｓｔｒａｉｎｓ　ｓｅｒｕｍ　ｓｉａｌｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｇａｍｍａ　ｇｌｕｔａｍｙｌ　ｔｒａｎｓｐｅｐｔｉ－
ｄａｓｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｕｍｏｒ－ｂｅａｒｉｎｇ　ａｎｉｍａｌｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｅｘ－
ｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ　＆Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２００７，６（４）：２８５－２９５．
［１１］Ｌｅｅ　Ｊ　Ｓ，Ｌｅｅ　Ｍ　Ｓ，Ｏｈ　Ｗ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉ－
ｔｉｏｎ　ｂｙ　ａｍｅｎｔｏｆｌａｖｏｎｅ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ａｎｄ　ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　＆Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｂｕｌｌｅｔｉｎ，２００９，３２（８）：１４２７－１４３２．
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ
ｆｒｏｍ　Ｓｅｌａｇｉｎｅｌａ　Ｄｏｅｄｅｒｌｅｉｎｉ　Ｈｉｅｒｏｎ
ＨＵＡＮＧ　Ｊｉａｎｙｏｎｇ１，２，ＬＩ　Ｓｈａｏｇｕａｎｇ１，ＬＩ　Ｙｕｘｉａｎｇ１，ＺＨＡＯ　Ｍｅｉｆｅｎｇ１，ＹＡＯ　Ｈｏｎｇ１，ＬＩＮ　Ｘｉｎｈｕａ１
１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｆａｃｕｌｔｙ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｆｕｊｉａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ　３５０００４，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ，Ｆｕｊｉａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｕｎｉｏｎ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｆｕｚｈｏｕ　３５０００１，Ｃｈｉｎａ
　　ＡＢＳＴＲＡＣＴ：　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ａｎｄ　ｒｅｖｅａｌ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｏ－
ｎｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｓ．ｄｏｅｄｅｒｌｅｉｎｉｉ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｏｕｒ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ，ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ　ｅｔｈｅｒ，ｄｉ－
ｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ，ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｆｒｏｍＳ．ｄｏｅｄｅｒｌｅｉｎｉｉ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｓｉｄｕａｌ　ｗａｔｅｒ　ｐｏｒｔｉｏｎ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅｓ
ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｗａｓ　ｔｅｓｔｅｄ　ｂｙ　ＭＴＴ　ａｓｓａｙ．　Ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ｅｘ－
ｔｒａｃｔ　ｂｙ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ－ＨＰＬＣ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ＭＳ　ａｎｄ　ＮＭＲ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ　ａｎｄ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ
ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｗｅｒｅ　ｆｏｕｎｄ　ｔｏ　ｂｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍＳ．ｄｏｅｄｅｒｌｅｉｎｉｉ．　Ｆｏｕｒ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｗｅｒｅ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ
ｆｒｏｍ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　ａｍｅｎｔｏｆｌａｖｏｎｅ（Ⅰ），ｒｏｂｕｓｔｆｌａｖｏｎｅ（Ⅱ），２″，３″－ｄｉｈｙｄｒｏ－３′，
３″′－ｂｉａｐｉｇｅｎｉｎ（Ⅲ）ａｎｄ　３′，３″′－ｂｉｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ（Ⅳ）．　ＣｏｍｐｏｕｎｄｓⅢａｎｄⅣ ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｉｓ　ｐｌａｎｔ
ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｔｉｍｅ．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｓ．ｄｏｅｄｅｒｌｅｉｎｉｉ　ｍａｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｘ－
ｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ　ａｎｄ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ，ａｎｄ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓⅠ，Ⅱ，ⅢａｎｄⅣｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ
ｅｘｔｒａｃｔ　ｍａｙ　ｈａｖｅ　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：　ｓｅｌａｇｉｎｅｌａ　ｄｏｅｄｅｒｌｅｉｎｉ；ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ａｎａｌｙｔｉｃａｌ；ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ　ａｇｅｎｔｓ；ｎｅｏｐｌａｓｍｓ
（编辑：张慧茹）
５黄建勇等：石上柏抗肿瘤活性部位及其化学成分研究