全 文 ： 由表 4可见 ,按优化条件重复试验 ,结果重现性
较好 ,且均符合分散片的质量要求 ,因此确定处方配
比为干膏粉:微晶纤维素:交联 CMC-Na:淀粉 =1∶
0.7∶0.4∶0.25。
3 讨论
3.1 分散片是指遇水可迅速崩解均匀的片剂 ,能
否保证在 3 min内崩解是分散片生产工艺中需要解
决的关健点 ,因此辅料特别是崩解剂的筛选尤其重
要 。本研究在预实验时曾对羧甲淀粉钠 、交联聚维
酮 、交联 CMC-Na等作了对比 , 结果显示以交联
CMC-Na作崩解剂效果较好 。
3.2 上述按优化条件试制的三批样品 ,除检测分
散均匀性及脆碎度指标外 ,其外观 、片重差异等指标
亦符合标准要求。
参 考 文 献
[ 1] 国家药典委员会 .中华人民共和国卫生部药品标准 .
中药成方制剂(第六册).北京:化学工业出版社 , 1996:
9.
[ 2] 国家药典委员会 .中华人民共和国药典 .一部 .北京:
化学工业出版社 , 2005:附录≫ A,附录 62.
[ 3] 国家药典委员会 .中华人民共和国药典 .二部 .北京:
化学工业出版社 , 2005:附录Ⅹ G,附录 76, 附录Ⅰ A,附
录 6.
(2007-09-05收稿)
南板蓝叶中靛玉红的 HPLC测定方法学研究
杜沛欣 ,张丹雁＊ ,刘军民 ,欧阳霄妮
(广州中医药大学 , 广东广州 510006)
摘要 目的:考察不同溶剂和提取方法测定南板蓝叶中靛玉红含量的效果 , 筛选科学 、便捷的南板蓝叶靛玉红
含量测量方法。方法:分别以石油醚 、氯仿 、无水乙醇作溶剂 , 以索氏 、回流 、超声三种不同方法提取 ,并设置不同提
取时间 , 用甲醇-0.1%醋酸溶液(80∶20)作流动相 , 1.00 ml/min流速 , 在 290 nm处测定。结果:靛玉红在 0.015 ～
0.435 μg范围内线性关系良好 (r=0.9996), 以无水乙醇回流提取 ,平行实验所得 RSD为 1.83% (n=5), 回收率
为 98.2%, RSD为 1.74%(n=5)。结论:以无水乙醇回流提取两次的方案各指标符合仪器分析要求。
关键词 南板蓝叶;靛玉红;高效液相;方法学
中图分类号:R286.02 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2008)04-0611-03
基金项目:广东省科技计划项目(2004B36001017)作者简介:杜沛欣(1983-),男 ,硕士 ,研究方向:中药 GAP种植研究。＊通讯作者:张丹雁 ,女 ,教授 ,硕士生导师 ,主要从事中药鉴定教学科研工作。
南板蓝叶来源于爵床科 Acanthaceae植物马蓝
Baphicacanthuscusia(Nees)Bremek的干燥叶或幼
嫩茎叶 ,其原植物的根茎和根作为南板蓝根入药 ,
2005版中国药典已有记载 〔1〕。南板蓝叶具有清热
解毒 、凉血消斑的功效 ,临床上主要用于温邪入营 、
高热神昏 、流感 、流脑等 ,具有悠久的民间用药历
史 〔2〕。靛玉红是南板蓝公认的有效成分 ,同时也是
指标成分之一。近年来 ,有不少关于高效液相法测
定南板蓝中靛玉红含量的报道 〔3 、4〕 ,但尚未见其全
面系统的方法学研究 。本文采用不同溶剂和提取方
法 ,从简化实验操作 、节省测定成本出发 ,寻求科学 、
便捷的南板蓝叶靛玉红含量测定方法 。
1 仪器与试药
1.1 仪器 DionexP-680单泵高效液相色谱仪 ,
DionexUVD170紫外检测器 , CromasilC18色谱柱。
1.2 试剂 氯仿 、甲醇 、无水乙醇均为分析纯 ,流
动相所用的甲醇为 Merck色谱纯甲醇。靛玉红对照
品来自中国药品生物制品检定所 (批号:717-
200204)
1.3 样品 南板蓝叶来源于广东省平远县石正
镇 ,取其叶干燥后粉碎备用。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱为 CromasilC18色谱柱 ,流
动相为甲醇-0.1%醋酸溶液(80∶20),流速 1.00 ml/
min,检测波长为 290 nm,理论塔板数均大于 6000。
2.2 提取方法研究 分别以氯仿 、甲醇 、无水乙醇
对南板蓝叶进行提取 ,每种溶剂分别以超声 、索氏 、
回流三种方法提取 。
2.2.1 超声提取法供试液的制备:精密称取样品
0.75 g,加入溶剂 50 ml,超声提取 30 min,稍静置 ,
倾出上清保存 ,残渣继续加入 30 ml溶剂 ,超声提取
20 min,合并两次提取液后抽滤 ,滤液于水浴蒸干溶
·611·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials 第 31卷第 4期 2008年 4月DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.04.030
剂 ,残渣以甲醇溶解至 50 ml容量瓶 , 并稀释至刻
线 。抽取适量提取液以 0.45 μm微孔滤膜过滤 ,即
得 。
2.2.2 索氏提取法供试液的制备:精密称取样品
0.75g,加入溶剂约 80ml置于索氏提取器中提取至
无色 , 提取液水浴蒸干后以甲醇溶解并定容为 50
ml,以 0.45μm微孔滤膜过滤 ,即得。
2.2.3 回流提取法供试液的制备:精密称取样品
0.75g,加入溶剂 50 ml,回流提取 60 min,稍静置 ,
倾出上清保存 ,残渣继续加入 30 ml溶剂 ,回流提取
40 min,合并两次提取液后抽滤 ,滤液于水浴蒸干溶
剂 ,残渣以甲醇溶解至 50 ml容量瓶 , 并稀释至刻
线 。抽取适量提取液以 0.45 μm微孔滤膜过滤 ,即
得 。
2.2.4 测定结果:将上述方法所得的供试液按照
2.1项的色谱条件进行测定。结果见表 1。
表 1 不同提取方法下南板蓝叶中
靛玉红含量折算值 (ppm)
溶剂 索氏提取 回流提取 超声提取
石油醚 387.9 332.3 239.4
氯仿 1348.2 1573.4 1114.9
无水乙醇 1665.3 1811.7 1334.0
2.3 提取时间的研究 另取一份样品约 0.75 g,
精密称定 ,以 80 ml无水乙醇作溶剂 ,设置不同的提
取时间进行回流提取 。结果见表 2。
表 2 不同提取时间下南板蓝叶中靛玉红含量的折算值
提取时间 溶剂量 靛玉红含量折算值(ppm)
一次提取 20 min 80 ml 719.3
一次提取 40 min 80 ml 827.6
一次提取 60 min 80 ml 835.8
一次提取 100 min 80 ml 837.1
提取 20min后倾出上清 ,残渣继续提取 20 min 第一次 50 ml,第二次 30 ml 828.7
提取 40min后倾出上清 ,残渣继续提取 20 min 第一次 50 ml,第二次 30 ml 848.6
提取 60min后倾出上清 ,
残渣继续提取 40 min 第一次 50 ml,第二次 30 ml 866.7
提取 60min后倾出上清 ,残渣继续提取 60 min 第一次 50 ml,第二次 30 ml 863.2
2.4 标准曲线的绘制 精密称取靛玉红对照品
2.9mg,以甲醇溶解 ,并定容至 100 ml,制成 29 μg/
ml的标准溶液 ,分别用移液管吸取上述溶液 1、2、5
ml至 10ml容量瓶 ,添加甲醇至刻度。分别精密吸
取以上 4种不同浓度的标准液各 5、10、15 μl进样 ,
测得其峰面积 ,以进样量为 x轴 ,峰面积为 y轴建立
回归方程 ,其方程为 y=0.0728x-0.0817, r=
0.9996,表明进样量在 0.015 ～ 0.435μg范围内线性
关系良好 。
2.5 精密度试验 取靛玉红标准液 ,按 2.1项色
谱条件测定 ,连续进样 5次 ,每次 10 μl,测得其峰面
积的 RSD值为 1.28%。
2.6 稳定性试验 取上述以乙醇回流提取所得供
试液 ,在 0、1、2、4、6、12、24 h分别进样 10 μl,测得
其峰面积的 RSD值为 1.73%,证明靛玉红在 24 h
内稳定。
2.7 重现性试验 按乙醇回流方法进行提取 ,以
同样的方法重复测定 5次 ,其测得峰面积的 RSD值
为 1.83%。
2.8 回收率试验 精密称取已知含量的样品 0.3
g,用移液管移取并加入 10ml29 μg/ml的靛玉红标
准液 ,以乙醇回流提取并测定含量 ,重复 5次 ,测得
回收率为 98.2%, RSD为 1.74%。
3 讨论
3.1 表 1表明 ,本实验所设置的三种不同极性溶
剂中 ,石油醚提取效果最差 ,不予采用;氯仿与无水
乙醇的提取效果大致相当 。预试验结果亦证明 ,靛
玉红易溶于氯仿 、乙醇 、甲醇等 ,故氯仿和无水乙醇
均可作提取溶剂。但实际操作中发现 ,氯仿提取液
蒸干后 ,其残渣在甲醇中溶解性较差 ,溶解操作相对
耗时费力 ,较容易造成损失 ,而用无水乙醇则有所改
善 ,且无水乙醇较氯仿价廉而毒性低 。综合上述因
素 ,建议采用乙醇作提取溶剂 。
3.2 表 1表明 ,回流与索氏提取的效率优于超声
提取 ,回流提取时间明显短于索氏提取 。因此 ,待测
样品数量较多时 ,比较适宜用回流法提取。
3.3 表 2表明 ,加入同等体积溶剂进行提取 ,多次
提取的效果优于一次提取。在第一次提取 60 min
后 ,提取液中靛玉红浓度增加甚微 ,故以 60 min作
为第一次提取时间。倾出上清 ,残渣中加入新鲜溶
剂进行第二次提取 , 40 min与 60 min提取时间的效
率相近 ,故推荐以 40 min为第二次提取时间 。
综上所述 ,建议以乙醇回流提取 2次(首次 60
min,第二次 40min)作为测定南板蓝叶靛玉红含量
的供试液制备方法 。
3.4 本实验方法是在参考 2005版中国药典中 “大
青叶 ”词条及相关文献中靛玉红高效液相测定法的
基础上经过改良所得。经实验证明 ,本方法的精密
度 、稳定性 、重现性与回收率均符合仪器分析要求。
本文为构建科学 、简便的南板蓝叶靛玉红含量测定
法提供实验数据 ,对南板蓝叶的化学成分研究 、质量
·612· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials 第 31卷第 4期 2008年 4月
标准的制定及扩大大青叶药源具有一定意义。
参 考 文 献
[ 1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部 .北京:
化学工业出版社 , 2005:170.
[ 2] 中国医学科学院药物研究所 .中药志(第 1册).北京:
人民卫生出版社 , 1982:453-455.
[ 3] 侯惠婵 , 梁少珍 .HPLC法测定马蓝根 、茎 、叶中靛玉红 、
靛蓝的含量 .中药材 , 2006, 29(7):681-682.
[ 4] 魏世勇 ,魏成熙.不同氮肥对南板蓝根产量和靛玉红含
量的影响 .贵州农业科学 , 2005, 33(3):44-45.
(2007-08-22收稿)
HPLC法测定菌毒清颗粒中绿原酸的含量
陈晓颖 1 ,郭文婷2 ,宋粉云 1
(1.广东药学院 ,广东广州 510224;2.广州医药有限公司 ,广东广州 510140)
摘要 目的:测定菌毒清颗粒中绿原酸的含量。方法:采用反相高效液相色谱法;Diamonsil-C18柱 , 乙腈-0.4%
磷酸(11.5∶88.5)为流动相 , 流速为 1.0ml/min, 检测波长为 327 nm, 柱温为室温。 结果:绿原酸平均回收率为
102.5%, RSD为 1.97%(n=6)。结论:该法可用于菌毒清颗粒中绿原酸的含量测定。
关键词 毒清颗粒;绿原酸;HPLC;含量测定
中图分类号:R286.02 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2008)04-0613-02
基金项目:广东省自然科学基金资助项目(No.5002841)作者简介:陈晓颖 ,女 ,讲师 ,从事药物分析的教学和科研工作;Tel:13610009277, E-mail:gycxycn00@ 163.com。
菌毒清颗粒是医院制剂 ,由板蓝根 、穿心莲 、玄
参 、茜草 、丹参 、金银花等提取制成 ,具有清热解毒 、
抗菌消炎 、抗病毒作用 。临床用于治疗细菌 、病毒感
染性疾病 ,如呼吸道 、胃肠道 、泌尿系统的感染和 EB
病毒阳性的患者 。该产品现行标准只收载了定性鉴
别 ,有文献 〔1、2〕报道测定穿心莲内酯 、哈巴俄苷的含
量 ,但绿原酸的含量测定未见报道。为进一步评价
菌毒清颗粒的质量 ,本文建立了菌毒清颗粒中绿原
酸含量测定的反相高效液相色谱法。
1 仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪 (安捷伦公司),
Agilent1100系列双元泵 , Agilent1100可变波长检
测器 , Agilent1100化学工作站 。 DL-360超声波清
洗器(宁波石浦海天电子仪器厂),工作频率 4.5kHz
±5%,输出功率 240W。
绿原酸对照品 (中国药品生物制品检定所 ,
110753-200212),菌毒清颗粒(中山市人民医院),甲
醇 、乙腈为色谱纯 ,磷酸为分析纯 ,水为双蒸水 。
2 方法与结果
2.1 样品溶液制备
2.1.1 对照品溶液的制备:精密称取五氧化二磷
减压干燥器中干燥 24 h的绿原酸对照品 9.82 mg,
置 200 ml棕色量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,
摇匀 ,作为对照品贮备液 (浓度为 49.1 μg/ml),
10℃以下保存。
2.1.2 供试品溶液的制备:精密称取菌毒清颗粒
样品约 2g,置具塞锥形瓶中 ,精密加入 50%甲醇 25
ml,密塞 ,放置 15min,摇匀 ,滤过 ,弃去初滤液 ,续滤
液 0.45 μm滤膜过滤 ,作为供试品溶液 。
2.1.3 阴性对照溶液的制备:取处方组成中除金
银花外的其余成分制成不含金银花的阴性对照品 ,
按 2.1.2项下的制备方法处理 ,即得阴性对照溶液 。
2.2 色谱条件及系统适用性试验 色谱柱为 Dia-
monsil-C18柱(250mm×4.6mm, 5μm),流动相为乙
腈-0.4%磷酸 (11.5∶88.5),流速为 1.0ml/min,检
测波长 327 nm,柱温为室温。分别取对照品溶液
(绿原酸浓度为 19.64 μg/ml)、供试品溶液和阴性
对照溶液 10 μl注入色谱仪 ,理论板数以绿原酸计
算应不低于 5000;绿原酸的拖尾因子为 0.93,保留
时间约为 19.4min,绿原酸与其它组分可基线分离;
阴性样品不干扰样品测定。
2.3 方法学考察
2.3.1 标准曲线制备:分别吸取一定量的绿原酸
对照品贮备液 ,加甲醇稀释成绿原酸浓度为 4.91、
9.82、14.73、19.64、24.55、29.46、39.28 μg/ml的溶
液。依次进样 10 μl,每个浓度测定 3次以上 。以峰
面积(A)对对照品溶液系列浓度(C)进行回归 ,得
绿原酸回归方程 A=27.87C-6.71,相关系数 r=
0.9998。表明绿原酸在 4.91 ～ 39.28 μg/ml之间与
峰面积线性关系良好。
·613·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials 第 31卷第 4期 2008年 4月