全 文 ：三叶青总氨基酸对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用
黄真 , 毛庆秋(浙江中医药大学 药学院 ,杭州 310053)
摘要:目的　观察三叶青总氨基酸(TAART)对四氯化碳(CCl
4
)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法　选用 CCl
4
致小鼠
急性肝损伤模型 , 以测定小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活性 , 肝脏系数 , 肝组织中超氧化物歧化酶
(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量及对肝组织进行病理学检查等指标观察 TAART对肝损伤的保护作用。结果　TAART能明
显降低 CCl4致小鼠肝损伤血清 ALT, AST值 ,降低肝脏系数及肝组织中 MDA的含量 , 增加肝组织中 SOD活性 , 减轻 CCl4对肝
脏细胞的病理损伤。结论　三叶青总氨基酸对 CCl
4
致小鼠急性肝损伤具有保护作用 , 其机制可能与其抗氧化作用相关。
关键词:三叶青总氨基酸;四氯化碳;肝损伤;小鼠
中图分类号:R282.710.5　　　文献标识码:A　　　文章编号:1007-7693(2007)03-0190-03
ProtectiveEffectsofTotalAminoAcidsfrom RadixTetrastigmaeonAcuteHepaticInjuryInducedby
CCl4
HUANGZhen, MAOQing-qiu(ZhejiangChineseMedicineUniversityColegeofpharmaceuticalsciences, Hangzhou310053, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　ToinvestigatetheprotectiveeffectsoftotalaminoacidsfromRadixTetrastigmae(TAART)onhepatic
injuryinducedbyCCl
4
.METHODS　MicewereadministratedwithTAARTig500, 250 mg· kg-1 dailyfor7 drespectively, and
thenacutehepaticinjurymodelwasinducedby0.1% carbontetrachlorideip20 mL· kg-1.TheprotectiveefectsofTAARTonthe
modelwereevaluatedbythedeterminationoftheactivityofserumalanineandaspartateaminotransferase(ASTandALT)activity, liv-
erindex, theactivityofSODandtheMDAcontentinliver, andthehepatictissuepathologywasobserved.RESULTS　Folowingthe
treatmentwithTAART, ASTandALTactivities, liverindexandthecontentofMDAinliverwereobviouslyreduced;theactivityof
SODinlivewasobviouslyincreased.Furthermore, thepathologicalchangeswerealsoimprovedsignificantly.CONCLUSION　TA-
ARTholdsprotectiveefectsontheacutehepaticinjuryinducedbyCCl4 inmice.Themechanismsmayberelatedwiththeirreducing
anti-oxidation.
KEYWORDS:totalaminoacidsfromRadixTetrastigmae;CCl
4
;hepaticinjury;mice
　　三叶青 RadixTetrastigmae为葡萄科植物三叶崖爬藤
TetrastigmahemsleyanumDielsetGilg的干燥块根 , 是我国特
有的植物资源 , 分布于浙江 , 江西 ,福建 ,台湾 ,湖北 ,广东 ,广
西 , 四川 ,贵州及云南等省区 [ 1] , 民间常用于治疗肝炎 、高热
惊厥 、肺炎及哮喘等症 [ 2] , 但其化学成分及药理作用尚不清
楚。笔者此前观察到三叶青提取物有消炎 、镇痛 、解热 [ 3]以
及保护肝损伤的作用 [ 4] , 在此基础上 , 作者进一步提取分离
了三叶青有效部位总氨基酸(TotalAminoAcidsfromRadix
TetrastigmaeTAART), 观察其对 CCl4致小鼠肝损伤的保护作
用 , 为拓展三叶青的临床应用及开发奠定基础。
1　实验材料
1.1　药物和试剂
三叶青干品 , 购于浙江省中医院中药房 , 经浙江中医药
大学药学院资源鉴定教研室陈孔荣副教授鉴定为三叶青
(RadixTetrastigmae)。三叶青总氨基酸(TAART)由浙江中
医药大学资源工程重点实验室制备提供 , 纯度≥80%。 AST
试剂盒 、ALT试剂盒 、SOD试剂盒及 MDA试剂盒均购于南京
建成生物工程研究所;四氯化碳(CCl4):分析纯 ,上海凌峰化
学试剂有限公司 , 批号 050322, 使用时用花生油配制成 0.1%
的油溶液;联苯双酯滴丸:浙江医药股份有限公司新昌制药
厂生产 , 批号 041213。
1.2　动物
昆明种小鼠 , 18 ～ 22 g, ♀♂兼用 ,由浙江中医药大学实
验动物中心提供。实验动物使用许可证号 SYXK(浙)2003-
0003。
1.3　仪器
奥林巴斯 AU-600全自动生化分析仪 , 日本奥林巴斯
公司出品;CHS-313生物显微镜 , 日本奥林巴斯公司出品;
752型紫外分光光度仪 ,无锡新龙科技有限公司。
2　方法
2.1　动物分组和造模方法
取 50只小鼠 , 随机分成 5组 , 每组 10只 , 分别为正常
组 , 四氯化碳损伤模型组 , TAART高 、低剂量组(500, 250 mg
· kg-1)及联苯双酯组(150mg· kg-1)。给药组连续灌胃给
药 7 d,正常组及四氯化碳模型组给予同量的生理盐水 , 于末
次给药后 1 h, 除正常组 ipNS20mL· kg-1外 ,其余各组均 ip
0.1% CCl4花生油溶液 20 mL· kg-1。染毒 17 h后 , 小鼠采
用眼眶放血法采血 ,测定血清中 ALT及 AST的活性;测定每
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DOI :10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2007.03.008
只小鼠的肝脏指数(肝脏重量 /体重);另取相同部位的 1小
块肝组织用生理盐水制备成 10%的肝匀浆 , 测定肝组织中
SOD活性及 MDA含量。
2.2　生化指标测定
在全自动生化分析仪上测定血清 AST, ALT活性;用黄
嘌呤氧化酶法测定肝组织 SOD活性 , 用硫代巴比妥酸法测
定肝组织中 MDA含量 , 肝组织中蛋白含量以考马斯亮蓝法
测定 , 所有的测定方法按试剂盒说明进行。
2.3　组织切片观察
取小鼠相同部位肝组织 , 用 10%的福尔马林溶液固定 ,
石蜡包埋切片 , 常规 HE染色 , 光镜下观察肝组织病理学变
化。将肝组织损伤程度分为 4级:0级(-), 肝组织结构正
常 , 无明显变性 , 坏死及炎症细胞浸润;1级(+)、肝小叶结
构尚正常 , 可见明显的混浊肿胀 , 气球样变或脂肪变性 , 散在
点状坏死;2级(++), 肝小叶结构不清 ,可见明显的灶状坏
死 , 伴有炎症细胞浸润;3级(+++), 肝小叶结构不清 、可
见明显的片状坏死 , 伴有炎症细胞浸润。
2.4　统计学分析
实验结果数据均采用 x±s表示 , 采用 SPSS11.5分析应
用软件处理分析数据 , 组间样本比较采用 t检验;肝脏组织
病理学变化用 Ridit法分析统计处理 , P<0.05具有显著性差
异。
3　结果
3.1　TAART对 CCl4致肝损伤小鼠血清 ALT、AST活性的影
响
实验结果表明 , 模型组小鼠血清中 ALT、AST活性明显
高于正常组(P<0.01, P<0.01),肝脏系数亦明显升高(P<
0.05)。与模型组比较 , TAART(500 mg· kg-1 , 250 mg·
kg-1)能明显降低小鼠血清 ALT(P<0.01, P<0.01)及 AST
(P<0.05, P<0.05)活性;TAART(500 mg· kg-1)还能明显
降低小鼠肝脏系数(P<0.05);TAART(500 mg· kg-1)效果
与阳性对照药联苯双酯效果相当。见表 1。
表 1　TAART对 CCl4致肝损伤小鼠血清 AST和 ALT活性及
肝脏系数的影响(n=10, x±s)
Tab1　EfectsofTAARTonliverindex, theactivitiesofAST
andALTinserum(n=10, x±s)
Group Dose/mg· kg-1
AST
/U· L-1
ALT
/U· L-1
Liverindex
/mg· g-1
Control - 95.6±13.02) 30.1±5.42) 43.7±4.81)
Model - 144.3±11.94) 97.8±15.14) 48.6±2.13)
TAART 500 111.4±14.51) 37.3±10.02) 45.5±2.91)
250 124.4±9.51) 43.9±15.92) 46.8±2.7
Bifendate 150 107.4±17.11) 37.8±8.92) 45.7±2.31)
注:与模型组比较 , 1)P<0.05, 2)P<0.01;与正常组比较 , 3)P<
0.05, 4)P<0.01
Note:vsthemodelgroup, 1)P<0.05, 2)P<0.01;vsthecontrolgroup,
3)P<0.05, 4)P<0.01
3.2　TAART对 CCl4致肝损伤小鼠肝匀浆 SOD活性及 MDA
含量的影响
实验结果表明 , 与正常组比较 , CCl4中毒后小鼠肝中
MDA含量显著升高(P<0.01), SOD活性明显降低(P<
0.01)。与模型组比较 , TAART(500 mg· kg-1 , 250 mg·
kg-1)皆能剂量依赖性的抑制肝中 MDA含量(P<0.01, P<
0.05)及升高 SOD活性(P<0.01, P<0.05)。见表 2。
表 2　TFRT及 TAART对 CCl4致肝损伤小鼠肝中 SOD活性
及 MDA含量的影响(n=10, x±s)
Tab2　EffectsofFRTontheactivityofSODandthecontentof
MDAinliver(n=10, x±s)
Group Dose/mg· kg-1
SOD
/U· mg-1 Prot
MDA
/nmol· mg-1 Prot
Control - 116.1±9.92) 3.4±0.92)
Model - 92.3±7.13) 7.1±1.8
TAART 500 109.7±10.72) 4.0.±0.72)
250 102.9±8.11) 5.0±0.91)
Bifendate 150 107.0±11.72) 4.0±0.82)
注:与模型组比较 , 1)P<0.05, 2)P<0.01;与正常组比较 , 3)P<0.01
Note:vsthemodelgroup, 1)P<0.05, 2)P<0.01;vsthecontrol
group, 3)P<0.01
3.3　TAART对 CCl4致小鼠急性肝损伤肝组织病理学的影响
病理观察结果表明 , 正常对照组小鼠肝组织结构正常 ,
无变性 、坏死等病理改变 , 而 CCl4模型组小鼠肝组织结构镜
下可见肝细胞不同程度的变性(以细胞水肿为主)与坏死 ,坏
死呈凝固性 , 并以环中央静脉分布为主 ,伴中性粒细胞 、单核
细胞等炎性细胞浸润 , 而 TAART各剂量组的肝细胞坏死 ,变
性及炎性细胞浸润程度均有所减轻。 经 Ridit法统计处理 ,
均有统计学意义 ,表明 TAART有保护肝损伤作用。见表 3。
表 3　TAART对 CCl4致小鼠肝组织损伤的影响(n=10, x±s)
Tab3　EffectsofFRTonpathologicalchangesinmice(n=10,
x±s)
Group Dose/mg· kg-1
Gradeofinjury
- + ++ +++ P
Control - 10 0 0 0 <0.01
Model - 0 0 3 7
TAART 500 3 5 2 0 <0.01
250 2 3 4 1 <0.05
Bifendate 150 4 3 3 0 <0.01
4　讨论
腹腔注射 CCl4植物油溶液是目前国际上常用的制备肝
损伤模型的方法。 CCl
4
是一种强毒性化学物质 , 进入体内
后 , 在肝脏内经肝细胞色素 P450激活 , 生成活泼的三氯甲基
自由基和氯自由基。这些自由基可与细胞内和细胞膜的大
分子发生共价结合 , 使酶的功能丧失 , 细胞膜脂质过氧化 ,胞
浆 Ca2+浓度升高 ,导致肝细胞损伤坏死 , 胞浆内转氨酶渗入
血液 , 使血清中该酶的活性升高等 [ 5-6] 。 本实验结果亦表
明 , CCl4中毒后 , 小鼠血清 ALT、AST活性及肝中 MDA含量
明显升高 , 肝中 SOD活性明显下降 , 肝脏外观呈土黄色 , 病
理检查可见肝脏炎症细胞浸润 、脂肪性变 、混浊肿胀 、气球样
变和肝细胞坏死。
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TAART能够明显降低 CCl4致小鼠肝损伤后 ALT, AST活
性升高;降低肝脏指数及肝中 MDA生成量 , 提高肝中 SOD
活性;减轻肝细胞变性 、炎症浸润及坏死等病变 ,提示 TAART
对 CCl4所致肝损伤具有一定的保护作用 ,其作用机制可能与
其提高肝细胞抗氧化能力相关。上述实验结果表明 , 三叶青
所含的总氨基酸是三叶青保肝作用的有效活性部位 , 为拓展
三叶青的临床应用及开发奠定了实验基础。
参考文献
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收稿日期:2006-11-23
作者简介:万绍晖(1959-),女 ,江西南昌人 ,博士,副教授 ,研究方向:中药质量评价。 Tel:0378-3880680, E-mail:wsh@henu.edu.cn
肝宁颗粒对 α-萘异硫氰酸酯所致大鼠黄疸模型的退黄降酶作用
万绍晖 1, 2 ,丁原全 3 ,蒲晓辉1 ,郭立 1 ,康廷国 2(1.河南大学药学院 ,河南开封 475004;2.辽宁中医药大学 ,沈阳 110032;3.沈阳军区
卫生技术干部训练中心 ,辽宁大连 116017)
摘要:目的　观察肝宁颗粒对 α-萘异硫氰酸酯(ANIT)所致大鼠急性黄疸模型的退黄降酶作用。方法　将 Wistar大鼠随机分
为正常组 、模型组 、肝宁颗粒高 、中 、低剂量组和茵栀黄注射液组。各治疗组连续灌胃给药 7 d后 , ANIT诱发黄疸模型 , 48h后
摘眼球取血 , 分离血清 ,以血清肝功能指标 、SOD的活力及 MDA含量以及肝脏组织病理学的改变为观察指标。结果　与模型
组比较 , 肝宁颗粒高 、中剂量组 、茵栀黄组的 ALT, AST, TBIL, ALP, GGT, MDA均显著下降(P<0.01或 P<0.05), SOD显著升
高(P<0.01或 P<0.05);与茵栀黄注射液比较 , 肝宁颗粒各剂量组的 TBIL均显著增高(P<0.01), 肝宁颗粒高剂量组的
ALT, GGT, SOD, MDA均无差异(P>0.05)。肝脏病理组织学检查表明 ,肝宁颗粒能明显减轻肝细胞变性 、坏死和肝小胆管增
生。肝宁颗粒高 、中 、低剂量组之间存在量效关系 。结论　肝宁颗粒剂具有降低实验性胆汁淤积大鼠血清胆红素 、转氨酶和
改善肝脏组织损伤的作用 ,疗效略低于茵栀黄注射液。
关键词:肝宁颗粒剂;胆汁淤积;肝功能;肝脏病理组织学;大鼠
中图分类号:R282.710.5　　　文献标识码:A　　　文章编号:1007-7693(2007)03-0192-04
ActionofGanningGranulaonReducedJaundiceandEnzymeinJaundiceModelofRatInducedbyANIT
WANShao-hui1, 2 , DINGYuan-quan3 , PUXiao-hui1 , GUOLi1 , KANGTing-guo2(1.PharmaceuticalColegeofHenan
University, Kaifeng475004, China;2.LiaoningUniversityofTraditionalChineseMedicine, Shengyang110032, China;3.PLAMedical
ServicemenTrainingCenterofShenyangMilitaryRegion, Dalian116017.China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　Toobservetheactionofganninggranulaonreducedjaundiceandenzymeinjaundicemodelofratin-
ducedbyANIT.METHODS　Wistarratswererandomizedintosixgroups:groupAinwhichnotreatmentwasgiven, groupBin
whichANITwasgivenontheseventhday, groupCinwhichhighdosageofGanninggranulawasgiven, groupDinwhichmoderate
dosageofGanninggranulawasgiven, groupEinwhichlowdosageofGanninggranulawasgiven, andgroupGinwhichYinzhi-
huanginjectionwasgivenaspositivecontrol.ExceptgroupAandB, theothergroupsweregivencorespondingmedicinesfor7 days
andthenadditionalyadministeredANITtoinducedjaundice.After48 h, theratsbloodwasgainedfromeyes.Theserumwassepara-
ted.TheliverfunctionalsignandthecontentofSODandMDAinserum, andthechangeinpathologyoflivertissuewereobserved.
RESULTS　ComparedtogroupB, ALT, AST, TBIL, ALP, GGT, MDAofgroupCandDandGgroupdroppedobviously(P<0.01
·192· ChinJMAP, 2007June, Vol.24 No.3　　　　　　　　　　　　　　　中国现代应用药学杂志 2007年 6月第 24卷第 3期