免费文献传递   相关文献

藤梨根药材中多糖的含量测定及不同来源样品质量评价



全 文 :中国执业药师·
基金项目:苏州市科技局科技计划项目(SYSD2013139,SYS201584)
作者简介:王亚琼,女,主管中药师。主要从事中药质量评价相关问题研究。通讯作者 E-mail:317888898@qq.com
多糖是藤梨根中的重要抗肿瘤成分 ,具有显
著的生物学活性 [1-3]。 然而,目前关于藤梨根多糖
含量的评价分析研究报道甚少。 多糖的定量方法
一般有苯酚-硫酸法,蒽酮-硫酸法及 3,5-二硝基
水杨酸比色法等。苯酚-硫酸法原理是糖在浓硫酸
作用下,脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛可与苯酚
缩合成一种橙红色化合物,在一定范围内其颜色
深浅与糖的含量成正比,且在 485 nm 左右波长处
有最大吸收峰,故可用比色法在此波长下测定。由
于苯酚-硫酸显色反应稳定性更好 [4-6],方法较为简
藤梨根药材中多糖的含量测定及
不同来源样品质量评价
王亚琼 1 温芝琪 2 钟水生 1 张华峰 1
(1 苏州市食品药品检验所,江苏 苏州 215104;2 苏州大学药学院, 215123)
【摘要】 目的:研究藤梨根药材中多糖的提取及含量测定方法,以评价藤梨根药材的质量。方法:采用水提醇沉法提取
多糖,用苯酚-硫酸法,在 485 nm处测定不同来源藤梨根多糖的含量。结果:原药材多糖含量为 24.37 ~ 56.96 mg/g,
商品药材多糖含量为 8.53 ~ 22.49 mg/g,原药材中多糖含量明显高于市售饮片中多糖的含量,皮部多糖的含量是木
部的 2 ~ 4倍。结论:该方法简单,准确,重复性好,可作为藤梨根药材的质量控制方法。
【关键词】 藤梨根;多糖;苯酚-硫酸法;含量测定;来源;质量评价
doi:10.3969/j.issn.1672-5433.2016.09.005
Determination of Polysaccharide Content in Radix Actinidiae Chinensis and Quality Evaluation of Samples from
Various Origins
Wang Yaqiong1, Wen Zhiqi2, Zhong Shuisheng1, Zhang Huafeng1 (1 Suzhou Institute for Food and Drug Control,
Jiangsu Suzhou 215104, China;2 School of Pharmacy, Suzhou University,215123)
ABSTRACT Objective: To investigate the method for extraction and content determination of polysaccharide in radix
actinidiae chinensis so as to evaluate the quality of the drug material. Methods: The polysaccharide was extracted by
water and precipitated by ethanol, and determined for polysaccharide content by phenol-sulfuric acid method at 485 nm.
Results: The content of polysaccharide was 24.37 ~ 56.96 mg/g in crude drug substance, and 8.53~22.49 mg/g in
commercial pieces. The content of polysaccharide in crude drug substance was significantly higher than that in
commercial pieces, and was 2 ~ 4 times higher in cortex than in xylem. Conclusion: This method is simple, accurate
and reproducible, which may be used for quality control of radix actinidiae chinensis.
KEY WORDS Radix Actinidiae Chinensis; Polysaccharide; Phenol-sulfuric Acid Method; Content Determination;
Origin; Quality Evaluation
论著
18
China Licensed Pharmacist Sep. 2016,Vol. 13 No.9
合理用药 呵护公众健康
单,快速,因此本实验采用苯酚-硫酸法测定藤梨
根药材中多糖的含量。
1 仪器、试剂及材料
1.1 仪器
DFY-300 粉碎机(温岭市林大机械有限公司);
标准药筛(辽宁省辽阳金属制品厂);电热恒温水
浴锅 (上海跃进医疗器械有限公司 );Lambda 35
紫外分光光度计(Perkin Elmer,USA);Sorvall ST 8
台式离心机 (Thermo ,USA ) ;AG245 电子天平
(METTLER,Switzerland)。
1.2 试剂
无水乙醇,苯酚及硫酸均为分析纯,购自国药
集团化学试剂有限公司。超纯水(Millpore,USA)。
1.3 材料
D-无水葡萄糖(批号:110833-201205,中国食
品药品检定研究院),3 批藤梨根原药材分别产自
安徽大别山,南京六合,福建宁德,由苏州市食品
药品检验所鉴定为中华猕猴桃(Actinidia chinensis
Planch.)的干燥根。 其他商品药材均来源于市场。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液制备
取供试药材细粉 2 g,精密称定 ,加超纯水
60 mL 沸水浴热回流 ,放冷后 ,3 500 rpm/min 离
心 5 min,精密量取上清液 2 mL,置 15 mL 离心
管中,精密加入无水乙醇,摇匀,冷藏过夜,取出,
7 000 rpm/min 离心 5 min, 弃去上清液, 沉淀加
热水溶解,转移至 25 mL 量瓶中,放冷,加水至刻
度,摇匀,即得。
2.2 对照品溶液的制备
取 D-无水葡萄糖对照品适量 ,精密称定 ,加
水制成每 1 mL 含 90 μg 的溶液,即得。
2.3 最大波长的确定
取适量对照品溶液及样品溶液测定全波长扫
描图,如图 1,因此选择 485 nm 为测定波长。
2.4 测定
精密量取供试品溶液 1.0 mL,置 10 mL 具塞
试管中 ,精密加入 5%苯酚溶液 1 mL (临用配
制 ),摇匀 ,再精密加入硫酸 5 mL,摇匀 ,置沸水
浴中加热 20 min,取出 ,置冰浴中冷却 5 min,以
相应试剂为空白,照紫外-可见分光光度法(《中国
药典 》(2015 年版 )四部通则 0401) [7],在 485 nm
的波长处测定吸光度。
2.5 多糖提取条件优化
根据文献报道 [4-6],并结合实验的实际情况,针
对浸提时间 ,浸提次数 ,醇沉倍数及时间进行考
察,以确定提取多糖的最佳实验条件。
2.5.1 提取时间 供试品按 “2.1”方法分别浸提
1,2,3,4,5,6 h 后 ,按 “2.4”方法测定 ,结果如图
2,发现在 3 h 内,多糖含量呈递增趋势,但随时间
延长,多糖的溶出达到平衡状态,因此浸提时间选
择为 3 h。
图 1 全波长扫描图
B 样品溶液
A 对照品溶液
19
中国执业药师·
2.5 .2 浸提次数 供试品按 “2.1”方法分别浸提
1,2,3 次 ,按 “2.3”方法测定 ,结果发现 2 次及 3
次提取后多糖含量并无显著增加 ,1 次已能将样
品中的多糖基本提取完全。
2 . 5 . 3 醇沉倍数 供试品按 “2 . 1 ”方法分别以
2,3,4 倍体积的无水乙醇沉淀 ,按 “2.4”方法测
定 ,结果如图 3,发现 3 倍体积的沉淀含量最大 ,
因此选用 3 倍体积的无水乙醇沉淀多糖。
2.5.4 醇沉时间 供试品按“2.1”方法加入 3 倍体
积的无水乙醇沉淀后分别于 0,1,2,4,6,18 h 后离
心,按“2.4”方法测定,结果如图 4,发现 1 小时后,
沉淀的多糖量已达平衡。
2.6 稳定性
取 3 批供试液,于停止反应后 0,0.5,1,2,4,
6 h 按“2.4”方法测定,结果如图 5,发现供试液在
冰浴中更加稳定,以 1 h 内完成测定为宜。
2.7 线性关系的考察
精密量取对照品溶液 0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mL,
分别置 10 mL 具塞试管中 ,各加水补至 1.0 mL,
按“2.3”方法测定。 以质量浓度 C(mg/mL)为横坐
标,吸光度 A 为纵坐标做标准曲线,得回归方程:
A = 11.95C-0.048,
r2 = 0.999,表明在 0.018 17 ~ 0.090 85 mg/mL
浓度范围内呈良好线性。
2.8 精密度
精密量取高、中 、低浓度对照品溶液 (浓度分
别为 0.090 85,0.054 51,0.018 17 mg/mL)及样品
溶液,按“2.4”方法测定,结果对照品 RSD 分别为
0.27%(高),0.16%(中)及 0.08%(低)。 样品 RSD
为 0.54%。
2.9 重复性
取同一批样品 6 份制备供试液,按“2.4”方法
测定,结果 RSD 为 4.22%。
图 2 提取时间考察
图 3 醇沉倍数
图 4 醇沉时间
图 5 供试液稳定性
论著
20
China Licensed Pharmacist Sep. 2016,Vol. 13 No.9
合理用药 呵护公众健康
2.10 回收率
于苯酚-硫酸反应前样品溶液中分别加入适
量 D-无水葡萄糖,按“2.4”方法测定,结果见表 1,
高 、中 、低平均回收率分别为 97.54%,100.32%及
95.56%。
2.11 样品测定
将收集的 12 批商品药材及 3 批自采原药材
按“2.1”方法制备,“2.4”方法测定,结果如表 2。
3 讨论
3.1 苯酚-硫酸法是测定多糖常用的方法,但苯酚
不稳定 ,需要临用现配 ,同时需要严格控制反应
时间,精确到秒,反应结束后立即放入冰浴中保存
待测。
3.2 藤梨根的商品药材和自采原药材有着较大的
差别,由于藤梨根的根部较难挖取,商品药材往往
采用的是靠近根茎的部位(地表附近),在木质部
多数带有小孔,即根茎类药材特有的髓部。从测定
结果可以看出商品药材的多糖含量普便偏低 ,同
时,自采原药材的皮部与木部比例也普遍略高于
商品药材,多糖的测定结果显示,皮部多糖的含量
是木部的 2 ~ 4 倍。 根据藤梨根的来源,根茎并
非药用部位,进一步规范药材市场上藤梨根的药
用部位来源,对于保证药材的质量和用药安全具
有重要的意义。
参考文献:
[1] 张昕. 藤梨根多糖的分离纯化与活性研究[D]. 杭州:浙江大学,
2010:58-60.
表 1 分析方法回收率
加标量 回收率 平均值 RSD
80.0
100.0
120.0
99.14
97.86
95.61
100.44
99.35
101.18
93.47
97.80
95.40
97.54
100.32
95.56
1.83
0.92
2.27
表 2 样品多糖含量
分类 编号(批号) 多糖含量(mg/g) 产地(供应商)
原药材
商品药材
木部
皮部
Crude-1
Crude-2
Crude-3
Commercial-4
Commercial-5
Commercial-6
Commercial-7
Commercial-8
Commercial-9
Commercial-10(151126)
Commercial-11(141001)
Commercial-12(150610)
Commercial-13(150817)
Commercial-14(151005)
Commercial-15(151201)
Xylem-12(150610)
Xylem-1
Xylem-2
Cortex-12(150610)
Cortex-1
Cortex-2
24.37
56.96
35.28
10.51
8.53
18.96
13.90
19.34
9.67
15.98
11.03
15.52
19.92
22.49
20.31
8.64
17.43
28.00
20.47
59.50
102.61
大别山
福建
南京六合
安徽六安
山东
湖北
江苏天灵药业
江苏天灵药业
湖北(亳州药材市场)
浙江(亳州药材市场)
安徽(亳州药材市场)
山东(亳州药材市场)
山东(亳州药材市场)
山东(亳州药材市场)
山东(亳州药材市场)
山东(亳州药材市场)
大别山
福建
山东(亳州药材市场)
大别山
福建
(%)
21
中国执业药师·
书《妇产科学》 [9] 均认为孕 24 ~ 34 周可能发生
早产者产前接受糖皮质激素(如地塞米松)治疗,
对促进胎儿肺成熟 ,减少 RDS 的发生很有意义,
且对胎儿利大于弊。
氯化钾注射液在临床上常用于患者体液补充
或低钾血症的治疗 ,说明书规定用 5%的葡萄糖
作为溶媒输注,而临床普遍采用氯化钠注射液作
溶媒,可缓解氯化钾注射液引起的局部疼痛,有研
究表明 [10],钠离子进入组织后可增高痛阈,从而减
轻钾离子的致痛作用,且不影响补钾效果。
对于妇产科病人 ,用药不仅要考虑药物对孕
产妇本身的治疗作用 ,还须保证对胚胎的影响 。
治疗中难免存在超药品说明书用药问题 ,用药安
全性问题是必须有保障的。 医师必须权衡治疗的
利益和风险,当需要超药品说明书用药时,应先对
患者进行治疗风险告知,明确告知患者治疗选择
的目的、预期结果和可能发生的危险,并签署知情
同意书。
另外 ,医师要不断学习新的药物治疗学信息
和知识,对药品说明书有充分的理解和掌握。需要
超药品说明书用药时,应充分权衡风险和利益,对
药品的不良反应、禁忌证、注意事项等特别关注,
发生不良事件时能及时有效地进行处置。 保证患
者所获得的利益大于风险。并须完善用药记录,加
强团队配合。
超说明书用药有些属于合理用药 ,有各类指
南、专家共识及文献报道支持;有些属于不合理用
药,临床应避免这类不合理用药,药师审方时应严
格把关。同时,建议药品生产企业及时更新药品说
明书,为保障患者用药安全提供依据。
参考文献:
[1] 张伶俐,李幼平 . 15 国超说明书用药政策的循证评价[J].中国
循证医学杂志,2012,12(4):426-435.
[2] World Medical Association. World Medical Association Declara-
tion of Helsinki:ethical principles for medical research involving
human subjects[J].JAMA,2013,310(20):2191-2194.
[3] 何静,杨洋,李华丽.甲氨蝶呤联合米非司酮治疗异位妊娠的临
床观察[J].实用妇产科杂志,2012,28(2):103.
[4] 顾丽华. 异位妊娠应用甲氨蝶呤联合米非司酮治疗的临床体会
[J].吉林医学,2014,12(4):2547.
[5] 李诵舷,于传鑫.实用妇科内分泌学[M].上海:上海医科大学出
版社,1997:92.
[6] Bedaiwy MA, Mousa NA, Esfandiari N, et al. Follicular phase
dynamics with combined aromatase inhibitor and follicle
stimulating hormone treatment [J].J Clin Endocrinol Metab,
2007,92(3):825-833.
[7] 李颂军,柴小山,周昱言,等 .单纯来曲唑促排卵在冻融胚胎移
植内膜准备中的临床疗效 [J].中南大学学报 ,2012,37(12):
1233-1238.
[8] 母义明,纪立农,宁光,等.二甲双胍临床应用专家共识[J].中国
糖尿病杂志,2014,22(8):673.
[9] 丰有吉,沈铿. 妇产科学[M].2 版.北京:人民卫生出版社,2010:
67-226.
[10] 陈明慧,顾云,李君久,等 . 静脉补钾局部疼痛缓解方法的研
究[J].中华护理杂志,2003,38(3):174.
(收稿日期 :2016-05-13)
[2] 龙凯花,王小平,白吉庆,等.中药藤梨根抗肿瘤研究[J].中国现
代中药,2013,15(10):846-849.
[3] 赫军,马秉智,赵铁,等.藤梨根的化学成分研究[J].中国药学杂
志,2014,49(3):184-186.
[4] 郝旭亮,张永文 .中药质量标准中建立多指标含量测定的必要
性浅析[J].中国执业药师,2009,6(9):31-33.
[5] 钟方晓,任海华,李岩 .多糖含量测定方法比较 [J].时珍国医国
药,2007,18(8):1916-1917.
[6] 张媛媛,张彬 .苯酚 - 硫酸法与蒽酮 - 硫酸法测定绿茶茶多糖
的比较研究[J].食品科学,2016,37(4):158-163.
[7] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(2015 年版)四部[M].北
京:中国医药科技出版社,2015:38-40.
(收稿日期 :2016-04-27)
(上接第 9 页)
论著
22