全 文 ：第１４卷第４期
２０１５年７月
杭州师范大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈａｎｇｚｈｏｕ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）
Ｖｏｌ．１４Ｎｏ．４
Ｊｕｌ．２０１５
收稿日期：２０１４－１１－１４
基金项目：浙江省药用植物种质改良与质量控制技术重点实验室开放项目（２０１３０２）．
通信作者：向太和（１９６５—），男，教授，博士，主要从事植物基因工程研究．Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｔｈｃｎ＠１６３．ｃｏｍ
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－２３２Ｘ．２０１５．０４．００９
三叶青两个肌动蛋白基因片段的克隆及其分析
黄连香，宋亚玲，向太和，孙　扬，武　盼，王　博
（杭州师范大学生命与环境科学学院，浙江 杭州３１００３６）
摘　要：根据ＧｅｎＢａｎｋ中登录的植物肌动蛋白保守序列设计１对引物，对三叶青的块根进行ＲＴ－ＰＣＲ，在１
次扩增中得到２个不同的肌动蛋白基因片段，分别命名为ＴｈＡｃｔ１和ＴｈＡｃｔ２．测序结果显示：ＴｈＡｃｔ１基因片段
长度为８６７ｂｐ，编码２５２个氨基酸；ＴｈＡｃｔ２基因片段长度为１　０７９ｂｐ，编码１５２个氨基酸．经Ｂｌａｓｔ分析，ＴｈＡｃｔ１
和ＴｈＡｃｔ２基因均属于ＮＢＤ＿ｓｕｇａｒ－ｋｉｎａｓｅ＿ＨＳＰ７０＿ａｃｔｉｎ　ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ家族，与其它物种Ａｃｔｉｎ基因序列和编码的
蛋白质均具有同源性．ＲＴ－ＰＣＲ结果初步表明：在茎、普通根和块根中ＴｈＡｃｔ１和ＴｈＡｃｔ２基因的表达未见差异；
但在叶中，ＴｈＡｃｔ１的表达稍强，而ＴｈＡｃｔ２的表达稍弱．另外，在茎、普通根和块根中，ＴｈＡｃｔ１表达比ＴｈＡｃｔ２强；
但在叶中ＴｈＡｃｔ１表达比ＴｈＡｃｔ２弱．结果为分析肌动蛋白基因在三叶青块根发育中的功能奠定了基础；获得的
肌动蛋白也可以作为内参基因，在三叶青功能基因组的研究中用于其它基因的定量表达分析．
关键词：三叶青；肌动蛋白基因；克隆；表达
中图分类号：Ｑ９４３　　　　　文献标志码：Ａ
文章编号：１６７４－２３２Ｘ（２０１５）０４－０３８５－０５
肌动蛋白（Ａｃｔｉｎ）普遍存在于真核生物细胞中，是细胞骨架微丝的组成成分，参与细胞内很多重要的
生理活动，如细胞形状的维持、细胞运动、细胞内物质运输、细胞分裂等［１－２］．单体肌动蛋白为球蛋白，一般
由３７５～３７７个氨基酸残基组成［３］．阎隆飞等１９６３年首次报道高等植物中存在肌动蛋白［４］．在植物基因表
达调控研究中，肌动蛋白基因作为一种管家基因常被广泛用作分子内标［５］．相关研究表明，高等植物肌动
蛋白由多基因编码，目前，百合［６］、茶树［７］、刺五加［８］、马铃薯［９］等植物的肌动蛋白基因已被克隆和分析，但
有关珍稀药用植物三叶青（Ｔｅｔｒａｓｔｉｇｍａ　ｈｅｍｓｌｅｙａｎｕｍ Ｄｉｅｌｓ　ｅｔ　Ｇｉｌｇ）肌动蛋白基因的研究尚未见报道．
本研究克隆了三叶青２个肌动蛋白基因片段，并检验该基因在不同组织中的表达情况，研究结果报道如下．
１　材料与方法
１．１　材料
三叶青采自丽水市庆元县山区野生种，种植于杭州师范大学塑料大棚中．
１．２　方法
１．２．１　ＲＮＡ的提取
利用上海Ｓａｎｇｏｎ公司的ＲＮＡ抽提试剂盒提取三叶青块根中的ＲＮＡ，按照操作说明进行．所得的
ＲＮＡ溶液保存于－８０℃用于后续实验．
１．２．２　ｃＤＮＡ第１链的合成
利用北京全式金生物技术有限公司的ＴｒａｎｓＳｃｒｉｐｔ　Ｆｉｒｓｔ－Ｓｔｒａｎｄ　ｃＤＮＡ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　Ｓｕｐｅｒ　Ｍｉｘ试剂盒
进行三叶青ｃＤＮＡ的合成，即：在Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中依次加入总ＲＮＡ（约２００ｎｇ／μＬ）２μＬ，Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１８
（０．５μｇ／μＬ）１μＬ，２×ＴＳ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ　Ｍｉｘ　１０μＬ，逆转录酶１μＬ，ｄｄＨ２Ｏ（ＲＮａｓｅ－ｆｒｅｅ）６μＬ，轻轻混匀，
４２℃孵育３０ｍｉｎ后于８５℃加热５ｍｉｎ失活ＴｒａｎｓＳｃｒｉｐｔ　ＲＴ酶．
１．２．３　ＰＣＲ扩增
根据ＧｅｎＢａｎｋ中拟南芥、烟草、大豆和水稻的肌动蛋白基因序列（ＧｅｎＢａｎｋ登陆号：ＡＰ００２０６３．２、
Ｕ６０４８９．１、Ｕ６０４９７．１、Ｘ１６２８０．１和Ｘ１５８６５．１等），通过ＣｌｕｓｔａｌＷ 软件分析确定保守序列区域，再根据保
守序列用Ｐｒｉｍｅｒ３软件设计１组引物 Ａｃｔ－Ｐ１：５′－ＧＧＡＧＡＡＧＡＴＣＴＧＧＣＡＴＣＡＣＡ－３′和 Ａｃｔ－Ｐ２：５′－ＣＣ
ＴＣＣＡＡＴＣＣＡＧＡＣＡＣＴＧＴＡ－３′，引物由上海Ｓａｎｇｏｎ公司合成．以上述逆转录产物ｃＤＮＡ为模板进行
ＰＣＲ扩增，每３５μＬ扩增体系包括：Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶 （２．５Ｕ／μＬ）１μＬ，ｄＮＴＰ（１０ｍｍｏｌ／Ｌ）２μＬ，引物
（约１０ｐｍｏｌ／μＬ）各２μＬ，ｃＤＮＡ模板（５０～１００ｎｇ／μＬ）１μＬ，ｄｄＨ２Ｏ　２３．５μＬ．扩增程序为：９４℃预变性５
ｍｉｎ后，按照９４℃变性４５ｓ、５５℃退火４５ｓ、７２℃延伸９０ｓ进行３０个循环，最后７２℃延伸１０ｍｉｎ，４℃
保存备用．ＰＣＲ产物在１％的琼脂糖凝胶电泳约１ｈ（９０Ｖ）、溴化乙锭（ＥＢ）染色后，用美国Ｂｉｏ／Ｒａｄ凝胶
成像系统进行观察分析和拍照．
１．２．４　目的片段的克隆和测序
利用上海Ｓａｎｇｏｎ公司试剂盒回收纯化目的ＤＮＡ片段，连接到ｐＭＤ１９－Ｔ克隆载体（Ｔａｋａｒａ公司产
品），转化大肠杆菌ＤＨ５α感受态细胞并进行蓝白斑筛选，重组质粒采用酶切法进行鉴定，最后对阳性克隆
进行测序．
１．２．５　扩展蛋白基因序列的生物信息学分析
使用ＮＣＢＩ在线分析软件对测定的序列进行Ｂｌａｓｔｎ分析，对序列编码的氨基酸进行Ｂｌａｓｔｐ同源性比
较分析，同时利用ＣｌｕｓｔａｌＷ软件对氨基酸序列与其它物种的肌动蛋白氨基酸序列进行多重比较．
１．２．６　肌动蛋白基因的表达分析
对三叶青的叶、茎、普通根和块根分别提取ＲＮＡ，利用紫外分光光度法对提取的ＲＮＡ进行定量后，不同
器官以等量的ＲＮＡ进行逆转录获得ｃＤＮＡ，最后以Ａｃｔ－Ｐ１和Ａｃｔ－Ｐ２为引物进行ＲＴ－ＰＣＲ分析，方法同前．
２　结果与分析
２．１　三叶青肌动蛋白基因的ＲＴ－ＰＣＲ扩增
以三叶青ＲＮＡ逆转录得到的ｃＤＮＡ为模板，利用引物Ａｃｔ－Ｐ１、Ａｃｔ－Ｐ２进行ＰＣＲ扩增，电泳后出现
两条较清晰的条带，大小约为８００ｂｐ和１　０００ｂｐ（分别命名为ＴｈＡｃｔ１和ＴｈＡｃｔ２）（图１）．
Ｍ：ＤＳ２０００ＤＮＡ　ｍａｒｋｅｒ；１∶ＰＣＲ扩增产物
图１　三叶青肌动蛋白基因的ＲＴ－ＰＣＲ扩增结果
Ｆｉｇ．１　ＰＣＲ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｃｔｉｎ　ｇｅｎｅ　ｆｒｏｍ
Ｔｅｔｒａｓｔｉｇｍａ　ｈｅｍｓｌｅｙａｎｕｍＤｉｅｌｓ　ｅｔ　Ｇｉｌｇ
Ｍ：ＤＳ２０００ＤＮＡ　ｍａｒｋｅｒ；１：ＴｈＡｃｔ１克隆；２：ＴｈＡｃｔ２克隆
图２　重组质粒被ＢａｍＨⅠ＋ＳａｌⅠ酶切结果
Ｆｉｇ．２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｐｌａｓｍｉｄ　ｄｉｇｅｓｔｅｄ
ｗｉｔｈ　ｅｎｚｙｍｅ　ｏｆ　ＢａｍＨⅠ＋ＳａｌⅠ
２．２　ＴｈＡｃｔ１和ＴｈＡｃｔ２基因的克隆和鉴定
ＰＣＲ产物经回收纯化后连接到克隆载体ｐＭＤ１９－Ｔ，转化感受态大肠杆菌ＤＨ５α，挑选白色单菌落，提
６８３ 杭州师范大学学报（自然科学版） ２０１５年　
取其质粒ＤＮＡ，使用ＢａｍＨⅠ＋ＳａｌⅠ对ｐＭＤ１９－ＴｈＡｃｔ１和ｐＭＤ１９－ＴｈＡｃｔ２重组载体进行双酶切鉴定，
酶切获得的插入片段大小分别为８００ｂｐ和１　０００ｂｐ左右，与预期片段大小相符，结果表明获得了阳性克
隆（图２）．
２．３　ＴｈＡｃｔ１和ＴｈＡｃｔ２ 基因序列分析
测序结果显示，ＴｈＡｃｔ１（短片段）为８６７ｂｐ（图３），ＴｈＡｃｔ２（长片段）为１　０７９ｂｐ（图４），两端引物序列
位置在图３和４中分别用方框标出．对两个ＤＮＡ片段进行Ｂｌａｓｔｎ分析，并结合Ｂｌａｓｔｐ和ＯＲＦｉｎｄｅｒ软件
分析，两个基因均属于ＮＢＤ＿ｓｕｇａｒ－ｋｉｎａｓｅ＿ＨＳＰ７０＿ａｃｔｉｎ　ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ家族，ＴｈＡｃｔ１（短片段）编码２５２个氨
基酸，ＴｈＡｃｔ２（长片段）编码１５２个氨基酸．其中，ＴｈＡｃｔ１核苷酸序列与葡萄（ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＡＭ４６５１８９．１）、
黄褐棉（ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＪＦ７２２０２６．１）和陆地棉（ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＪＦ７２２０３６．１）等的相似性分别为９２％、
８５％和８５％，其编码的蛋白质与刺儿菜（ＧｅｎＢａｎｋ登录号 ＡＥＹ７７４１５．１）、月季（ＧｅｎＢａｎｋ登录号
ＢＡＦ３６０００．１）和覆盆子（ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＡＥＤ８９６３５．１）等的相似性均为８７％．而ＴｈＡｃｔ２核苷酸序列与
葡萄（ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＸＭ＿００２２６５４４０．１）、海岛棉（ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＪＦ７２２０３３．１）和毛白杨（ＧｅｎＢａｎｋ登
录号ＪＸ９８６５９０．１）等的相似性分别为９１％、８５％和８５％，其编码的蛋白质与毛茛（ＧｅｎＢａｎｋ登录号
ＢＡＰ２８４６３．１）、鱼腥草（ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＡＤＮ３７６８７．１）和欧细辛（ＧｅｎＢａｎｋ登录号ＡＤＮ３７６８９．１）等的相
似性分别为９０％、９３％和９３％．进一步说明克隆到的两个ＤＮＡ片段为肌动蛋白基因序列．
图３　ＴｈＡｃｔ１基因片段的核苷酸序列及编码的氨基酸序列
Ｆｉｇ．３　Ｔｈｅ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＴｈＡｃｔ１　ｇｅｎｅ
７８３　第４期 黄连香，等：三叶青两个肌动蛋白基因片段的克隆及其分析
图４　ＴｈＡｃｔ２基因片段的核苷酸序列及编码的氨基酸序列
Ｆｉｇ．４　Ｔｈｅ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＴｈＡｃｔ２　ｇｅｎｅ
分别将推测的三叶青的两个基因片段编码的氨基酸序列与ＧｅｎＢａｎｋ中登陆的其它物种Ａｃｔｉｎ基因
的氨基酸序列进行ＣｌｕａｔｌＷ软件的多重比较，发现ＴｈＡｃｔ１基因编码的氨基酸中，有２１８个是保守的，６个是
非保守氨基酸，而且与其它物种相比多出连续的２８个氨基酸（图３中用下划线标出）；在ＴｈＡｃｔ２基因编码的
１５２个氨基酸中，仅有１２个是非保守的氨基酸（图４中用下划线标出），这说明我们克隆到的ＴｈＡｃｔ１和
Ｍ：ＤＳ２０００ＤＮＡ　ｍａｒｋｅｒ；１：叶；２：茎；３：普通根；４：块根
图５　ＴｈＡｃｔ１和ＴｈＡｃｔ２在不同器官中的表达分析
Ｆｉｇ．５　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＴｈＡｃｔ１　ａｎｄ　ＴｈＡｃｔ２
ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｏｒｇａｎｓ
ＴｈＡｃｔ２基因片段为Ａｃｔｉｎ基因的高度保守区域．
２．４　ＴｈＡｃｔ１和ＴｈＡｃｔ２基因组织特异性表达分析
ＲＴ－ＰＣＲ半定量结果初步显示：在茎、普通根
和块根中的ＴｈＡｃｔ１、ＴｈＡｃｔ２ 基因表达未见差异；
但与叶相比，ＴｈＡｃｔ１ 的表达稍强，而ＴｈＡｃｔ２ 的表
达稍弱．另外，在茎、普通根和块根中，ＴｈＡｃｔ１表达
比ＴｈＡｃｔ２强；但在叶中正好相反，ＴｈＡｃｔ１ 表达比
ＴｈＡｃｔ２弱（图５）．
３　讨论
不同物种中肌动蛋白的数目变化很大，除少数
单细胞原生动物、藻类和酵母类外，所有的多细胞
真核生物的肌动蛋白都由多基因家族编码［１０］，如黄瓜上至少有３条 Ａｃｔｉｎ基因［１１］，棉花上至少含１５个
Ａｃｔｉｎ基因［１２］，这些不同的基因编码不同类型的肌动蛋白异形体，与不同类型的肌动蛋白结合蛋白作用，
８８３ 杭州师范大学学报（自然科学版） ２０１５年　
从而参与不同的生理活动和生命过程［１３－１４］．本研究通过１次ＰＣＲ扩增即获得了２个三叶青的肌动蛋白基
因，这可能与肌动蛋白基因是基因家族有关，在黄瓜中也有类似报道［１１］．克隆到的２条肌动蛋白基因片段
核苷酸序列和氨基酸序列与ＧｅｎＢａｎｋ中收录的其它生物的肌动蛋白有高度同源．相关研究表明，不同生
物肌动蛋白具有高度保守性，其核苷酸残基变化１％约需１００万年，暗示着肌动蛋白基因在进化过程中承
受着较大的选择压力，在生物体内执行着重要的生物学功能［１０］．本文中也证明了肌动蛋白作为看家基因
的高度保守性，这与肌动蛋白作为细胞骨架的重要作用是息息相关的［１３－１４］．
另一方面，在基因的功能研究中，需要选用内标基因作为参考，一个理想的内标基因应该在各种不同
的细胞类型、不同发育阶段采用不同处理方法时都能稳定表达，稳定的内标是确定目标基因相对表达的基
础［１５］．本文克隆获得的２条肌动蛋白基因片段经ＰＣＲ扩增在三叶青叶、茎、普通根和块状根中均得到正
常表达，说明ＴｈＡｃｔ１和ＴｈＡｃｔ２基因可以作为三叶青的内参基因来研究其它功能基因的表达．
参考文献：
［１］贺淹才．肌动蛋白和肌动蛋白基因的研究进展［Ｊ］．生命的化学，２００２，２２（３）：２４８－２５０．
［２］陈颖，王刚，赵俊霞．高等植物体内的肌动蛋白［Ｊ］．生物学通报，２００３，３８（１）：１３－１５．
［３］胡松年，阎隆飞．肌动蛋白与真核生物的进化［Ｊ］．动物学报，１９９９，４５（４）：４４０－４４７．
［４］阎隆飞，石德权．高等植物中的收缩蛋白［Ｊ］．生物化学与生物物理学报，１９６３，３（４）：４９０－４９６．
［５］Ｔｈｅｌｉｎ　Ｏ，Ｚｏｒｚｉ　Ｗ，Ｌａｋａｙｅ　Ｂ，ｅｔ　ａｌ．Ｈｏｕｓｅｋｅｅｐｉｎｇ　ｇｅｎｅｓ　ａｓ　ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｓｔａｎｄａｒｄｓ：ｕｓｅ　ａｎｄ　ｌｉｍｉｔｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，１９９９，７５（２）：２９１－２９５．
［６］梁云，袁素霞，冯慧颖，等．百合肌动蛋白基因ｌｉｌｙＡｃｔｉｎ的克隆与表达分析［Ｊ］．园艺学报，２０１３，４０（７）：１３１８－１３２６．
［７］杨亚军，王新超，马春雷．茶树肌动蛋白基因（ＣｓＡｃｔｉｎ１）全长ｃＤＮＡ克隆与生物信息学分析［Ｊ］．植物研究，２０１２，３２（１）：６９－７６．
［８］邢朝斌，龙月红，修乐山，等．刺五加肌动蛋白基因的克隆和表达稳定性分析［Ｊ］．中草药，２０１３，４３（１３）：１８１９－１８２２．
［９］蒋丽花，傅明辉，彭进平．水葫芦肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析［Ｊ］．广东农业科学，２０１４（９）：１４３－１４６．
［１０］孟玉平，张洁，张春芬，等．枣树肌动蛋白基因ｃＤＮＡ片段的克隆及其表达分析［Ｊ］．生物技术通报，２００９（１１）：９８－１０７．
［１１］徐纪明，向太和．全雌性黄瓜中３个肌动蛋白基因片段的克隆和表达分析［Ｊ］．细胞生物学杂志，２００８，３０（１）：１２５－１３０．
［１２］Ｌｉ　Ｘ　Ｂ，Ｆａｎ　Ｘ　Ｐ，Ｗａｎｇ　Ｘ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｃｏｔｔｏｎ　ＡＣＴＩＮ１ｇｅｎｅ　ｉｓ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　ｆｉｂｅｒｓ　ａｎｄ　ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｓ　ｉｎ　ｆｉｂｅｒ　ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ
［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ，２００５，１７（３）：８５９－８７５．
［１３］ＭｃＣｕｒｄｙ　Ｄ　Ｗ，Ｋｏｖａｒ　Ｄ　Ｒ，Ｓｔａｉｇｅｒ　Ｃ　Ｊ．Ａｃｔｉｎ　ａｎｄ　ａｃｔｉｎ－ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｉｎ　ｈｉｇｈｅｒ　ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｔｏｐｌａｓｍａ，２００１，２１５（１）：８９－１０４．
［１４］Ｋａｎｄａｓａｍｙ　Ｍ　Ｋ，Ｄｅａｌ　Ｒ　Ｂ，ＭｃＫｉｎｎｅｙ　Ｅ　Ｃ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｌａｎｔ　ａｃｔｉｎ－ｒｅｌａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ　Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉ，２００４，９（４）：１９６－２０２．
［１５］Ｓｕｚｕｋｉ　Ｔ，Ｈｉｇｇｉｎｓ　Ｐ　Ｊ，Ｃｒａｗｆｏｒｄ　Ｄ　Ｒ．Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ＲＮＡ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２０００，２９（２）：３３２－３３７．
Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｔｗｏ　Ａｃｔｉｎ　Ｇｅｎｅ　Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｉｎ
Ｔｅｔｒａｓｔｉｇｍａ　ｈｅｍｓｌｅｙａｎｕｍＤｉｅｌｓ　ｅｔ　Ｇｉｌｇ
ＨＵＡＮＧ　Ｌｉａｎｘｉａｎｇ，ＳＯＮＧ　Ｙａｌｉｎｇ，ＸＩＡＮＧ　Ｔａｉｈｅ，ＳＵＮ　Ｙａｎｇ，ＷＵ　Ｐａｎ，ＷＡＮＧ　Ｂｏ
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ　３１００３６，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ　ａｃｔｉｎ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎ　ＧｅｎＢａｎｋ　ｄａｔａｂａｓｅ，ｏｎｅ　ｐａｉｒｓ　ｏｆ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ａｒｅ
ｄｅｓｉｇｎｅｄ．Ｔｗｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ａｃｔｉｎ　ｇｅｎｅ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ，ｎａｍｅｄ　ａｓ　ＴｈＡｃｔ１　ａｎｄ　ＴｈＡｃｔ２，ａｒｅ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｉｎ　ｏｎｅ　ＲＴ－ＰＣＲ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ
ｃａｌａｂａｓｈ－ｓｈａｐｅｄ　ｒｏｏｔ　ｏｆ　Ｔｅｔｒａｓｔｉｇｍａ　ｈｅｍｓｌｅｙａｎｕｍ Ｄｉｅｌｓ　ｅｔ　Ｇｉｌｇ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　ＴｈＡｃｔ１　ｉｓ　８６７ｂｐ
ｅｎｃｏｄｉｎｇ　２５２ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　ＴｈＡｃｔ２　ｉｓ　１　０７９ｂｐ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　１５２ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ．Ｂｙ　Ｂｌａｓｔ　ａｎａｌｙｓｉｓ，ｂｏｔｈ　ＴｈＡｃｔ１
ａｎｄ　ＴｈＡｃｔ２　ｇｅｎｅｓ　ｂｅｌｏｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ＮＢＤ＿ｓｕｇａｒ－ｋｉｎａｓｅ＿ＨＳＰ７０＿ａｃｔｉｎ　ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ，ａｎｄ　ａｒｅ　ｈｏｍｏｌｏｇｙ　ｗｉｔｈ　ｏｔｈｅｒ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｉｎ　Ａｃｔｉｏｎ
ｇｅｎｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　ｃｏｄｅ．Ｔｈｅ　ＲＴ－ＰＣＲ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｈｏｗｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＴｈＡｃｔ１　ａｎｄ　ＴｈＡｃｔ２　ｈａｓ　ｎｏ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍ，ｏｒｄｉｎａｒｙ　ｒｏｏｔ　ａｎｄ　ｃａｌａｂａｓｈ－ｓｈａｐｅｄ　ｒｏｏｔ，ＴｈＡｃｔ１　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｅａｆ　ｉｓ　ｓｌｉｇｈｔｌｙ　ｓｔｒｏｎｇｅｒ　ｔｈａｎ　ＴｈＡｃｔ２，ｗｈｉｌｅ
ＴｈＡｃｔ１　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍ，ｏｒｄｉｎａｒｙ　ｒｏｏｔ　ａｎｄ　ｃａｌａｂａｓｈ－ｓｈａｐｅｄ　ｒｏｏｔ　ｉｓ　ｓｌｉｇｈｔｌｙ　ｈｉｇｈ　ｂｕｔ　ｗｅａｋ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｅａｆ．Ｔｈｅ　ａｃｔｉｎ　ｇｅｎｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｃａｎ
ｂｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ａ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｇｅｎｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｏｔｈｅｒ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｅｎｏｍｅ　ｏｆ　Ｔｅｔｒａｓｔｉｇｍａ　ｈｅｍｓｌｅｙａｎｕｍ
Ｄｉｅｌｓ　ｅｔ　Ｇｉｌｇ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｔｅｔｒａｓｔｉｇｍａ　ｈｅｍｓｌｅｙａｎｕｍ Ｄｉｅｌｓ　ｅｔ　Ｇｉｌｇ；ａｃｔｉｎ　ｇｅｎｅ；ｃｌｏｎｅ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｇｅｎｅ
９８３　第４期 黄连香，等：三叶青两个肌动蛋白基因片段的克隆及其分析