全 文 ：·化学成分·
山核桃外蒲壳化学成分及抗肿瘤活性研究
吴德玲1，2，陈仕云1，刘劲松1，2，金传山1，2，许凤清1，2
(1. 安徽中医学院药学院，安徽 合肥 230031;2. 安徽省现代中药重点实验室，安徽 合肥 230031)
摘要 目的:研究山核桃外蒲壳的化学成分和抗肿瘤活性。方法:采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20 分离化学
成分，根据理化性质和波谱数据确定化合物结构，并对得到的化合物进行细胞毒活性研究。结果:从山核桃外蒲壳
中共分离鉴定了 5 个化合物，分别为:大黄酚 (1)、大黄素甲醚 (2)、β-谷甾醇 (3)、球松素(乔松酮) (4)、4，8-二
羟基-1-四氢萘酮 (5)。结论:其中，化合物 2、5 为首次从山核桃属植物中分离得到;在 MTT 抗肿瘤实验中，化合物
1、4、5 均具有一定的抗肿瘤活性。
关键词 山核桃外蒲壳;化学成分;抗肿瘤活性;人肝癌细胞
中图分类号:R284. 1 /R284. 2 /R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2011)07-1055-03
Chemical Constituents of Carya cathayensis and Their Antitumor Bioactivity
WU De-lin1，2，CHEN Shi-yun1，LIU Jing-song1，2，JIN Chuan-shan1，2，XU Feng-qing1，2
(1. College of Pharmaceutical Sciences of Anhui University of Traditional Chinese Medicine，Hefei 230031，China;2. Anhui Key Lab of
Contemporary Traditional Chinese Medicine，Hefei 230031，China)
Abstract Objective:To investigate the chemical constituents of Carya cathayensis and their antitumor bioactivity. Methods:The
compounds were isolated by Sephadex LH-20 and silica gel column chromatography. Their structures were identified by physicochemical
properties and spectroscopic analysis. Then their cytotoxic activity was studied. Results:Five compounds were elucidated as chry-
sophanol(1) ，physcion(2) ，β-sitosterol(3) ，pinostrobin(4) ，4 8-dihydroxy-1-tetralone(5). Conclusion:Compounds 2 and 5 are isola-
ted from Carya cathayensis for the first time. In the MTT antitumor experiments，the compounds 1，4 and 5 have the cytotoxic activity to
KB cell.
Key words Carya cathayensis Sarg;Chemical constituents;Cytotoxic activity;HepG2
收稿日期:2011-03-29
基金项目:安徽中医学院合作研究项目(2008HZ001)
作者简介:吴德玲(1973-) ，男，副教授，主要从事中药有效成分、中药质量标准规范化和创新药物的研究;Tel:0551-5169227，E-mail:dl-
wu7375@ sina. com。
山核桃 Carya cathayensis Sarg 为胡桃科山核桃
属植物，是我国特产的优良干果和油料树种，主要分
布在浙、皖两省交界的天目山一带。在山核桃的产
区，大量丢弃的山核桃外蒲壳已严重污染当地的生
态环境，危及动植物的生存。经文献检索，山核桃树
皮及树叶中化学成分的研究已有报道，而关于山核
桃外蒲壳的化学成分及其活性研究的相关文献〔1，2〕
报道较少。为了综合开发利用山核桃的资源，解决
山核桃外蒲壳的环境污染问题，本实验对其化学成
分进行研究，从中分离鉴定了 5 个化合物，分别为:
大黄酚(1)、大黄素甲醚(2)、β-谷甾醇(3)、球松素
(乔松酮) (4)、4，8-二羟基-1-四氢萘酮(5)。其中，
化合物 2、5 为首次从山核桃属植物中分离得到。采
用 MTT法测定化合物 1、4、5 对 Hep G2 的 IC50分别
为 43. 68、36. 86、40. 90 μg /mL，表明其对 Hep G2 具
有一定的抗肿瘤活性。
1 仪器和材料
Bruker AM-400 MHz 超导核磁共振仪，TMS 为
内标，CDCl3、DMSO-d6 为溶剂;LCQ ADVANTAGE
MAX 液质连用质谱仪(FINNIGAN 公司) ;Nicolet
Avatar 370DTGS 型傅立叶变换红外光谱仪测定，
KBr压片;CP225D 型十万分之一电子天平(sartori-
us)。柱层析用硅胶(100 ～ 200 目)、薄层层析用硅
胶 G 均为青岛海洋化工厂生产;凝胶为 Sephadex
LH-20。ELX800ΜV 酶标仪(美国 Bio-Tek 公司) ;
BX60 型荧光显微镜(日本 Olympus 公司) ;人肝癌
细胞 Hep G2(中科院上海细胞所细胞库) ;DMEM
与胎牛血清(Gibco) ;MTT(华美生物工程公司)。
山核桃外蒲壳于 2006 年采自安徽宁国。经安
徽中医学院中药教研室刘守金教授鉴定为胡桃科
山核桃属植物山核桃 Carya cathayensis Sarg 的外
蒲壳。
2 提取和分离
取山核桃外蒲壳 10 kg 粉碎，70 %乙醇加热回
流提取 2 次，合并提取液，浓缩液挥去乙醇后，加水
分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。浓缩
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DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2011.07.021
得石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取液浸膏。石油醚、
乙酸乙酯部位经反复硅胶柱色谱结合 Sephadex LH-
20 等方法得到化合物 1(30 mg)、2(7 mg)、3(38
mg)、4(26 mg)、5(40 mg)。
3 结构鉴定
化合物 1:橙黄色针晶，分子式为 C15 H10 O4，mp
200 ～ 201 ℃。Borntrger 反应呈红色，推测该化合
物为蒽醌类化合物。ESI-MS m/z:255. 32［M +
H］+。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ:12. 11(1H，s，1-
OH) ，11. 99(1H，s，8-OH) ，7. 66(1H，t，J = 8. 0 Hz，
H-6) ，7. 81(1H，dd，J = 8. 0，1. 2 Hz，H-5) ，7. 62
(1H，d，J = 1. 2 Hz，H-4) ，7. 27(1H，dd，J = 8. 0，1. 2
Hz，H-7) ，7. 08(1H，d，J = 1. 2 Hz，H-2) ，2. 46(3H，
s，Ar-CH3) ;
13 C-NMR (CDCl3，100 MHz)δ:192. 5
(C-9) ，181. 9(C-10) ，121. 3(C-2) ，136. 9(C-4) ，
124. 3(C-5) ，124. 5(C-6) ，119. 9(C-7) ，22. 2(C-
11)。以上数据与文献〔3，4〕报道对照基本一致，故确
定该化合物为大黄酚(chrysophanol)。
化合物 2:橙黄色针晶，分子式为 C16 H12 O5，mp
60 ～ 61 ℃。Borntrger 反应呈红色，乙酸镁反应呈
橙红色。ESI-MS m/z:284. 17［M － H］+。1H-NMR
(DMSO-d6，400 MHz) δ:12. 19 (1H，s，1-OH) ，
11. 98(1H，s，8-OH) ，7. 55(1H，s，H-7) ，7. 22(2H，s，
H-4，H-5) ，6. 90(1H，d，J = 1. 8 Hz，H-2) ，3. 94
(3H，s，OCH3) ，2. 44(3H，s，CH3)。以上数据与文
献〔5，6〕报道对照基本一致，故确定该化合物为大黄
素甲醚(physcion)。
化合物 3:无色针晶，分子式为 C29H50O，mp 136
～ 137 ℃。Liebermann-Burchard 反应呈阳性，确定
为甾体类化合物。与已知化合物 β-谷甾醇的混合
熔点不下降，且 TLC 的 Rf 值一致，故确定化合物 3
为 β-谷甾醇(β-sitosterol)。
化合物 4:白色片状结晶，分子式为 C16 H14 O4，
mp 98 ～ 100 ℃。盐酸镁粉反应呈阳性。IR(KBr)ν
(cm －1) :3 430(OH) ，1 650(C = O) ，1 620，1 580
(A-ring)。1H-NMR (CDCl3，400 MHz)δ:12. 05 (1H，
s，5-OH) ，7. 41 ～ 7. 47 (5H，m，Ar-H) ，6. 10 (1H，s，
8-H) ，6. 09 (1H，s，6-H) ，5. 43 ～ 5. 46 (1H，dd，J =
12. 8，2. 8 Hz，2-H) ，3. 83 (3H，s，7-OCH3) ，3. 07 ～
3. 15 (1H，dd，J = 17. 2，12. 8 Hz，3-H) ，2. 82 ～ 2. 87
(1H，dd，J = 17. 2，2. 8 Hz，3-H) ;13 C-NMR(CDCl3，
100 MHz)δ:195. 7(C-4) ，168. 0(C-7) ，164. 1(C-
5) ，162. 8(C-9) ，138. 4(C-1) ，128. 8(C-3 ～ 5) ，
126. 1(C-2，6) ，103. 1(C-10) ，95. 1(C-6) ，94. 2(C-
8) ，79. 2(C-2) ，55. 6(C-OCH3) ，43. 4(C-3)。上述
数据与文献〔7〕报道对照基本一致，故确定化合物 4
为球松素(pinostrobin)。
化合物 5:淡黄色固体，分子式为 C10 H10 O3。
ESI-MS m/z:177 ［M － H］+。1H-NMR (CDCl3，400
MHz)δ:12. 42(1H，s，OH) ，7. 48 ～ 7. 53(1H，m，H-
6) ，7. 07 (1H，d，H-5) ，6. 84 (1H，m，H-7) ，4. 93
(1H，d，J = 2. 8 Hz，H-4) ，2. 97 ～ 3. 04 (1H，m，2-
CH2A) ，2. 62 ～ 2. 69 (1H，m，2-CH2B) ，2. 32 ～ 2. 39
(1H，m，3-CH2A) ，2. 17 ～ 2. 23 (1H，m，3-CH2B) ;
13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ:204. 2 (C-1) ，162. 7
(C-8) ，145. 8(C-10) ，136. 9 (C-6) ，118. 8 (C-5) ，
117. 7 (C-7) ，117. 3 (C-9) ，67. 6 (C-4) ，34. 5 (C-
2) ，31. 2 (C-3)。根据上述物理数据和波谱数据，并
参考文献〔8〕数据，确定化合物 5 为 4，8-二羟基-1-四
氢萘酮(4，8-dihydroxy-1-tetralone)。
4 抗肿瘤活性测定〔9〕
收集对数生长期肝癌细胞 Hep G2，调整细胞悬
液浓度，使待测细胞调密度至 5 000 个 /孔(边缘孔
用无菌 PBS填充) ，接种于 96 孔培养板中，所加细
胞体积为 100 μL，细胞单层几乎铺满孔底，先吸出
含血清 DMEM培养基，取化合物 1、4、5 单体用 DM-
SO 配好浓度梯度药物，为 5 个梯度，浓度分别为
0. 2、0. 1、0. 05、0. 025、0. 0125 mg /mL，每孔 200 μL，
每个浓度设 5 个复孔，同时设空白对照(加等体积
DMSO) ，5% CO2 37 ℃孵育 48 h，倒置显微镜下观
察并拍照。培养结束前，吸去培养液，小心用 PBS
冲 2 遍后，加入 5 mg /mL MTT 溶液 20 μL，置于 37
℃培养箱中继续孵育 4 h后，终止培养，小心吸去上
清液，每孔加入 DMSO 150 μL，水平摇床振荡 10
min，使结晶物充分溶解，在酶标仪 490 nm处测量各
孔的吸光度(A)值。实验结果显示，化合物 1、4、5
处理人肝癌细胞 Hep G2 48 h，在 0. 2000 mg /mL 到
0. 0125 mg /mL的剂量范围内，对人肝癌细胞 Hep
G2 都表现出杀伤作用(P ＜ 0. 05) ，最高抑制率分别
为 69%、70%、67%，半数抑制浓度 IC50 分别为
43. 68、36. 86、40. 90 μg /mL。
5 小结
本文从山核桃外蒲壳的石油醚和乙酸乙酯萃取
部位分离得到 5 个化合物，化合物 2、5 为首次从山
核桃属植物中分离得到。化合物 1、4、5 在体外有较
好的抗肿瘤活性。
在实验过程中发现，在检测药物吸收值的时候，
加入的 MTT会与药物发生反应，影响检测的结果。
故在加入 MTT前，应先将 96 孔板内液体移除，补加
100 μL培养液后再加入 20 μL MTT。
·6501· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 7 期 2011 年 7 月
致谢:本课题的研制样品和部分经费由宁国詹氏天然食品有限
公司提供。
参 考 文 献
［1］陈仕云，吴德玲，金传山，等 . 山核桃外蒲壳化学成分初
步分析及总黄酮的含量测定［J］. 安徽中医学院学报，
2010，29(1) :64-66.
［2］沈炳香，吴德玲，陈仕云，等 . 山核桃外蒲壳总皂苷的含
量测定［J］. 安徽医药，2009，13(5) :513-514.
［3］刘元慧，成则丰，乔文涛，等 . 山核桃外果皮化学成分的
研究［J］. 中草药，2009，40(9) :1359-1362.
［4］方伟，阮金兰，王仲，等 . 斜方复叶耳蕨的化学成分研究
［J］. 中国中药杂志，2008，33(6) :6498-6500.
［5］ Yoshiyuki K，Mitsugi K，Kimiye B，et al. New constituents
of roots of Polygonum cuspidatum［J］. Phytochemistry，
1983，48(2) :164-168.
［6］ Iso K，Yoshihiro M，Iwang S，et al. Cytotoxic anthraquinones
from Rheum pulmatum［J］. Phytochemistry，1992，31(3) :
1063-1065.
［7］林君阳 . 山核桃外果皮化学成分剂抑菌活性研究［D］.
杭州:浙江林学院，2007.
［8］ Li G，Xu M L，Choi H G，et al. Four new diarylheptanoids
from the roots of Juglans mandshurica［J］. Chem Pharm
Bull，2003，51(3) :262-264.
［9］王辉，李药兰，沈伟哉，等 . 瑶药黄酮化合物体外抗肿瘤
活性研究［J］. 中药材，2007，30(8) :980-985.
辽藁本地上部分化学成分研究
孙佳明1，张 博1，常仁龙2，叶豆丹1，张 辉1*
(1. 长春中医药大学中医药与生物工程研发中心，吉林 长春 130117;2. 延边朝族自治州医药工业办公室，
吉林 延边 133000)
摘要 目的:研究辽藁本的地上部分化学成分。方法:通过硅胶柱色谱和 Sephadex LH-20 柱色谱等方法进行
分离纯化，根据理化性质和光谱数据进行结构鉴定。结果:从辽藁本地上部分的乙醇提取物中分离得到 7 个单体
化合物，分别鉴定为:补骨脂素(1)、β-谷甾醇(2)、胡萝卜苷(3)、山柰酚-3-O-(2″，4″-二-反式-对-羟基桂皮酰基)-α-
L-鼠李糖苷(4)、山柰酚-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(5)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(6)、蔗糖(7)。结论:化合物 1、
4 ～ 6 为首次从藁本属植物中分离得到，其余化合物均为首次从辽藁本地上部分中分离得到。
关键词 辽藁本;地上部分;化学成分
中图分类号:R284. 1 /R284. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2011)07-1057-03
Study on the Chemical Constituents of Aerial Part of Ligusticum jeholense
SUN Jia-ming1，ZHANG Bo1，CHANG Ren-long2，YE Dou-dan1，ZHANG Hui1
(1. Development Center of Traditional Chinese Medicine and Bioengineering，Changchun University of Traditional Chinese Medicine，
Changchun 130117，China;2. Yanbian Korean Autonomous Prefecture Office of Food and Drug industry，Yanbian 133000，China)
Abstract Objective:To study the chemical constituents of the aerial part of Ligusticum jeholense. Methods:The constituents were
isolated by sillica gel column chromatography，Sephadex LH-20 column chromatography and their structures were elucidated by spectral
analysis. Results:Seven compounds were separated from the EtOH extracts. Their structures were identified as psoralen (1) ，β-sitoster-
ol(2) ，daucosterol (3) ，kaempferol-3-O-(2″，4″-di-E-p-coumaroyl)-α-L-rhamnoside (4) ，kaempferol-3-O-β-D-galactoside (5) ，querce-
tin-3-O-β-D-galactoside (6) ，sucrose (7). Conclusion:Compounds 1，4，5 and 6 are isolated from the genus for the first time. Com-
pounds 2，3 and 7 are isolated from the aerial part of the plant for the first time.
Key words Ligusticum jeholense Nakai et Kitag.;Aerial part;Chemical constituents
收稿日期:2011-03-16
作者简介:孙佳明(1976-) ，男，博士，副研究员，主要从事天然药物化学研究;Tel:0431-86172280，E-mail:sun_jiaming2000@ yahoo. com. cn。
* 通讯作者:张辉，Tel:0431-86172080，Fax:0431-86172080，E-mail:zhanghui-8080@ 163. com。
辽藁本 Ligusticum jeholense Nakai et Kitag. 为伞
形科藁本属植物，其根及根茎作为药用，主产于我国
吉林、辽宁、黑龙江等地区。本品收载于中国药典
2005 年版一部，具有散风、祛寒、止痛等功效，主治
·7501·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 7 期 2011 年 7 月