全 文 ：化学试剂 ,2007 ,29(7),413 ～ 414;433
反相高效液相色谱法同时测定喜树果中的
喜树碱 、金丝桃苷含量
刘展眉＊1 ,2 ,崔英德2 ,陆益民2
(1.广东工业大学 轻工化工学院 , 广东 广州　510090;
2.仲恺农业技术学院 化学与化工系 , 广东 广州　510225)
摘要:建立了采用 Zorbax C18柱 ,流动相为 V(甲醇)∶V(0.025 mol/ L磷酸)=66∶45(混合后用三乙胺调至 pH 3.0 ～ 3.2), 检
测波长360 nm ,流速 0.8 mL/ min ,柱温 25℃的同时测定喜树果(Camptotheca acurnirraca Decca)中喜树碱 、金丝桃苷(Hyperin)
的高效液相色谱方法。喜树碱 、金丝桃苷峰形良好 ,与其他组分的色谱达到基线分离。金丝桃苷的线性范围是 0.23 ～
65 μg/mL ,回归方程:y=40.929x+100.93 , r=0.998 8 , 平均回收率为 102.4%, RSD为 0.76%。测定喜树碱的回归方程:
y=-9.273 25+33.573 38x , r=1.000 1 , 线性范围是 0.10～ 60.0 μg/mL ,平均回收率为98.3%, RSD为 0.90%。
关键词:喜树果;喜树碱;金丝桃苷;高效液相色谱
中图分类号:O657.7　　文献标识码:A　　文章编号:0258-3283(2007)07-0413-02
　　收稿日期:2006-03-19
基金项目:广东省科技攻关项目(2006B35502008)资助。
作者简介:刘展眉(1963-), 女 ,广州人 , 博士生 ,副教授 , 主
要从事天然产物化学研究。
　　喜树(Camptotheca acuminat)全株含有抗肿瘤
作用的喜树碱 ,而喜树果中喜树碱的含量较高。
人们先后从喜树果实 、根 、树皮中发现 31种化合
物 ,其中喜树碱及其衍生物有 10余种 ,尹锋[ 1]还
证喜树果中实含有金丝桃 、三叶豆苷 。药理试验
表明 ,金丝桃苷具有提高动物耐低压缺氧的能力 ,
有镇静效果 ,对垂体后叶素引起的急性心肌缺血
和缺血性脑损伤有保护作用。用高效液相色谱法
测定喜树碱已有报道 ,本课题组曾用反相高效液
相色谱法测定喜树果中喜树碱的含量[ 2] ,刘文哲
等[ 3]制定了喜树果中喜树碱和 10-羟基喜树碱的
HPLC分析方法 。至于金丝桃苷的分析 ,张忠会[ 4]
用 RP-HPLC 法测定了山楂提取物中金丝桃苷的
含量 ,许慧君[ 5]用 RP-HPLC 法测定照山白中金丝
桃苷的含量 ,而还未见有测定喜树果中金丝桃苷
含量的报道 ,更未见同时测定喜树果中的喜树碱
和金丝桃苷的报道。本文采用高效液相色谱法同
时测定喜树果中的喜树碱和金丝桃苷含量 ,方法
操作简便 、准确 。
1　实验部分
1.1 　主要仪器与试剂
Agilent 1100系列高效液相色谱仪 ,包括排气
装置 G1322A Degasser 、四无泵 G1311A QUAT
PUMP、自动进样器G1313A ALS 、DAD二极管检测
器G1315B 等 4个工作模块 , Aglient 1100 化学工
作站(Instrument I)。
喜树碱标准品(黄石市园健医药科技有限公
司 ,纯度为 98%);金丝桃苷标准品(美国 sigma公
司);甲醇为色谱纯;磷酸和三乙胺为分析纯;喜树
果(元健医药有限公司 ,经广东省医药公司王晓文
药剂师鉴定为正品)。
1.2 　标准品溶液的配制
精确称取 1 mg 金丝桃苷标准品置于微量离
心管中 ,用移液管精确吸取1 mL甲醇加入微量离
心管中 , 摇匀 , 作为标准对照溶液 , 浓度为
1 mg/mL。
精确称取 1 mg 喜树碱标准品置于微量离心
管中 ,用移液管精确吸取 1 mL 甲醇加入微量离心
管中 ,摇匀 ,作为标准对照溶液 ,浓度为 1 mg/mL。
1.3 　色谱条件
色谱柱为 Zorbax C18(4.6mm内径×150mm),
流动相为 V(甲醇)∶V(0.025 mol/L磷酸)=66∶45
(混合后用三乙胺调至 pH 3.0 ～ 3.2),检测波长
360 nm , 流速 0.8 mL/min , 柱温 25℃, 进样量 10
μL。样品溶液经一次性滤纸过滤 。
1.4 　实验方法
样品溶液的制备和测定:将喜树果粉碎 ,过
100目筛 ,精确称取喜树果粉 50.0 g ,加入 50.00
mL 甲醇 ,超声提取 30min。同法再提取 2次 ,合并
提取液 ,减压浓缩后 ,用甲醇定容至 50.00 mL ,摇
413第 29卷第 7 期 刘展眉等:反相高效液相色谱法同时测定喜树果中的喜树碱 、金丝桃苷含量
DOI :10.13822/j.cnki.hxsj.2007.07.009
匀 ,配成试样母液 ,备用。吸取样品溶液 10 μL注
入液相色谱仪中 ,测定其中喜树碱和金丝桃苷色
谱峰峰面积 ,根据线性关系方程式算出样品中喜
树碱和金丝桃苷的浓度。
分别准确移取一定量标准对照液或试样溶液
置于容量瓶中定容 ,摇匀 ,配制系列不同浓度的标
准对照液或试样溶液 。分别以微量进样器移取标
准对照液或试样溶液进行分析 ,以峰面积外标校
准曲线法定量。
2　结果与讨论
2.1 　色谱条件的选择
2.1.1 　检测波长的选择
在Beckman 紫外-可见分光光度计上扫描一
定浓度标准对照溶液 ,得到适合同时测定喜树碱
和金丝桃苷的 λmax为 360 nm 。
2.1.2 　流动相及流速的选择
以甲醇-5%磷酸-三乙胺(体积比为 45∶55∶
0.36)为流动相对试样溶液进行色谱分析实验[ 5] ,
流速 1.0 mL/min。谱图显示 ,色谱峰前伸 ,有些拖
尾 ,分离效果不好 。然后改变流动相物质比例及
流速 , 进行比较 , 选定流 动相为:V(甲醇)∶
V(0.025 mol/L 磷酸)=66∶45(混合后用三乙胺调
至pH 3.0 ～ 3.2),流速 0.8 mL/min。在以上色谱
条件下 ,样品中喜树碱及金丝桃苷与其他组分的
色谱峰分离度良好 ,见图 1 、2。
图 1　喜树碱和金丝桃苷标准品的 HPLC 色谱图
Fig.1　HPLC figure of the standard of Camptothecin
and Hyperin
1.喜树碱;2.金丝桃苷
图 2　喜树果样品的 HPLC 色谱图
Fig.2　HPLC figure of sample
1.喜树碱;2.金丝桃苷
2.2 　线性关系的建立
分别精密移取“1.2”项所配的喜树碱和金丝
桃苷标准品溶液各 10 、20 、30 、40 、50和 60 μL ,混
合后 ,定容到 1 mL ,得喜树碱和金丝桃苷浓度均
为5 、10 、20 、30 、40 、50 、60 μg/mL的混合对照品溶
液。将上述混合对照品溶液分别平行测定 3次
(均进样 10.0 μL),用平均峰面积对进样量 c(μg)
进行线性回归 ,喜树碱和金丝桃苷的回归方程和
相关系数分别为:y =-9.273 25+33.573 38x ,
r=1.000 1 , y =40.929 x+100.93 , r=0.998 8;喜
树碱测定线性范围是 0.10 ～ 60.0 μg/mL ,金丝桃
苷的线性范围是0.23 ～ 65 μg/mL。
2.3 　精密度试验
精密吸取 1mg/mL喜树碱和金丝桃苷标准品
溶液 10μL ,过滤 ,连续进样 5次 ,测喜树碱和金丝
桃苷的峰面积 ,计算出相对标准偏差(RSD)分别
为 1.23%和 1.59%。
2.4 　稳定性试验
取10 μL喜树果试样溶液 ,过滤 ,每隔 2 、4 、6 、
8 、12 、24 h测定 1次 ,结果表明金丝桃苷 12 h内稳
定 ,峰面积的 RSD 为 1.2%。喜树碱已证实在
12 h内稳定[ 6]
2.5 　加样回收率试验
移取 2.00 mL 喜树果样品溶液共 3 份 ,分别
加入含5μg/mL 喜树碱 、3μg/mL金丝桃苷的标准
品溶液 1 mL ,按“1.4”项的方法制备溶液 , 并按
“1.3”中所列色谱条件进行测定 。结果表明 ,喜树
碱平均回收率为 99.8%, RSD 为 0.90%;金丝桃
苷平均回收率为 102.4%, RSD 为 0.76%。可见
本方法的准确度高 ,精密度好 ,方法可行 。
2.6 　重复性试验
精确移取 2.00 mL 喜树果样品液 ,测定其中
喜树碱和金丝桃苷色谱峰峰面积 ,重复 3次 ,计算
出喜树碱峰面积的 RSD为 1.02%(n=3),金丝桃
苷峰面积的 RSD为 1.12%(n=3)。
2.7 　试样溶液的测定
精密称取喜树果约 10 g ,按“1.4”项方法制备
供试品溶液 ,并按“1.3”中所列色谱条件测定峰面
积 ,然后计算其含量 。3 批样品中喜树碱的含量
分别为 0.019%、0.020%和 0.021%, RSD 分别为
0.88%、0.79%、1.19%;金丝桃苷的含量分别为
0.016%、0.015%和 0.018%,RSD分别为 0.98%、
1.39%、1.19%。
　　 (下转第 433页)
414 化　学　试　剂 2007年 7 月
表 1 　标题化合物 C 化学位移实测值与理论数值的
比较(括号中数字为 C 原子的数目)
Tab.1　The comparison of C chemistry shift values in test
and theory for title compound(The number in bracket indicates
the quantity of the C atom)
C1(1)C2(2)C3(2)C4(1) C5(1) Ph—C(1, 2 , 2 ,1)
理论值 42.90 52.27 33.44 41.91 120.47 137.77 , 125.90 ,
128.74 , 126.96
实测值 42.63 51.45 33.21 40.30 121.60 139.23 , 126.18 ,
129.99 , 129.34
3　结论
利用二维核磁技术清楚的标明了标题化合物
各原子之间的键连关系 ,指出测试样品中水分子
的来源与存在方式。表明利用有关的核磁技术可
以达到单晶 X 射线测试的效果 。
参考文献:
[ 1] HONG E.Antihypertensive chemotherapy using 1-methyl-3-
keto-phenyl-quinuclidinium salts:US , 3 860 717[ P] .1975-
04-12.
[ 2] MATHER L E ,MEFFIN P J.Clinical pharmacokinetics pethi-
dine[ J] .Clin .Pharmacokinet , 3(5):352-368.
[ 3] GNECCO D , TERAN J L , ENERIQUEZ R G , et al.An im-
proved preparation of 1-methyl-4-cyano-4-phenylpiperidine
[ J] .OPPI Briefs , 1996 , 28(4):478-450.
[ 4] TANG Guang-shi , CHEN Xiao- lian , ZHANG Sheng-yuan , et
al.The first trisazabridged[ 60] fulleroid:drilling a hole on
the fullerene[ J] .Org.Lett., 2004 , 6(22):3 925-3 928.
[ 5] LIU Shu-zhi , TANG Guang-shi , WANG Jing.Synthesis , char-
acterization , intramolecular Diels-Alder reaction tandem de-
hydroaromatization of a diene-diyne[ J] .Chem.Lett., 2005 ,
34(7):938-939.
The peak assignments of 1-methyl-4-cyano-4-phenylpiperi-
dine in NMR LI Li1 , TANG Guang-shi＊1 , WANG Jing2(1.Col-
lege of Science , Beijing University of Chemical Technology , Bei-
jing 100029 , China;2.Research Institute of Petroleum Process-
ing , Beijing 100083 , China), Huaxue Shiji , 2007 , 29(7), 431 ～
433
Abstract:A full analysis was made to 1-methyl-4-cyano-4-
phenylpiperidine hydrochloride through the fine 1HNMR,
13CNMR , gHSQC , gCOSY , NOESY1D and ATP technology.The
spectral data and the peak assignments were reported for the first
time.The signal of H2O in 1HNMR was interpreted.
Key words:phenylacetonitrile;bis(β-chloroethyl)methylamine;
dehydrogenation and cyclization;2D NMR technique
(上接第 414页)
参考文献:
[ 1]尹锋 , 胡立宏 , 喜树中两个 DNA 拓扑异构酶 I 抑制剂
[ J] .中国天然药物 , 2005 , 3(1):21-242.
[ 2] 张燕红 ,刘展眉 , 沈慧芳 ,等.反相高效液相色谱法测定
喜树果中喜树碱的含量[ J] .色谱 , 2003 , 21(2):162-
164.
[ 3] 刘文哲 ,秦海燕 , 索志荣 ,喜树果中喜树碱和 10-羟基喜
树碱的 HPLC 分析[ J] .药物分析杂志 , 2005 , 25(2):168-
170.
[ 4] 张忠会 ,秦婷 , 王惠达 ,等.RP-HPLC 法测定山楂提取物
中金丝桃苷的含量[ J] .中草药 , 2004 , 35(8):884-885.
[ 5] 许慧君 ,袁志芳 , 张兰桐 ,等.RP-HPLC 法测定照山白中
金丝桃苷的含量[ J] .药物分析杂志 , 2004 , 24(2):162-
164.
[ 6]刘展眉 , 崔英德 , 方岩雄 , 自然光和热对闭环(E 环)喜
树碱稳定性的影响[ J] .广东化工 , 2005 , 32(7):3-7.
Determination of Camptothecin and Hyperin in the Camp-
totheca acurnirraca Decca Remnant by reversed phase high
performance LIU Zhan-mei＊1, 2 , CUI Ying-de2 , LU Yi-ming2
(1.Faculty of Chemical Engineering and Light Industry , Guang-
dong Engineering University , Guangzhou 510090 , China;2.Facul-
ty of Chemistry and Chemical Engineering , Zhongkai University of
Agricultural and Technology , Guangzhou 510225 , China),Huaxue
Shiji , 2007 , 29(7), 413 ～ 414;433
Abstract:A reversed phase high performance liquid chromato-
graphic method for the separation and determination of Camp-
tothecin and Hyperin in the Camptotheca acurnirraca Decca Rem-
nant was described.Chromatography was carried out on the Zor-
bax C18 column used as the analytic column provided with a mo-
bile phase consisting of a mixture of methanol and 0.025 mol/ L
of phosphoric acid(at a ratio of 66∶45 by volume)(adjusted to
pH 3.0～ 3.2 with triethy lamine).The detection wavelength was
set at 360 nm.The calibration curve of Hyperin was linear over
the range from 0.23 ～ 65 μg/mL(r =0.999 8).The regression
equation was y =40.929x +100.93;The calibration curve of
Hyperin was linear over the range from 0.10 ～ 60 μg/mL(r =
1.000 1).The regression equation was y =-9.273 25 +
33.573 38x , and the average recovery rate was 98.3%, with
RSD equating to 0.90%.
Key words:Camptotheca acurnirraca Decca Remnant;Camp-
tothecin;Hyperin;HPLC
433第 29卷第 7 期 李丽等:1-甲基-4-氰基-4-苯基-哌啶盐酸盐的化学位移指认