全 文 :书五指毛桃的致突变性研究
王晓平1,黄 翔2,陈晓白1,陆奇丰1,李丽梅1,岑业文1
(1.玉林师范学院化学与生物系,广西玉林 537000;2.玉林师范学院体育系,广西玉林 537000)
摘要 [目的]研究五指毛桃(Ficus simplicissima Lour.)水提物的致突变性。[方法]应用微核试验,对五指毛桃水提液致小鼠肝细胞、睾
丸生精细胞、骨髓嗜多染红细胞和外周血淋巴细胞微核形成率进行检测。[结果]五指毛桃各剂量组对小鼠肝细胞、睾丸生精细胞、骨髓
嗜多染红细胞和外周血淋巴细胞微核形成率的影响,与阴性对照组在 0. 05水平上无差异,但与阳性对照组在 0. 01水平有差异;各剂量
组之间在 0. 05水平上无差异。[结论]在该试验条件下,五指毛桃水提物不具有致突变性。
关键词 五指毛桃;致突变性;微核试验
中图分类号 R284. 1 文献标识码 A 文章编号 0517 -6611(2010)14 -07283 -02
Mutagenicity Research on Ficus simplicissima Lour.
WANG Xiao-ping et al (Department of Chemistry and Biology,Yulin Normal College,Yulin,Guangxi 537000)
Abstract [Objective]The research aimed to study the mutagenicity of Ficus simplicissima Lour. aqueous extracts. [Method]Using micronu-
cleus test,the formation rate of micronucleus in liver cells,testicular germ cells,bone marrow polychromatic erythrocytes cells and periphral blood
lymphocytes cells of mice caused by Ficus simplicissima Lour. aqueous extracts was measured. [Result]The effects of each dose group of Ficus
simplicissima on the formation rate of micronucleus in liver cells,testicular germ cells,bone morrow polychromatic erythrocytes cells and periphral
blood lymphocytes cells of mice had no difference with negative control group at 0. 05 level. Compared with positive control gronp,there was differ-
ence at 0. 01 level. There was no difference among each dose group at 0. 05 level.[Conclusion]Under the experiment conditions,the aqueous ex-
tracts from Ficus simplicissima Lour. had no mutagenicity.
Key words Ficus simplicissima Lour.;Mutagenicity;Micronucleus test
基金项目 广西教育厅科研基金项目(200809MS124,200911MS195)。
作者简介 王晓平(1968 - ),女,广西玉林人,硕士,副教授,从事药理
学和生理学研究。
收稿日期 2010-02-20
五指毛桃又名南芪、五爪龙、五指牛奶、土北芪等,为桑
科榕属植物粗叶榕(Ficus simplicissima Lour)的干燥根[1 -3]。
其味辛、甘,性平,具有清热、健脾益气、滋阴降火和化湿行气
之功效,用于脾虚浮肿、食少无力、肺痨咳嗽、风湿麻痹和肝
炎等症[1],是华南地区常用的中药材。五指毛桃主要分布于
广东、广西、云南和贵州等省区,以根入药,全年均可采收,鲜
用或切段、切片晒干。五指毛桃还是一种药食同源的植物,
其应用历史悠久,在广东地区用于煲汤,保健作用被广为认
可,但未见对其安全性评价的研究。
哺乳动物微核试验是目前最常用的遗传毒理学试验。
微核试验的遗传学终点是观察染色体或有丝分裂器的损伤。
由于其测定方法比较简便、可靠,并且与染色体畸变率有很
好的一致性,因此,近年来已成为筛选化学致突变物的一种
常规方法,在我国的新药审批办法中被列为新药致突变试验
的必做项目[4]。为此,笔者通过微核试验对五指毛桃的致突
变性进行研究,对其安全性进行评价,以期为丰富其毒理学
资料提供参考。
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 试验动物。SPF级昆明种雄性小鼠 30 只,6 周龄,体
重 20 g左右,购自广西医科大学医学实验动物中心。
1. 1. 2 主要试剂。环磷酰胺,由上海第十二制药厂生产;Gi-
emsa染液,由国药集团化学制剂有限公司生产;氯化钠注射
液,由贵州科伦药业生产;磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、甲醇均
为国产分析纯。
1. 1. 3 主要仪器。电子天平、磁力搅拌器、L420台式低速自
动平衡离心机等。
1. 2 方法
1. 2. 1 五指毛桃水提液的制备。参照周添浓等[5]的方法并
略加改进。取五指毛桃干燥药材,用 10 倍体积的蒸馏水浸
泡 1 h,加热煮沸 3 h,趁热滤取药液;再加入 8 倍体积蒸馏
水,煮沸 30 min,合并 2次滤液,浓缩至相当于生药 2 g /ml;4
℃冰箱保存,用时稀释至所需浓度。
1. 2. 2 动物分组及处理。将 30 只小鼠随机分为阴性对照
组、阳性对照组和五指毛桃水提液高(20 g /kg)、中(10
g /kg)、低(5 g /kg)剂量组。剂量组用五指毛桃水提液灌胃,
阴性对照组、阳性对照组灌以等量生理盐水,1 次 /d,连续 10
d。其中,阳性对照组在第 9 天同时腹腔注射环磷酰胺 80
mg /kg,30 h内给药 2次,间隔 24 h。在第 2 次给药后 6 h颈
椎脱臼处死小鼠,取肝、睾丸、股骨和外周血。
1. 2. 3 微核试验。将肝和睾丸组织用37 ℃PBS缓冲液冲洗
2 次,用眼科剪剪碎,以一定量 PBS稀释后,用擦镜纸过滤、
收集细胞悬液,1 000 r /min离心 5 min,弃去上清液;取股骨,
剔尽肌肉,用眼科剪刀将股骨从骨干中间剪断,将骨髓挤出;
外周血沿离心管内壁轻轻加在 0. 2 ml 淋巴细胞分离液液面
上,3 500 r /min离心 4 min。离心后吸取中间层淋巴细胞移
入离心管中,加入 PBS 缓冲液至 2 ml,1 500 r /min 离心 8
min,弃去上清液。各组织均按血清学常规涂片方法制片,自
然干燥,甲醇固定 10 min,晾干,用 10% Giemsa 染液染色 30
min,蒸馏水轻轻冲洗载玻片,自然晾干。采用双盲法油镜下
每只动物分别计数肝细胞、睾丸生精细胞、嗜多染红细胞
(PCE)和外周血淋巴细胞各 1 000个,统计其微核细胞率。
1. 2. 4 统计学分析。试验数据以平均值 ±标准差(珋x ± s)表
示,采用 Origin 7. 0统计分析软件进行数据分析。
2 结果与分析
由表 1可见,五指毛桃水提液各剂量组对小鼠肝细胞、
安徽农业科学,Journal of Anhui Agri. Sci. 2010,38(14):7283 - 7284 责任编辑 姜丽 责任校对 况玲玲
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.14.158
睾丸生精细胞、骨髓嗜多染红细胞和外周血淋巴细胞微核形
成率的影响与阴性对照组在 0. 05水平上无差异(P > 0. 05),
但与阳性对照组在 0. 01水平上有差异(P <0. 01);各剂量组
之间在 0. 05水平上无差异(P > 0. 05)。这表明五指毛桃对
小鼠上述细胞不具有致突变性,其微核试验结果为阴性。
表 1 小鼠各组织细胞微核发生率(珋x ± s)
Table 1 The formation rate of micronucleus in various tissue cells of mice ‰
组别
Groups
观察细胞数
Observed cells
number
肝细胞
Liver cells
生精细胞
Spermatogenic
cells
骨髓嗜多染红细胞
PCE
外周血淋巴细胞
Peripheral blood
lymphocytes
阴性对照 Negative control 6 000 1. 83 ±0. 31 aA 2. 17 ±0. 48 aA 2. 29 ±0. 29 aA 2. 50 ±0. 34 aA
5 g /kg水提液剂量组 6 000 1. 67 ±0. 33 aA 2. 50 ±0. 43 aA 2. 14 ±0. 40 aA 2. 67 ±0. 56 aA
10 g /kg水提液剂量组 6 000 1. 00 ±0. 37 aA 1. 83 ±0. 40 aA 1. 86 ±0. 46 aA 2. 33 ±0. 42 aA
20 g /kg水提液剂量组 6 000 1. 50 ±0. 22 aA 1. 67 ±0. 42 aA 1. 43 ±0. 43 aA 1. 83 ±0. 54 aA
阳性对照 Positive control 6 000 13. 17 ±1. 67 bB 14. 83 ±0. 79 bB 16. 83 ±1. 01 bB 12. 50 ±1. 33 bB
注:数据同列不同小写字母表示在 0. 05水平上有差异(P <0. 05),不同大写字母表示在 0. 01水平上有差异(P <0. 01)。
Note:Different small letters in the same column mean difference at 0. 05 level(P <0. 05);Different capital letters mean difference at 0. 01 level(P <0. 01).
3 结论与讨论
五指毛桃是华南地区常用的中药材之一,含有丰富的多
糖、生物碱、香豆素等生物活性物质[6],具有抗菌、抗病毒、抑
制肿瘤、抗凝、免疫调节、激素样作用和影响药物代谢等功
效[3],在民间和临床应用广泛。该研究结果表明,在一定剂
量下,五指毛桃水提液对体细胞和生殖细胞均无潜在致突变
性,这为其安全使用提供了可靠的遗传毒理学依据。其中,
五指毛桃水提液在一定剂量内所致的细胞微核数低于阴性
对照组,这表明五指毛桃可以有效抑制自发性微核,对细胞
的遗传物质有一定的保护作用,这与蔡青圆等[7]的报道一
致。该研究用的微核试验为体内试验,其结果可从整体生物
水平上反映被检物质的生物学活性。总之,五指毛桃作为一
种地道民族用药,有广泛的药用价值和保健价值,具有极大
的应用前景。
参考文献
[1]中华人民共和国卫生部药典委员.中华人民共和国药典[M].北京:人
民卫生出版社,1997:90.
[2]中国科学院《中国植物志》编委会.中国植物志:第 23 卷,第 1 分册
[M].北京:科学出版社,1998:160 -167.
[3]董青松,欧彪,陈乾平.五指毛桃研究进展[J].广西医学,2006,28(6):
950 -952.
[4]商希梅,乔建维,侯殿俊,等.海珍玉液拮抗环磷酰胺诱发的遗传损伤
效应[J].癌变·畸变·突变,2004,16(4):242 -243.
[5]周添浓,王艳,唐立海,等.五指毛桃抗炎镇痛及对急性肝损伤的保护
作用研究[J].今日药学,2008,18(2):55 -58.
[6]刘春玲,魏刚,何健雄,等.五指毛桃不同采收部位挥发油及醇提物成
分的分析[J].广州中医药大学学报,2004,21(3):204 -205.
[7]蔡青圆,陈虎彪,赵中振,等.五指毛桃拮抗毒品可卡因的肝毒性作用
及其活性成分研究[J].中国中药杂志,2007,32(12):
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
1190 -1193.
(上接第 7280 页)
[64]陈贵阳.金缨子烧酒的酿造工艺[J].酿酒科技,1992(3):46 -47.
[65]余有贵.金樱子酒的研制[J].酿酒科技,1996(2):47 -49.
[66]陈泰,赵凤.野生植物金樱子的生物学特性及开发利用[J].生物学杂
志,1996(5):26 -27.
[67]毛建兰.金樱子资源的开发利用[J].河北农业科学,2007,11(4):96,
99.
[68]欧丽兰,何颖.药食同源植物金樱子药用和食用的研究[J].中外健康
文摘,2007,4(7):816 -817.
[69]李咏梅,谢秀芝.金樱子的开发利用价值与繁殖[J].中国林副特产,
2002(4):6 -7.
[70]李鸿英,冯煦.金樱子棕色素提制及其毒理学评价试验[J].林产化学
与工业,1990,10(3):195 -200.
[71]XIANG D B,LI X Y. Antitumor activity and immuno-potentiating actions
of Achyanthes bidentata polysaccharides[J]. Acta Pharmacol Sin,1993,14
(6):556 -561.
[72]HASEM H,FUTOSHI O,KAZUMOTO N,et al. Polysaccharide K induces
Mn superoxide dismutase (Mn-SOD)in tumor tissues and inhibits malig-
nant progression of QR-32 tumor cells[J]. Cancer Immunology,Immuno-
therap,1998,46(6):338 -344.
[73]TECOCO S,KACH H,YAMARNOTO H,et al. Studies on anantitumor
polysaccharide RBS devived from mice bronprepasation and general prop-
erties of RON,an active fractionof RBS[J]. Chem Pharm Bull,1988,36
(9):3609 -3613.
[74]邹洪涛,杨艳,陈世军.金樱子的饮料开发资源价值与展望[J].食品
工业科技,2006,2(10):193 -195.
[75]李时珍.本草纲目:下册[M].北京:人民卫生出版社,1978:2096 -
2097.
[76]卢寅泉,芮汉明,邓平健.金樱子饮料研制[J].软饮料工业,1994(2):
20 -22.
[77]江苏医学院.中药大辞典:上[M].上海:上海科学技术出版社,1986.
[78]张庭廷,聂刘旺,吴宝军,等.金樱子多糖的抑脂作用[J].中国公共卫
生,2004,20(7):829 -830.
[79]阮肖平.浅议金樱子的药用及其食疗价值[J].时珍国医国药,1998,9
(5):46.
[80]江苏医学院.中药大辞典:上[M].上海:上海科学技术出版社,1986.
[81]阮肖平.浅议金樱子的药用及其食疗价值[J].时珍国医国药,1998,9
(5):46.
[82]佘详威,李来庚,王平,等.金樱子果实营养成分及其利用研究[J].园
艺学报,1988,15(4):241 -243.
[83]陈乃富,闵运江,朱乃武,等.皖西野生植物金樱子的初步研究[J].安
徽农业科学,1995(4):367 -368.
[84]蔡金腾,丁筑红.金樱子果实营养成分的研究[J].食品工业科技,1995
(3):26 -29.
[85]牟君富,蔡金腾,丁筑红,等.金樱子果实生理变化与加工适应性研究
[J].贵州农学院学报,1991,10(1):70 -78.
4827 安徽农业科学 2010 年