全 文 ：鞍山 师范 学院 学报
JournalofAnshanNormalUniversity 20 08-08 , 10(4):1 5-18
万寿菊花 、叶 、茎中黄酮的含量及抗氧化性能的分析
侯冬岩 ,回瑞华 ,刘晓媛 ,唐　蕊
(鞍山师范学院 化学系 ,辽宁 鞍山 114007)
摘　要:采用超声波法提取万寿菊花 、叶 、茎中的黄酮类化合物 , 通过光谱分析方法测定了其花 、叶 、茎的黄
酮含量分别为:2.80%, 1.59%和 0.15%.本法的回收率为 97% ～ 101%,相对标准偏差小于 0.39%.并通
过流动注射化学发光法分析了万寿菊花 、叶 、茎的抗氧化性能 ,所得结果表明 ,万寿菊花 、叶 、茎具有较高的
黄酮含量和较强的抗氧化性能.
关键词:万寿菊;黄酮;超声提取;流动注射化学发光法;抗氧化性
中图分类号:Q946.889　　文献标识码:A　　文章篇号:1008-2441(2008)04-0015-04
万寿菊(Marigold,学名 TageteserectaL),俗称臭芙蓉 、万盏灯 、蜂窝菊等 ,菊科万寿菊属 ,一年生草本
植物 ,原产于美洲 ,易于栽培 ,目前我国普遍栽培.万寿菊属观赏植物 ,夏秋季开花 ,花呈黄色或橙色 ,有
香味 ,可作芳香剂.万寿菊还可制成茶 ,作为保健饮料.万寿菊花中主要含有黄酮类化合物 、龙脑 、矢车菊
甙 、氨基酸 、维生素等物质.万寿菊花具有镇静 、降压 、扩张支气管 、解痉等作用 ,其挥发油具有抗菌 、抑
菌 、抗忧郁及杀虫等多种生物活性 [ 1] .目前国内外对万寿菊花的有效成分及应用进行了研究 [ 2] ,但关
于万寿菊其他部位如叶茎中有效成分及应用的研究目前尚未见报道.本文对万寿菊花 、叶 、茎中黄酮的
含量及抗氧化性能进行分析研究 ,为进一步开发利用万寿菊提供科学依据.
1　实验部分
1.1　仪器与实验材料
TU036紫外可见分光光度计(VARIAN)、旋转蒸发仪 RE52CS型(上海亚荣生化仪器厂)、电热恒温
水浴锅 HHS21-4型(上海医疗器械五厂)、旋片式真空泵 2XZ-4型(临海市精工真空设备厂)、中华牌加
热器 ZHQ型(巩义市英峪仪器一厂)、电子节能控温仪 DKW-II型(巩义英峪仪器一厂)、IFFM-D型流
动注射化学发光仪(西安瑞迈电子科技有限公司);pHS-3C精密 pH计(上海精密科学仪器有限公司).
芦丁黄酮标准品(中国药品生物制品检定所).
芦丁黄酮标准储备液:称取 0.010 0 g芦丁标准品 ,置于 50 mL的容量瓶中 ,加乙醇(95%)使其溶
解稀释至刻度 ,摇匀备用.
0.01mol/L邻笨三酚储备液(AR级 ,贵州遵义市第二化工厂)用 0.01mol/LHCl配成邻苯三酚:使
用前用水稀释浓度为 5×10-5 mol/L;
0.01mol/LNa2CO3 -NaHCO3缓冲溶液(AR级):用前新鲜配制 , pH值用酸度计准确调至 9.95;
0.05mol/L鲁米诺储备液(AR级 ,陕西师范大学):用 0.05mol/LNaOH配成 0.05mol/L储备液 ,在
避光处保存(所用试剂均为分析纯 ,水为二次蒸馏水).
万寿菊花 、叶 、茎样品:2005年 9月采自中国千山 ,经 25℃自然干燥而成.
收稿日期:2008-06-10
基金项目:辽宁省教育厅科学技术基金资助课题(20331079).
作者简介:侯冬岩(1962-),男 ,吉林人 ,鞍山师范学院化学系教授 ,主要从事有机分析及天然产物化学教学与研究.
1.2　万寿菊花 、叶 、茎中总黄酮含量的测定
1.2.1　超声波法提取万寿菊花 、叶 、茎总黄酮　　将样品分别粉碎过 0.425 mm筛 ,精确称取 1.00 g置
于锥形瓶中 ,加入 95%乙醇 10 mL,在 0 ℃冰水浴中超声波振荡 10min,将提取液过滤至 50mL容量瓶
中 ,残渣再重复振荡提取 2次 , 3次滤液合并 ,用 95%乙醇溶液定容至刻度[ 3] ,摇匀备用.
1.2.2　吸收曲线的绘制及测定波长的确定　　从超声波法提取储备液中移取试液 5 mL,置于 10 mL
的容量瓶中 ,精确加入 5% NaNO2 0.3mL,摇匀后放置 6min,加入 10%Al(NO3)3溶液 0.3mL,摇匀后
再放置 6 min,加入 4%的 NaOH溶液 4 mL,然后用 95%乙醇溶液稀释至刻度 ,摇匀 ,放置 15 min,以
NaNO2 、Al(NO3)3 、NaOH的 95%乙醇溶液为参比液 ,在 400 ～ 800 nm范围内扫描 ,得到其吸收光谱 ,最
大吸收波长为 510 nm.
移取上述芦丁黄酮标准贮备液 5 mL,置于 10mL容量瓶中 ,精确加入 5% NaNO2 0.3mL,摇匀后放
置 6 min,加入 10% Al(NO3)3溶液 0.3 mL,摇匀后再放置 6 min,加入 4% NaOH溶液 4 mL,然后用
95%乙醇溶液稀释至刻度 ,摇匀 ,放置 15 min,以 NaNO2、Al(NO3)3、NaOH的 95%乙醇溶液为参比液 ,
在 400 ～ 800nm范围内扫描 ,得到其吸收光谱 ,最大吸收波长为 510 nm.
由以上实验可知 ,超声波法提取样品中总黄酮可用芦丁作黄酮标准品 ,测定波长为 510 nm.
1.2.3　标准曲线的绘制　　分别移取 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5mL的芦丁标准储备液于 10 mL容量
瓶中 ,按 1.2.2步骤在其波长 λ=510 nm时分别测定其吸光度并且测出 A值 ,结果见表 1.
求得 A与质量浓度关系的回归方程为:A=11.439 9C+0.067 6.根据 A与浓度的关系可绘制出标
准曲线 ,求得相关系数 r=0.999 4,经查表得临界相关系数 r(99%, n-2)=0.917 0, r>r(99%, n-2),
说明黄酮的质量浓度在 0.020 ～ 0.070(mg/mL)范围内 , A与质量浓度 C之间呈良好的线性关系 ,可按
标准曲线法进行定量分析.
表 1　A值与芦丁浓度的关系
样品浓度(mg/mL) 0.020 0.030 0.040 0.050 0.060 0.070
A 0.290 5 0.411 6 0.533 2 0.639 6 0.756 6 0.863 0
1.2.4　稳定性实验　　用与绘制吸收曲线配制相同的方法配制的样品进行稳定性实验 ,结果表明:样
品放置 2 h以内 ,测得其吸光度值基本不变.
1.2.5　回收率及方法精密度　　根据 1.2.2确定的测试条件 ,并按 1.2.2实验方法制备 6个不同质量
浓度的样品 ,按标准加入标准物 ,在测定波长下测定 A,求得其平均回收率 ,标准偏差及变异系数[ 4] ,结
果列于表 2和表 3.由表 2和表 3可以看出 ,本法的回收率为 97% ～ 101%,变异系数小于 0.39%,方法
的准确度与精密度均较高.
表 2　方法精密度　　　　　　　　　　　　　　　(μg/mL)
编号 标样浓度 测定值(n=9) 测定平均值 标准偏差 相对标准偏差(% )
1 17.100 16.841～ 16.968 16.925 0.04 0.26
2 34.200 33.622～ 33.988 33.844 0.13 0.39
3 51.300 51.788～ 52.165 52.001 0.14 0.28
4 68.400 68.288～ 68.822 68.563 0.22 0.32
5 85.500 85.456～ 86.123 85.862 0.23 0.26
6 102.600 101.596～ 102.592 102.094 0.34 0.33
表 3　方法的回收率　　　　　　　　　　　　　(μg/mL)
样品 样品浓度 加入量 理论值 实测值 回收率(%)
1 27.831 7.800 35.631 35.387 97
2 55.724 7.800 63.524 63.592 101
3 88.549 7.800 96.349 96.171 98
1.2.6　样品分析　　精密称取样品粉末各 1.00 g,按 1.2.1实验方法制备样品溶液 ,按 1.2.2操作条
件 ,在测定波长 λ=510nm处测其吸光度 ,分析结果万寿菊花 、叶 、茎的黄酮含量分别为:2.80%、1.59%
和 0.15%.
16 鞍山师范学院学报 第 10卷
1.3　万寿菊花 、叶 、茎抗氧化性能的测定
1.3.1　邻苯三酚 -碳酸盐缓冲溶液-鲁米诺发光体系及其测定　　在比色管中分别加入 5×10-5 mol/L
的邻苯三酚溶液 、pH为 9.95的碳酸盐缓冲溶液(含浓度为 0.2 mmol/L的鲁米诺),启动 IFFM-D型流
动注射化学发光仪[ 5～ 7] ,流速均为 2.5mL/min,测出邻苯三酚 -碳酸盐缓冲溶液-鲁米诺发光体系的发
光 ,测 3次 ,取峰值平均值进行定量.发光强度以计数表示.
1.3.2　氧化性能测定及抑制率计算　　按前述 1.3.1所采用的发光体系 ,测定一系列浓度万寿菊花 、
叶 、茎样品的抑制后的发光 ,分别测定 3次 ,同样取峰值平均值进行定量.发光强度以计数表示.以邻苯
三酚-碳酸盐缓冲溶液-鲁米诺发光体系的发光强度为空白发光峰值 ,可计算出加入万寿菊花 、叶 、茎样
品后抑制发光的程度.
抑制率% =(空白发光峰值 -加万寿菊样品后的发光峰值)/空白发光峰值 ×100%
1.3.3　鲁米诺浓度对万寿菊花 、叶 、茎抑制率选择的影响　　取浓度为 2.5×10-4 mol/L的邻苯三酚
溶液 , pH值为 9.95的 Na2CO3 -NaHCO3缓冲溶液 ,抑制实验中的万寿菊花 、叶 、茎浓度为 5 mg/mL,改变
鲁米诺的用量 ,分别取 0.05, 0.10, 0.15, 0.20 , 0.25, 0.50, 1.00 mL的鲁米诺用缓冲溶液将其稀释至 25
mL进行实验.结果表明鲁米诺的加入量对抑制率有一定影响.当鲁米诺的浓度为 0.2mmol/L时万寿菊
花 、叶 、茎的抑制率达到最大值.因此本实验选鲁米诺的浓度为 0.2 mmol/L为适宜的测定条件.
1.3.4　缓冲溶液的pH值对抑制率的影响　　取浓度为 2.5×10-4mol/L的邻苯三酚溶液 , 浓度为
0.2mmol/L的鲁米诺溶液 ,抑制实验中万寿菊花 、叶 、茎的浓度为 5 mg/mL,仅改变 Na2CO3-NaHCO3缓
冲溶液的 pH值进行实验.结果表明 , pH值对抑制率有一定的影响 ,当 pH值为 9.62时抑制率达最大
值 ,但其发光强度很低 ,灵敏度不好;当 pH值为 10.58时 ,抑制率低;当 pH值为 9.95时 ,抑制率和 pH
值为 9.62时的抑制率仅差 2%,而且发光强度适宜 ,灵敏度也比较好 ,便于准确读数.故本实验选 pH值
9.95为适宜的测定条件.
1.3.5　邻苯三酚浓度对抑制率的影响　　选择 pH值为 9.95的 Na2CO3 -NaHCO3缓冲溶液 , 浓度为
0.2mmol/L的鲁米诺溶液 ,抑制实验中万寿菊花 、叶 、茎的浓度为5 mg/mL,仅改变邻苯三酚的浓度 ,分别
取浓度为 0.01 mol/L邻苯三酚 0.250, 0.125, 0.100, 0.025 mL稀释至 25 mL,即得浓度为 1×10-4 , 5×
10
-5 , 4×10-5 , 1×10-5 mol/L的邻苯三酚溶液进行实验.结果可知 ,邻苯三酚的浓度对抑制率也有一定
的影响 ,当浓度为 5×10-5 mol/L时万寿菊花 、叶 、茎的抑制率达最大值.因此 ,本实验选邻苯三酚浓度
为 5×10-5 mol/L为适宜条件进行实验.由以上实验可得出测定万寿菊花 、叶 、茎的抗氧化性能的最佳
条件为:鲁米诺的浓度 0.2mmol/L,缓冲溶液的 pH值 9.95 ,邻苯三酚的浓度 5×10-5 mol/L.
1.3.6　万寿菊花 、叶 、茎抗氧化性能的测定　　样品液的配制:称取样品 1.00g,加 25 mL水 ,于室温水
浴超声波 10 min,过滤 ,滤液用水定容至 50mL.
表 4　样品抗氧化性能的测定
C(mg/mL) I0 I (I0 -I)/I0 I′
0.008 1401 1269 9.42 90.58
0.016 1401 1174 16.20 83.80
0.026 1401 1040 25.77 74.23
0.040 1401 875 37.54 62.46
0.064 1401 769 45.11 54.89
0.080 1401 653 53.39 46.61
0.16 1401 437 68.81 31.19
0.40 1401 199 85.80 14.20
0.80 1401 110 92.15 7.85
样品抗氧化性的测定:从样品液中取 2.0 mL于 50 mL
容量瓶中 ,用水定容至刻度 ,配成浓度为 0.8 mg/mL的溶
液.在此溶液中取不同量于 25mL容量瓶中 ,用水定容至刻
度 ,配成不同浓度的测定液.在鲁米诺 -邻苯三酚-碳酸盐缓
冲液发光体系中测定万寿菊花的抗氧化性.结果如表 4.由
表 4可以看出 ,随着样品浓度的逐渐增加 ,化学发光强度呈
现逐渐降低的趋势 , 而抑制率则呈现逐渐增强的趋势 ,其
IC50(抑制率为 50%时的溶液的浓度)为 0.071 8 mg/mL,
同样条件下测定万寿菊叶 、茎的 IC50分别为 3.11 mg/mL
和 17.20 mg/mL.
2　结果与讨论
　　实验结果表明万寿菊花 、叶 、茎含有丰富的黄酮类化合物 ,总黄酮含量由大到小的顺序为:花 、叶 、
17第 4期 侯冬岩 , 等:万寿菊花 、叶 、茎中黄酮的含量及抗氧化性能的分析
茎.黄酮类化合物是一种天然的抗氧化剂 ,由抗氧化性能的测定可以看出花 、叶 、茎均具有较强的抗氧化
性能 ,其强度由大到小顺序亦为花 、叶 、茎.万寿菊花 、叶 、茎黄酮类化合物含量和抗氧化性都随浓度的逐
渐增加而增加 ,即万寿菊花 、叶 、茎的黄酮含量与抗氧化性能呈现明显的构效关系 ,说明各样品中的黄酮
类化合物的含量对其抗氧化性的大小起决定性作用.
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StudiesonFlavonoidsandAntioxidationEffectofFlower,
LeafandStemfromTageteserectaL.
HOUDong-yan, HUIRui-hua, LIUXiao-yuan, TANGRui
(DepartmentofChemistry, AnshanNormalUniversity, AnshanLiaoning114007, China)
Abstract:Theflavonesofflower, leafandstemfromTageteserectaL.areextractedbyultrasonicextraction
anddeterminedbyspectrophotometrywithrutinasstandardsample.Thecontentsoftotalflavonesare2.80%,
1.59%, 0.28% and0.15% respectively;therecoverisare98.0% ～ 103.0%;RSDislessthan0.39%.The
antioxidationefectofflower, leafandstemofTageteserectaLisdeterminedbytheflow-injectionchemilumi-
nescence.Theresultsshowthatflower, leafandstemofTageteserectaLhavestrongantioxidativeefect.
Keywords:TageteserectaL.;Flavones;Ultrasonicextraction;Flow-injectionchemiluminescencemethod;An-
tioxidantcapacity
(责任编辑:陈　欣)
18 鞍山师范学院学报 第 10卷