全 文 ：收稿日期：２０１２－０５－０８
收稿日期：２０１２－０７－１０
作者简介：周传明（１９６２－），男，高级实验师，主要从事植物组织培养
研究。
＊高峰林业科技园珍贵及乡土树种试验研究项目资助。
广西科学Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　２０１２，１９（４）：３７４～３７６
山苍子继代培养中芽增殖效果研究＊
Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅ　Ｔｒａｎｓｆｅｒ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｌｉｔ－
ｓｅａ　ｃｕｂｅｂａ
周传明１，吕曼芳１，陈　奎２，周如琼３，秦武明１，赵彤宁１
ＺＨＯＵ　Ｃｈｕａｎ－ｍｉｎｇ１，ＬＶ　Ｍａｎ－ｆａｎｇ１，ＣＨＥＮ　Ｋｕｉ　２，ＺＨＯＵ　Ｒｕ－ｑｉｏｎｇ３，ＱＩＮ　Ｗｕ－
ｍｉｎｇ１，ＺＨＡＯ　Ｔｏｎｇ－ｎｉｎｇ１
（１．广西大学林学院，广西南宁　５３０００４；２．广西高峰林场，广西南宁　５３０００１；３．北海市林业
局，广西北海　５３６０００）
（１．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ，５３０００４，Ｃｈｉｎａ；２．Ｇａｏｆｅｎｇ　Ｆｏｒ－
ｅｓｔｒｙ　Ｆａｒｍ　ｏｆ　Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｍｕｎｉｃｉｐａｌｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ，５３０００１，Ｃｈｉｎａ；３．Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｂｕｒｅａｕ　ｏｆ
Ｂｅｉｈａｉ　Ｃｉｔｙ，Ｂｅｉｈａｉ，Ｇｕａｎｇｘｉ，５３６０００，Ｃｈｉｎａ）
摘要：以初始诱导得到的山苍子［Ｌｉｔｓｅａ　ｃｕｂｅｂａ（Ｌｏｕｒ）Ｐｅｒｓ］幼苗进行继代培养试验。试验共设计３种培养基：
改良 ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ、改良ＭＳ＋６－ＢＡ　０．８ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ、改良ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０
ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ，２种切割方式，进行４代培养，研究生长调节剂、继代次数和切割方式对山苍子继代增
殖的影响。结果以改良 ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ培养基比较适宜山苍子的继代培养，当ＮＡＡ浓
度为０．２ｍｇ／Ｌ时，增殖率随６－ＢＡ浓度的增加而增大，愈伤组织逐渐减少，６－ＢＡ浓度为１．０ｍｇ／Ｌ时增殖率最
高，苗木生长效果最好；继代到第４代时，山苍子增殖率明显高于前３代，增殖苗长势良好有活力；以２～３个丛
芽块的接种方式接种效果优于单芽接种，增殖率可达到３．５７，芽苗叶色浓绿效果最好。
关键词：山苍子　继代培养　增殖效果
中图法分类号：Ｑ９４５．５　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００５－９１６４（２０１２）０４－０３７４－０３
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｏｆ　Ｌｉｔｓｅａ　ｃｕｂｅｂａｆｒｏｍ　ｉｎｉｔｉａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｃｕｌ－
ｔｕｒｅ．Ｔｈｅ　ｔｅｓｔ　ｗａｓ　ｄｅｓｉｇｎｅｄ　ｕｓｉｎｇ　３ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｍｅｄｉｕｍ：ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ＭＳ＋０．５ｍｇ／Ｌ　ｏｆ　６－ＢＡ＋０．２
ｍｇ／Ｌ　ｏｆ　ＮＡＡ，ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ＭＳ＋０．８ｍｇ／Ｌ　ｏｆ　６－ＢＡ ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ｏｆ　ＮＡＡ，ａｎｄ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ＭＳ＋１．０
ｍｇ／Ｌ　ｏｆ　６－ＢＡ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ｏｆ　ＮＡＡ，２ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｃｕｔｔｉｎｇ　ｗａｙ，ａｎｄ　ｆｏｒ　４ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓ　ｔｏ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅ，ｉｎ
ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ａｎａｌｙｚｅ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｌｉｔｓｅａ　ｃｕｂｅｂａｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒ－
ｅｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒ，ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｔｉｍｅｓ　ａｎｄ　ｃｕｔｔｉｎｇ　ｗａｙ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｍｏｄｉ－
ｆｉｅｄ　ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ　ｏｆ　６－ＢＡ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ｏｆ　ＮＡＡ　ｗａｓ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ
ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＮＡＡ　ｗａｓ　０．２ｍｇ／Ｌ，ｔｈｅ　ｒａｒｅ　ｏｆ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｗｉｔｈ
ｔｈｅ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｏｆ　６－ＢＡ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ｃａｌｕｓ　ｇｒａｄｕａｌｙ　ｒｅｄｕｃｅｄ；ｗｈｅｎ　６－ＢＡ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａ－
ｔｉｏｎ　ｗａｓ　１．０ｍｇ／Ｌ，ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｒｅａｃｈｅｄ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ，ａｎｄ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｅｆｆｅｃｔ　ｗａｓ
ｔｈｅ　ｂｅｓｔ．Ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｔｏ　ｔｈｅ　４ｔｈ　ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，Ｌｉｔｓｅａ　ｃｕｂｅｂａｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｓｉｇ－
ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｖｉｏｕｓ　３ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓ，ａｎｄ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｇｒｅｗ　ｗｅｌ　ｄｙｎａｍｉｃ．
Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　２～３ｃｌｕｓｔｅｒ　ｂｕｄｓ　ｗａｓ　ｂｅｔｔｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｓｉｎｇｌｅ　ｇｒａｆｔｉｎｇ　ｓｐｅｃｉｅｓ，
ｉｔｓ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｃａｎ　ｒｅａｃｈ　３．５７ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｗａｓ　ｗｅｌ－ｇｒｏｗｎ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｌｉｔｓｅａ　ｃｕｂｅｂａ，ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ
ｃｕｌｔｕｒｅ，ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ
　　山苍子［Ｌｉｔｓｅａ　ｃｕｂｅｂａ（Ｌｏｕｒ）Ｐｅｒｓ］，又名山胡
椒，木姜子，是樟科木姜子属落叶灌木或小乔木，珍贵
芳香油料植物。木姜子属植物全世界共有２００种，主
４７３ Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．１９Ｎｏ．４，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ　２０１２
DOI:10.13656/j.cnki.gxkx.2012.04.013
要分布于亚洲的热带、亚热带地区。我国主要分布于
长江流域，其中以福建、湖南、湖北、四川等省份分布
最多［１］。山苍子果皮可以提取精油，利用于化工及食
品行业；其核仁油亦是重要的木本油料，可以替代进
口椰子油，应用价值及市场前景广阔［２，３］。山苍子适
生性广、耐瘠薄等特点有利于退耕还草及石漠化工程
治理，生态效益显著［４］。由于山苍子以种子繁殖为
主，品种良莠不齐，其组织培养技术的探究可以提供
优质苗木，保障种源，具有重要现实意义和经济价值。
我国有学者对山苍子组织培养快速繁殖育苗技术进
行了相关研究，其中孙雁霞［５］、赵佐敏［６］、钟东洋［７］、
马嵩坚等［８，９］对山苍子外植体材料、基本培养基、生
长调节剂等方面进行的诱导培养研究均取得一定的
成果，但是目前仍处于初步探索阶段。我们在山苍子
外植体初始诱导研究［１０］的基础上，又进行了山苍子
继代培养的芽增殖效果研究，现将结果报道如下。
１　材料与方法
１．１　材料和方法
　　通过初始诱导得到长势良好的诱导苗后，以改良
ＭＳ培养基为基本培养基，附加不同生长调节剂６－
ＢＡ、ＮＡＡ进行试验，３０ｄ后对瓶苗生长情况进行观
察，研究不同生长调节剂对继代培养的影响。共设计
３个方案进行试验。方案１为改良 ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５
ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ，方案２为改良 ＭＳ＋６－ＢＡ
０．８ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ，方案３为改良 ＭＳ＋６－
ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ。
　　继代培养过程中对材料采用单芽和２～３个丛生
芽２种切割方式进行接种，培养基保持一致，观察研
究材料的不同切割方式对山苍子继代增殖的影响。
同时，还使用相同培养基对山苍子进行继代培养，研
究不同继代代数对山苍子增殖效果的影响。
１．２　培养条件
　　继代培养在室温度保持（２５±２）℃条件下进行，
白天附加１８００Ｌｘ人工光照１２ｈ。各种培养基分别
附加蔗糖４０ｇ／Ｌ，琼脂４．８ｇ／Ｌ。ｐＨ值５．８，培养基
分装之后在１．１ｋｇ／ｃｍ２高压、１２１℃高温下灭菌２０
ｍｉｎ。
２　结果与分析
２．１　生长调节剂对山苍子继代增殖的影响
　　将初始培养获得的无菌苗转接到３种不同浓度
６－ＢＡ的增殖培养基中，方案１，２，３的继代增殖率分
别是２．２、２．４和２．６，平均苗高分别是１．３ｃｍ、１．４ｃｍ
和１．４ｃｍ；方案１的愈伤组多，生长一般，叶色正常；
方案２的愈伤组较多，生长一般，叶色正常；方案３的
愈伤组较少，生长良好，叶色正常。实验结果表明生
长调节剂对山苍子继代培养的存在着不同的影响。
在ＮＡＡ浓度为０．２ｍｇ／Ｌ条件下，增殖率随６－ＢＡ
浓度的增加而增大，愈伤组织逐渐减少，生长状况逐
渐好转。当６－ＢＡ浓度为１．０ｍｇ／Ｌ时，增殖率达到
２．６，茎基部没有出现明显的庞大现象，整体生长良
好，由此得出３号培养基６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２
ｍｇ／Ｌ的生长调节剂配比较适宜山苍子的继代培养。
２．２　继代次数对山苍子继代增殖的影响
　　实验进行４次继代培养，采用单芽的接种方式，
均采用改良 ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ
继代培养基进行培养，３０ｄ进行观察统计。结果继
代次数为１时，单株最大增殖芽数为４，平均增殖率
２．３，苗木叶色正常，愈伤组织小，苗木尖削度大，高生
长受抑制，节间短；继代次数为２时，单株最大增殖芽
数为５，平均增殖率２．４，苗木少部分枯死，苗高１．１
～３．０ｃｍ，平均苗高１．５ｃｍ，生长状况一般；继代次数
为３时，单株最大增殖芽数为７，平均增殖率２．５，苗
木叶色正常，有生活力，苗高１．１～３．５ｃｍ，平均苗高
２．０ｃｍ，生长良好；继代次数为４时，单株最大增殖芽
数为８，平均增殖率２．９，苗木叶色浓绿，有生活力，较
多芽开始萌发，侧芽生长比丛生芽好，节间较长，长势
良好。随着继代次数的增加，山苍子继代增殖率也呈
逐渐提高的趋势。第１代苗木增殖率最低，仅有
２．３，第４代苗木增殖率最高，达到２．９，第２代和第３
代增殖率相差不大。单株最大增殖芽数与增殖率随
继代代数变化规律一致，单芽个数随继代次数增加而
递增。就苗木生长状况而言，第１代苗木的生长较缓
慢，愈伤组织小，苗木节间短；第２代苗木的生长状况
一般，有部分苗木枯死；第３代苗木生长良好，叶色正
常有生活力；到第４代时苗木长势好，节间较长，叶色
浓绿，有生活力。
　　继代培养过程中第１～３代的增殖率缓慢递增，
区别并不是很明显，到第４代增殖率才明显高于前３
代，由此看出继代次数对山苍子增殖率具有一定影
响。由于继代代数的增加，６－ＢＡ的积累导致组织中
细胞分裂素浓度增加，从而增加苗木细胞分裂速度，
增殖率得以提高；而继代代数不同，苗木幼态化程度
不同，随着继代代数增加，苗木幼态化程度逐渐提高，
而幼态化程度越高，苗木分化能力越强，因而苗木生
长质量也越好。增殖率随着继代代数增加而相应增
加的现象，是６－ＢＡ浓度与苗木幼态化两个因素共同
作用的结果。
５７３广西科学　２０１２年１１月　第１９卷第４期
２．３　切割方式对山苍子继代增殖的影响
　　采用不同切割方式对山苍子进行继代培养，培养
基均为改良 ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／
Ｌ，３０ｄ后进行观察。结果接种３０ｄ后，单芽的增殖
率为１．２９，平均苗高２．０ｃｍ，２～３个丛芽块接种的增
殖率为３．５７，平均苗高２．７ｃｍ。芽苗增殖和平均苗
高都是２～３个丛芽块切割方式的效果较好。原因可
能是山苍子在增殖培养时在切口的基部产生较多愈
伤组织，在愈伤组织上产生很多隐芽，采用单芽接种
时，对材料的切割会切去大块的愈伤组织，从而损失
部分隐芽，因而增殖培养效果受到很大影响（图１）。
因此在山苍子继代增殖培养过程种采用２～３个丛芽
块进行接种可获得更好的增殖效果。
　　图１　单芽（Ａ）和２～３个丛芽块（Ｂ）切割方式的继代增
殖效果
　　Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｃｕｌ－
ｔｕｒｅ　ｏｆ　ｏｎｅ　ｃｌｕｓｔｅｒ　ｂｕｄ（Ａ）ａｎｄ　２～３ｃｌｕｓｔｅｒ　ｂｕｄｓ（Ｂ）
３　结束语
　　本次实验比较不同６－ＢＡ与ＮＡＡ浓度配比对山
苍子继代培养的影响，在ＮＡＡ浓度为０．２ｍｇ／Ｌ条
件下，增殖率随６－ＢＡ浓度的增加而增大，愈伤组织
逐渐减少，６－ＢＡ浓度为１．０ｍｇ／Ｌ时增殖率最高，苗
木生长效果最好；继代到第４代时，增殖率明显高于
前３代，增殖苗长势良好有活力；以２～３个丛芽块的
接种方式接种效果优于单芽接种，增殖率可达到
３．５７，芽苗叶色浓绿效果最好。本次试验低于孙雁霞
等［５］在山苍子快繁技术体系研究中得出最大月增殖
系数达到７．７的试验研究，造成这样差异的原因可能
是试验材料的品种不同，继代时间也不一致，从而出
现的增殖率不尽相同。本次试验继代的时间还比较
短，下一步将在保证继代苗质量的同时获得更高增殖
率等方面进行深入研究。
参考文献：
［１］　潘晓杰，陈卫军，侯红波．山苍子资源利用加工现状及开
发前景的研究［Ｊ］．经济林研究，２００３，２１（１）：７９－８０．
［２］　陈兆森．山苍子资源的综合利用［Ｊ］．林化科技通讯，
１９８７：１６－２０．
［３］　鲍逸培．中国山苍子油研究概况与进展［Ｊ］．林产化学与
化工，１９９５，１５（２）：７４－７６．
［４］　赵婷，陈国华，张鼎华．我国山苍子的研究现状及展望
［Ｊ］．福建林业科技，２０１０，３７（２）：１５８－１６１．
［５］　孙雁霞，石大兴，王米力，等．山苍子组织培养快速繁殖
技术研究［Ｊ］．四川林业科学，２００２（１）：６４－６７．
［６］　赵佐敏．影响山苍子离体快繁效果的主要因素研究［Ｊ］．
安徽农业科学，２００５，３３（９）：１６５０－１６５２．
［７］　钟东洋，刘力才，陈亚立．山苍子繁育及造林技术［Ｊ］．现
代农业科技，２００８，２３：４７．
［８］　马嵩坚，胡嘉凯，王羽梅，等．山苍子不同外植体的组织
培养［Ｊ］．广东农业科学，２００５（２）：３０－３１．
［９］　马嵩坚，邓艳敏．山苍子带芽茎段的组织培养［Ｊ］．广西
科学，２００５，１２（２）：１５６－１６０．
［１０］　吕曼芳，周传明，周如琼，等．山苍子外植体初始诱导的
研究［Ｊ］．安徽农业科学，２０１２，４０（１０）：５７７３－５７７４．
（责任编辑：邓大玉）　　
６７３ Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．１９Ｎｏ．４，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ　２０１２