全 文 ：2013 年 2 月 第 15 卷 第 2 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Feb. 2013 Vol. 15 No. 2
* ［通讯作者］ 李永辉，Tel: (0898)66895337，E-mail:lyhssl@ 126. com
HPLC法测定三叉苦中异吴茱萸酮酚含量
李洪福，王勇，魏娜，李永辉*
(海南医学院 药学院 热带药用植物研究开发重点实验室，海南 海口 571101)
［摘要］ 目的:建立 HPLC法测定三叉苦中异吴茱萸酮酚含量的方法，为三叉苦药材的质量控制和评价提供
科学依据。方法:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈 －醋酸水体系洗脱，体积流量为 1. 0 mL·min －1，柱温
30 ℃，检测波长为 230 nm。结果:在线性范围 29. 5 ～ 442. 8 μg，异吴茱萸酮酚对照品的标准曲线呈良好的线性关
系，r = 0. 998 8，该方法的平均回收率为 103. 9%，RSD = 0. 90%。结论:本方法快速、简便、重复性好，可用于三
叉苦中异吴茱萸酮酚的含量测定。
［关键词］ 三叉苦;异吴茱萸酮酚;HPLC;苯并二氢吡喃类
三叉苦 Evodia lepta(Spr. )Meer. 是芸香科吴茱
萸属植物，又称三丫苦、三桠苦、三枝枪、小黄散、
鸡骨树、三叉虎，广泛分布于我国东北至西南各地，
是岭南常用中草药，始载于 《岭南采药录》，性味
苦，寒，具有清热解毒，祛风除湿的功效［1］。对
于三叉苦药材中化学成分的研究主要集中在苯并二
氢吡喃类和生物碱类化合物上［2-4］。其中在苯并二
氢吡喃类化合物中，异吴茱萸酮酚分离得到的较
早，其同类化合物结构的确证也是以该化合物为基
础进行化学结构沟通并依据相关波谱数据进行的。
因此，本实验以异吴茱萸酮酚为对照品，建立三叉
苦中异吴茱萸酮酚含量的 HPLC 测定方法，为三叉
苦药材及其成方制剂的质量控制和科学评价提供
依据。
1 材料与仪器
日本岛津高效液相色谱仪(LC-6AD 泵，SPD-
10A检测器，自动进样) ，色谱柱:Kromasil C18柱
(250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ，乙腈和甲醇为色谱纯，
其他试剂均为分析纯。
三叉苦药材由中国医学科学院药用植物研究所
海南分所采集提供，经海南医学院药学院杨卫丽老
师鉴定为芸香科植物三叉苦 Evodia lepta(Spr. )
Meer. 。异吴茱萸酮酚对照品由海南医学院药学院植
物化学实验室分离制备，经光谱分析并对照文献鉴
定为异吴茱萸酮酚［5］，经 DAD检测器检测，采用面
积归一化法计算其纯度大于 99%。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
Kromasil C18柱(250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ，柱
温为 30 ℃，检测波长为 230 nm，体积流量为 1. 0
mL·min －1，进样量为 20 μL，流动相为乙腈-0. 1%
醋酸水(55∶45)。理论塔板数按异吴茱萸酮酚计算大
于10 000，供试品中异吴茱萸酮酚与其他成分达到
了有效分离，分离度大于 1. 5，对照品及供试品的色
谱见图 1。
A. 异吴茱萸酮酚对照品 B. 三叉苦
图 1 三叉苦和对照品的 HPLC图
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DOI:10.13313/j.issn.1673-4890.2013.02.015
2013 年 2 月 第 15 卷 第 2 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Feb. 2013 Vol. 15 No. 2
2. 2 对照品溶液的制备
精密称定异吴茱萸酮酚对照品 0. 036 9 g，置于
25 mL 容量瓶中，用色谱纯甲醇稀释至刻度，得
1. 476 mg·mL －1的对照品储备液，精密吸取上述储备
液 1. 00 mL置 10 mL 容量瓶中，用色谱纯甲醇稀释
至刻度，得 147. 6 μg·mL －1的对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备
精密称定 1. 000 g三叉苦药材粉末，共 3 份，置
磨口三角瓶中，分别精密吸取 50. 00 mL 50%乙醇置
上述 3 份三叉苦药材粉末中，称重，水浴加热回流
提取 1 h，再称重，用 50%乙醇补足减失的重量，过
滤后取续滤液即得。
2. 4 线性关系考察
取对照品储备液适量，配制成 29. 52，73. 80，
147. 6，221. 4，295. 2，442. 8 μg·mL －1系列对照品
溶液，各取 20 μL，进样测定，记录色谱图，以进样
量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标进行线性回归，
得回归方程 Y = 32 017X － 33 923，r = 0. 998 8，表明
异吴茱萸酮酚在 29. 5 ～ 442. 8 μg线性关系良好。
2. 5 精密度试验
精密吸取 147. 6 μg·mL －1异吴茱萸酮酚对照品
溶液 20 μL重复进样 6 次，测定峰面积，计算得异
吴茱萸酮酚峰面积的 RSD =0. 94%。
2. 6 重复性试验
精密称定约 1. 000 g共 6 份三叉苦药材粉末，置
磨口三角瓶中，吸取 50. 00 mL 50%乙醇，称重，水
浴加热回流提取 1 h，再称重，用 50%乙醇补足减失
的重量，过滤后取上述 6 份乙醇提取液的续滤液，
进样 20 μL，计算得异吴茱萸酮酚峰面积的
RSD =1. 06%。
2. 7 加样回收率试验
精密称定 0. 500 g三叉苦药材粉末 9 份，置磨口
三角瓶中，1 ～ 3 份加入 1. 476 mg·mL －1储备液1 mL;
4 ～ 6 份加入 1. 476 mg·mL －1储备液 1. 5 mL;7 ～ 9 份
加入 1. 476 mg·mL －1储备液 2. 0 mL;挥干甲醇，精
密吸取 50. 00 mL 50%乙醇，称重，水浴回流提取
1 h，再称重，用 50%乙醇补足减失重量，过滤后取
上述 9 份提取液的续滤液，在上述色谱条件下进样
20 μL，结果见表 1。
2. 8 样品测定
取 3 份三叉苦药材粉末，分别按供试品溶液制
备项下方法处理，分别精密吸取对照品溶液和供试
表 1 异吴茱萸酮酚加样回收试验
编
号
称样量
/ g
样品中
含量 /mg
对照品加
入量 /mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
1 0. 500 3 2. 45 1. 476 4. 15 115. 2 103. 9 0. 90
2 0. 501 6 2. 46 1. 476 4. 16 115. 7
3 0. 505 1 2. 47 1. 476 4. 17 115. 0
4 0. 503 1 2. 46 2. 214 4. 78 104. 6
5 0. 509 4 2. 50 2. 214 4. 75 101. 9
6 0. 508 6 2. 49 2. 214 4. 79 104. 2
7 0. 506 9 2. 48 2. 952 5. 20 92. 1
8 0. 507 4 2. 49 2. 952 5. 25 93. 9
9 0. 506 3 2. 48 2. 952 5. 22 92. 8
品溶液各 20 μL 注入高效液相色谱仪，按上述色谱
方法进行测定，平行操作 3 次，外标法计算含量，3
份药材中异吴茱萸酮酚的含量分别为 4. 76，4. 79，
4. 75 mg·g －1，平均含量为 4. 77 mg·g －1。
3 讨论
3. 1 供试品溶液制备方法的考察
本实验考察了乙醇超声提取和乙醇回流提取两
种方法制备三叉苦药材中的异吴茱萸酮酚，结果乙
醇回流提取的效率较超声提取好。对于乙醇回流提
取法，分别采用 75%、50%、40%、30%乙醇进行
提取，提取时间分别设定为 20 min、30 min、1. 5 h
及 2. 0 h，结果 50%的乙醇回流提取 1 h为最佳提取
方式。
3. 2 色谱条件的选择
检测波长的选择:本实验称取约 2. 000 g三叉苦
药材粉末，用 95%乙醇 50 mL 水浴加热回流提取
1 h，取续滤液，进样 20 μL，通过 Waters 高效液相
色谱仪中全波长检测器扫描，选择异吴朱萸酮酚的
最大吸收波长 230 nm作检测波长。
流动相的选择:本实验还对 3 种不同的流动相:
(1)甲醇-0. 1%磷酸水(55∶45) ; (2)乙腈-0. 1%磷酸
水(55∶45) ; (3)乙腈-0. 1%醋酸水(55∶45)进行了考
察，结果以乙腈-0. 1%醋酸水(55∶45)为流动相效果
较好。
本实验采用乙醇回流提取的方法制备三叉苦供
试液，以本实验室分离纯化的异吴茱萸酮酚为对照
品建立了三叉苦中异吴茱萸酮酚含量的 HPLC 测定
方法，该方法快速、简便、重复性好，可用于三叉
苦药材中异吴茱萸酮酚的含量测定。
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2013 年 2 月 第 15 卷 第 2 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Feb. 2013 Vol. 15 No. 2
参考文献
［1］ 江苏新医学院． 中药大辞典［M］． 上册． 上海: 上海科学
技术出版社，1977: 68．
［2］ 李国林，朱大元．三个新 2，2-二甲基苯并二氢吡喃类化
合物的分离与鉴定［J］． 植物学报，1997，39 ( 7 ) :
670-674．
［3］ 刁远明，高幼衡，彭新生，等． 三叉苦化学成分研究 ( I)
［J］．中草药，2004，35( 10) : 1098-1099．
［4］ 刁远明，高幼衡，彭新生，等．三叉苦化学成分研究( Ⅱ)
［J］．中草药，2006，37( 9) : 1309-1311．
［5］ 李硕果，杨茵，叶文才，等．三桠苦的化学成分研究［J］．
中草药，2010，41( 7) : 1052-1056．
Determination of Isoevodionol in Evodia lepta(Spr. )Meer. by HPLC
LI Hong-fu，WANG Yong，WEI Na，LI Yong-hui*
(School of Pharmaceutical Science，Hainan Medical University，Haikou 571101，China)
［Abstract］ Objective:To establish the method of determine the content of isoevodionol in Evodia lepta
(Spr. )Meer. by HPLC. The result provided the basis for the effective quality control and evaluation of the material.
Methods:The Kromasil C18 column(250 mm × 4. 6 mm，5μm) was used. The mobile phase was consisted of
acetonitrile-0. 1% acetic acid water(55∶45)with a flow rate at 1. 0 mL·min －1. The column temperature was 30 ℃.
The detection wavelenghth was 230 nm. Results:There was a good linear relationship in the range of 29. 5 ～ 442. 8 μg
(r = 0. 998 8) . The average recovery was 103. 9% (RSD = 0. 90) . Conclusion:The method was efficient and
appropriate with a good repeatability. It can be used for the control of Evodia lepta(Spr. )Meer. .
［Key words］ Evodia lepta(Spr. )Meer. ;Isoevodionol;HPLC;Benzodihydropyran
( 收稿日期 2012-06-01
)
信息天地
2012 年中医药十大新闻揭晓
日前，由国家中医药管理局新闻办公室和中国中医药报社共同主办的 2012 年中医药十大新闻评选
揭晓。分别是:
1. 中医药事业发展“十二五”规划颁布实施，重大项目扎实推进;
2. 中医药积极参与医改，国家实施基层中医药服务能力提升工程;
3. 中医药服务贸易纳入国家贸易发展战略，提出用 5 年时间，基本建立起以国际市场需求为导向
的中医药服务贸易促进体系和国际营销体系;
4. 《藏医药大典》、《中国军事本草》出版发行;
5. 《中医药标准化中长期发展规划纲要》颁布实施;
6. 首批 64 家学术流派传承工作室确定;
7. 中药首次以药品进入欧洲市场;
8. “养熊取胆”、“打通任督二脉”两中医药话题引发社会关注;
9. 首批 15 种中医药文化科普图书向公众推荐;
10. 中医药应急救治体系初步形成，应对突发公共事件能力提升。
( 信息来源: 中国中医药报)
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