全 文 ：产业与科技论坛 2015 年第 14 卷第 12 期
Industrial & Science Tribune 2015.（14）.12
三叉苦叶中三个黄酮类化合物的
体外抗炎活性研究
□魏荷琳 曾邦国 肖隆祥 宋成英 伍朝君
【内容摘要】目的:为了寻找三叉苦中的抗炎活性成分。方法:在对三叉苦叶进行化学成分研究的基础上，通过测试对 LPS诱导
的 BV － 2 细胞产生 NO的抑制率，对分离得到的三个黄酮类化合物进行抗炎活性体外筛选。结果:三个黄酮对
LPS诱导 BV － 2 细胞产生 NO的抑制率较高。结论:三个化合物均有较好的体外抗炎活性。
【关键词】三叉苦;黄酮;抗炎活性
【基金项目】本文为乐山职业技术学院院级课题(编号:KY2014016)研究成果。
【作者简介】魏荷琳(1987． 1 ～) ，女，四川乐山人;乐山职业技术学院助理讲师，硕士;研究方向:天然药物化学与中药分析
曾邦国，肖隆祥，宋成英，伍朝君;乐山职业技术学院
炎症是具有血管系统的活体组织对各种损伤因子的刺
激所发生的防御反应，典型的反应是出现红、肿、热、痛和功
能障碍等临床症状，是机体对内外环境中有害刺激所产生的
一种复杂的生理和病理反应［1］。近代药理学研究表明炎症
与人体感染、心脑血管病、肿瘤、神经退行性疾病、变态反应
等许多重大疾病的发生和发展过程相关。
三叉苦为芸香科吴茱萸属植物三桠苦(Euodia lepta
(Spreng．)Merr．)的茎及带叶嫩枝，又名三叉虎、三丫苦等。
三叉苦性寒，味苦，有清热解毒、祛风除湿的功效，主治咽喉
肿痛、黄疸型肝炎、湿疹、皮炎等［2］。《南宁市药物志》记载其
有清热解毒、舒筋活络、祛风湿、止痒的功效;《岭南采药录》
记载其可清热毒，治跌打损伤、疮疡、疟疾;《广州部队常用中
草药手册》记载其有清热解毒、燥湿止痒的功效，可防治流
感、流脑、乙型脑炎，治疗扁桃体炎、咽喉炎、湿疹、皮炎、痔疮
等。三叉苦作为岭南地区传统应用的一种地方中草药，是目
前市售很多成方制剂中的主要药味，如 999 感冒灵颗粒、三
九胃泰、三金感冒片等。但关于三叉苦的现代药理研究十分
薄弱，对于其发挥药效的活性成分尚未阐明。因文献所记载
的三叉苦药用功效大多和炎症有关，所以为了寻找三叉苦中
的抗炎活性成分，本文在研究三叉苦叶的化学成分基础上，
将分离得到的三个黄酮类化合物 pteleifolosin C、3，5，3 － tri-
hydroxy － 8，4 － dimethoxy － 7 －(3 － methylbut － 2 － enyloxy)
flavone和 3，5，4 ＇ － trihydroxy － 8，3 ＇ － dimethoxy － 7 － (3 －
methylbut － 2 － enoxy)flavone，以 LPS 诱导的 BV － 2 细胞对
三个化合物进行了抗炎活性体外筛选，结果表明三个化合物
均有较好的抗炎活性。
一、实验部分
(一)细胞及试剂。BV － 2 细胞(由北京协和医科大学提
供) ，实验用细胞处于对数生长期;DMEM 培养基(Hyclone，
美国) ;胎牛血清(FBS，Hyclone，美国) ;NO 化学法试剂盒(
南京建成生物公司) ;阳性对照用槲皮素(Sigma，美国) ;细菌
脂多糖(LPS，Sigma，美国)。
Griess试剂 A:0． 1%N －萘乙二胺盐酸盐;Griess试剂 B:
5%H3PO4 含 1%对氨基苯磺酸酰胺。
(二)实验样品及配制方法。实验用三个黄酮类化合物
为本实验室自制。化合物信息如表 1。
表 1 化合物信息表
样品编号 名称 结构
化合物 1 pteleifolosin C
化合物 2
3，5，3 － trihydroxy
－ 8，4＇－ dimethoxy － 7 －
(3 － methylbut － 2 － enyloxy)
flavone
化合物 3
3，5，4＇－ trihydroxy － 8，
3＇－ dimethoxy －
7 －(3 － methylbut
－ 2 － enoxy)flavone
化合物结构鉴定过程如下。
化合物 1:黄色固体;HCl － Mg 粉反应阳性;香草醛 －硫
酸喷雾显黄色斑点;EI － MS:m/z 384［M］+;1H NMＲ (DM-
SO － d6，500 MHz)δ:12． 43 (1H，s，5 － OH) ，7． 71 (1H，
d，J = 2． 0 Hz，H －2) ，7． 68 (1H，dd，J = 2． 0，9． 0 Hz，H
－6) ，7． 01 (1H，d，J = 9． 0 Hz，H －5) ，6． 72 (1H，d，J
= 2． 0 Hz，H －8) ，6． 34 (1H，d，J = 2． 0 Hz，H －6) ，5． 46
(1H，t，J = 6． 5 Hz，H －2) ，4． 65 (2H，d，J = 6． 5 Hz，H
－1) ，3． 85 (3H，s，4 － OCH3) ，1． 76 (3H，s，H － 4) ，
1． 73 (3H，s，H －5) ;13C NMＲ (DMSO － d6，125 MHz)δ:
175． 7 (C － 4) ，163． 8 (C － 7) ，159． 9 (C － 5) ，155． 7 (C －
9) ，149． 1 (C － 4) ，146． 4 (C － 3) ，145． 8 (C － 5) ，137． 8
(C － 3) ，136． 0 (C － 3) ，123． 0 (C － 1) ，119． 4 (C － 6) ，
118． 7 (C － 2) ，114． 4 (C － 2) ，111． 4 (C － 5) ，103． 6 (C
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－ 10) ，97． 6 (C － 6) ，92． 2 (C － 8) ，64． 9 (C － 1) ，55． 3
(4 － OCH3) ，25． 0 (C － 4) ，17． 7 (C － 5)。
以上数据与文献［3］对照一致，确定该化合物为 pteleifolo-
sin C。
化合物 2:黄色固体;HCl － Mg 粉反应阳性;香草醛 －硫
酸喷雾显黄色斑点;ESI － MS:m/z 413［M － H］－;1H NMＲ
(DMSO － d6，500 MHz)δ:12． 23 (1H，s，5 － OH) ，9． 55
(1H，s，3 － OH) ，9． 41 (1H，s，3 － OH) ，7． 72 (1H，d，J
= 1． 5 Hz，H －2) ，7． 70 (1H，dd，J = 1． 5，8． 0 Hz，H －
6) ，7． 12 (1H，d，J = 8． 0 Hz，H －5) ，6． 58 (1H，S，H －
6) ，5． 48 (1H，t，J = 6． 5 Hz，H －2) ，4． 69 (2H，d，J =
6． 5 Hz，H －1) ，3． 85 (3H，s，4 － OCH3) ，3． 82 (3H，s，
8 － OCH3) ，1． 77 (3H，s，H －4) ，1． 74 (3H，s，H －5) ;
13C NMＲ (DMSO － d6，125 MHz)δ:176． 3 (C － 4) ，157． 0
(C － 7) ，155． 6 (C － 5) ，149． 5 (C － 3) ，147． 7 (C － 9) ，
146． 7 (C － 3) ，146． 3 (C － 2) ，138． 3 (C － 3) ，136． 1 (C
－ 3) ，128． 5 (C － 8) ，123． 5 (C － 1) ，119． 8 (C － 6) ，119．
1 (C － 2) ，114． 5 (C － 5) ，111． 9 (C － 2) ，103． 4 (C －
10) ，96． 2 (C － 6) ，65． 7 (C － 1) ，60． 9 (8 － OCH3) ，55． 6
(4 － OCH3) ，25． 4 (C － 4) ，18． 1 (C － 5)。以上数据与
文献［4］对照一致，确定该化合物为 3，5，3 － trihydroxy － 8，4
－ dimethoxy － 7 －(3 － methylbut － 2 － enyloxy)flavone。
化合物 3:黄色粉末;EI － MS:m/z 414［M］+;1H NMＲ
(DMSO － d6，500 MHz)δ:12． 23 (1H，s，5 － OH) ，9． 79
(1H，s，4 － OH) ，9． 54 (1H，s，3 － OH) ，7． 78 (1H，d，J
= 2． 0 Hz，H －2) ，7． 73 (1H，dd，J = 2． 0，8． 5 Hz，H －
6) ，6． 98 (1H，d，J = 8． 5 Hz，H －5) ，6． 58 (1H，S，H －
6) ，5． 47 (1H，t，J = 6． 5 Hz，H －2) ，4． 69 (2H，d，J =
6． 5 Hz，H －1) ，3． 85 (3H，s，3 － OCH3) ，3． 83 (3H，s，
8 － OCH3) ，1． 77 (3H，s，H －4) ，1． 74 (3H，s，H －5) ;
13C NMＲ (DMSO － d6，125 MHz)δ:176． 2 (C － 4) ，157． 0
(C － 7) ，155． 6 (C － 5) ，149． 0 (C － 4) ，147． 7 (C － 9) ，
147． 4 (C － 3) ，146． 9 (C － 2) ，138． 3 (C － 3) ，135． 9 (C
－ 3) ，128． 5 (C － 8) ，122． 1 (C － 1) ，121． 8 (C － 6) ，119．
2 (C － 2) ，115． 7 (C － 5) ，111． 3 (C － 2) ，103． 4 (C －
10) ，96． 2 (C － 6) ，65． 8 (C － 1) ，60． 9 (8 － OCH3) ，55． 6
(3 － OCH3) ，25． 4 (C － 4) ，18． 1 (C － 5)。以上数据与
文献［5］对照一致，确定该化合物为 3，5，4＇－ trihydroxy － 8，3＇－
dimethoxy － 7 －(3 － methylbut － 2 － enoxy)flavone。
所有待测样品均配制成浓度为 10 mM的 DMSO溶液，临
用时根据需要稀释。
(三)实验方法。BV － 2 小胶质细胞用 DMEM 培养基
(加 10% FBS、100 μg·L －1青霉素和 100 μg·L －1链霉素)
培养于 5% CO2，37℃的培养箱中，传代接种 24 h 后用于实
验。实验时，将 LPS(1 mg·L －1)作用于 BV － 2 细胞到指定
时间，建立神经炎症模型，使用 Gress 法［6］测定 NO 的含量，
计算 IC50 值。
将实验分为对照组、槲皮素阳性组、LPS诱导组、给药组。
对照组采用以上 DMEM 培养液补充体积，其他组用 LPS(1
mg·L －1)诱导炎症。阳性组采用槲皮素处理细胞，给药组
采用上述化合物协同 LPS (1 mg·L －1)处理细胞，以 5 × 104
cells·mL －1密度接种于 96 孔板，每个样品重复测试 4 次，于
37 ℃、5% CO2 条件下培养 24 小时后，取 100μL细胞上清液
至酶标板中，加入等体积的 Griess试剂，室温反应 10min后测
定 570nm处的吸收值(OD值)。使用亚硝酸钠标准液绘制标
准曲线，根据标准曲线计算细胞培养上清液中 NO2 －的浓度
以及对 NO释放的抑制率。
二、实验结果
以槲皮素为阳性对照，按照上述实验方法进行实验，初
筛结果如表 2。
表 2 抗炎活性结果
样品编号 IC50 (μM)
化合物 1 16． 74
化合物 2 13． 44
化合物 3 18． 96
槲皮素(阳性对照) 10． 01
从上述实验结果，可以得出 3 个化合物均表现出较好的
体外抗炎活性，即对 LPS诱导 BV － 2 细胞产生 NO的抑制率
较高。
三、结语
三叉苦作为岭南地区已经习用的一种地方中药，随着目
前很多成方制剂的热销，临床应用越来越广泛。但关于三叉
苦的药理作用的现代研究少有报道，对于其发挥临床药效的
活性成分尚未阐明。
本文在查阅三叉苦临床应用文献的基础上，对从三叉苦
叶中分离得到的三个黄酮类化合物进行体外活性筛选，结果
显示三个化合物均有较好的体外抗炎活性，该研究结论与文
献记载的按传统中医理论总结的药物功效相一致。本文研
究了三叉苦中部分化合物的体外抗炎活性，要充分阐明三叉
苦的药效物质，亟待从整体上多种主要成分进行相应的体内
外药效学评价。
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