全 文 ：收稿日期:2006-02-16
作者简介:伍昭龙(1978-),男 ,实验师 ,硕士 ,主要从事机能学实验教学及中药药理学科研工作。
三叶青对 CCl4致肝损伤大鼠血清五项生化指标水平的影响
伍昭龙 ,吕江明 ,李春艳 ,彭英福
(吉首大学医学院 ,湖南　吉首　416000)
摘　要:目的:研究三叶青水煎液对 CCl4致大鼠急性肝损伤的保护作用 。方法:将 40只 SD大鼠随
机分为 5组 ,即正常对照组 ,模型对照组 ,高 、低剂量治疗组及阳性对照组 ,分别灌胃等容积(10mL/kg)
的生理盐水 、三叶青水煎液(1.6 g/mL、0.16 g/mL)和联苯双酯(0.000208 g/mL),连续 6 d,每天 1次。
末次给药后 ,除正常组外其他各组腹腔注射 CCl4原液 1次 ,造成大鼠急性肝损伤模型 ,检测血清谷丙转
氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)水平。结
果:与模型组比较 ,三叶青高 、低剂量治疗组 ALT、AST、ALP及 MDA含量均明显降低 (P<0.05或 P<
0.01),但 SOD活性明显升高 (P<0.05或 P<0.01);高剂量组与阳性对照组比较 , AST、ALP及 MDA
水平差异显著 (P<0.05)。结论:三叶青对 CCl4造成的大鼠急性肝损伤具有保护作用 ,且三叶青高剂
量保护损伤肝的效果优于联苯双酯。
关键词:三叶青;水煎液;肝损伤;CCl4
中图分类号:R285.5　文献标识码:B　文章编号:1003-8450(2006)04-0011-03
　　三叶青为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤
(TetrastigmaHemsleyanumDielsetGilg),主要分
布于长江以南各地 ,药源十分丰富。全草含有槲皮
素 、山柰酚 、山柰酚 -3-O-新橙皮糖苷等多种黄
酮类化合物 [ 1-3] , 具有清热解毒 、活血祛风的功
效 [ 4] ,民间用于治疗黄疸及急 、慢性肝炎有较好的
疗效。药理实验表明 ,三叶青能促进家兔肝细胞吸
收和吞噬放射性四碘四氯荧光素[ 5] , 有加强肝脏
功能的作用 。在此基础上 ,我们研究了对 CCl4造
成的大鼠急性肝损伤 5项血清生化指标水平的影
响 , 以探讨其作用机制 ,为临床应用三叶青治疗肝
病提供实验依据 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1 　实验动物
SD大鼠 40只 ,质量(180±20)g,由中南大学
实验动物学部提供。
1.1.2　药品与试剂
三叶青(块根)采自湖南吉首市郊区 ,由李春
艳副教授进行生药学鉴定;联苯双酯(浙江医药股
份有限公司新昌制药厂),批号:050604。 ALT试
剂盒 , 批号:010021;AST试剂盒 , 批号:020071;
ALP试剂盒 ,批号:030261,以上均为北京中生北控
生物科技股份有限公司产品。 MDA试剂盒 ,批号:
20051202;SOD试剂盒 ,批号:20051212,均为南京
建成生物工程研究所产品。
1.1.3　三叶青水煎液的制备
取三叶青干燥块根 320 g,捣碎 ,加水 1000 mL
浸泡 0.5 h后再煎煮 2 h, 滤过。滤渣再加水
1000mL,煎煮 1.5 h, 滤过 , 合并滤液并浓缩到
200 mL。制得三叶青水煎液 ,每 1mL含生药 1.6g。
1.1.4　仪器
YS-2000 II半自动生化分析仪(深圳越华科
技发展有限公司);723可见分光光度计(上海光谱
仪器有限公司);80-2B离心机(湖南星科科学仪
器有限公司);HH·W21· 20电热恒温水箱(天津
泰斯特仪器有限公司)。
1.2　方法
1.2.1　实验大鼠分组 、给药及血清的制备
SD大鼠随机分为 5组 ,每组 8只 ,雌雄各半。
分别为正常对照组 、模型对照组 ,灌胃 10 mL/kg生
理盐水;三叶青高 、低剂量治疗组 ,灌胃等容积的三
叶青水煎液 ,浓度分别为1.6g/mL、0.16 g/mL,给药
剂量为 16g/kg和1.6g/kg,后者根据成人用量以 K
折算系数法[ 6]换算确定;阳性对照组 ,灌胃等容积的
联苯双酯 ,质量浓度为 0.000208g/mL,给药剂量为
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0.00208g/kg。以上各组均每天给药 1次 ,连续 6d。
末次给药后 ,除正常对照组外 ,其余大鼠按 2 mL/kg
腹腔注射 CCl4原液 1次 ,建立急性肝损伤模型。该
剂量由预实验确定 ,为文献 [ 7]的 2倍。禁食 24 h
后 ,称体重 ,以 3%戊巴比妥钠按 1mL/kg腹腔注射
麻醉大鼠 ,腹主动脉取血 , 3500r/min离心 10min取
血清 ,待测。
1.2.2　血清生化指标的检测
血清 ALT、AST、ALP活性的检测按试剂盒要
求采用 YS-2000II半自动生化分析仪进行测定 ,
检测方法为连续监测法 ,温度 37 ℃;血清 MDA浓
度及总 SOD活性的检测按试剂盒要求 ,采用 723-
可见分光光度计进行测定 ,检测方法分别为 TBA
(thibabituricacid,硫代巴比妥酸)法和羟胺法。
1.2.3 数据统计
实验数据均采用均数 ±标准差 ( x±s)表示。
各组间均数比较采用单因素方差分析 ,组间比较采
用 t检验。所有统计均用 SPSS11.5统计软件分析。
2　结果
见表 1。
表 1 三叶青水煎液对肝损伤大鼠血清 ALT、AST、ALP、MDA及 SOD的影响 ( x±s)
组 别 ALT(U/L) AST(U/L) ALP(U/L) MDA(nmol/mL) SOD(U/mL)
模型对照组 159.0±15.4 385.4±57.5 282.1±72.9 20.2±2.5 65.7±13.7
正常对照组 54.0±10.1＊＊ 210.9±37.8＊＊ 96.0±31.3＊＊△ 8.0±1.6＊＊△ 161.5±31.5＊＊
低剂量组 80.4±14.9＊＊ 299.0±43.5＊＊ 197.6±34.3＊ 16.4±3.0＊ 102.5±39.2＊
高剂量组 62.9±19.8＊＊ 231.0±14.9＊＊△ 102.0±14.7＊＊△ 9.7±2.2＊＊△ 144.6±29.8＊＊
阳性对照组 71.8±11.7＊＊ 289.0±80.8＊＊ 191.5±48.4＊ 16.1±4.3＊ 117.9±44.1＊
　　注:与模型对照组比较 ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;与阳性对照组比较 △P<0.05
　　由表 1可以看出 ,正常对照组 ALT、AST、ALP
及 MDA水平最低 , SOD活性最高;模型对照组则
相反 ,两组各指标比较具有非常显著性差异 (P<
0.01), 表明急性肝损伤模型复制成功。与模型组
比较 ,三个治疗组 ALT、AST、ALP及 MDA水平均
显著降低 (P<0.05或 P<0.01), SOD活性显著
升高 (P<0.05或 P<0.01)。与阳性对照组比
较 ,三叶青高剂量组 AST、ALP、MDA水平降低显著
(P<0.05)。实验结果表明 ,三叶青有降低肝损伤
大鼠血清酶 ALT、AST、ALP及脂质过氧化产物
MDA水平的作用 ,同时有提高抗过氧化酶 SOD活
性的功能;三叶青高剂量保护肝损伤的效果强于联
苯双酯 。
3　讨论
CCl4肝损伤模型现已广泛用于护肝药物的筛
选和机理研究 ,其机制为:CCl4在肝内经微粒体细
胞色素 P450分解活化 , 形成三氯甲基自由基
(CCl3· )和氯自由基 (Cl· ), 导致肝微粒体的脂
质过氧化。由于脂质过氧化反应增强而抗氧化能
力下降 ,导致自由基生成增加 ,通过氧化细胞膜脂
质 ,使肝细胞结构和功能受到损害[ 8] 。据此 ,本项
实验选择检测 ALT、AST、ALP、MDA及 SOD[ 6]来探
讨三叶青护肝作用的药理机制。
研究表明 ,黄酮类化合物对 CCl4和半乳糖胺
诱导的肝脏毒性具有保护作用 [ 9] ,同时还具有显
著的抗氧化作用 [ 10] 。三叶青由于含有多种黄酮类
化合物 ,并且其所含的黄酮类化合物槲皮素等含有
抗脂质过氧化作用的酚羟基基团[ 11] ,推测其护肝
的主要有效成分可能即为该类黄酮类物质。三叶
青能明显降低肝损伤大鼠血清脂质过氧化产物
MDA的含量 ,为其护肝的分子机制的研究提供了
启示:一方面可能由于所含的酚羟基黄酮类化合物
能直接捕捉 、清除自由基 ,生成自由基中间体 ,阻断
或终止自由基连锁反应链 ,从而阻止或抑制氧自由
基反应和脂质过氧化反应 , 最终抑制 MDA的生
成;另一方面通过提高抗氧化剂 SOD的活性来降
低 MDA的生成。两方面的作用共同减轻肝细胞
的膜性结构的破坏 ,抑制炎症渗出 ,从而降低血清
ALT、AST及 ALP的活性 ,促进肝功能的恢复。高
剂量的三叶青保护损伤肝的作用优于低剂量三叶
青 ,提示三叶青的护肝作用在一定范围内呈剂量依
赖关系 。并且可能反映:三叶青的有效黄酮类化合
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物的抗过氧化能力存在量效关系。
通过 CCl4所致的大鼠肝损伤模型 ,我们初步研
究了三叶青水煎液对大鼠肝损伤的保护作用 。结果
表明 ,该水煎液能明显降低 CCl4所致血清 ALT、AST
及 ALP的升高 ,同时能对抗 CCl4所致的肝脂质过氧
化作用 ,提高肝损伤大鼠抗氧化能力。研究结果提
示 ,三叶青水煎液能提高肝脏的解毒能力 ,对肝损伤
有一定的保护作用;但三叶青作为民间常用的护肝
中药 ,对该药的研究远不如其他护肝中药 ,其护肝作
用的药理机制还有待于进一步深入研究 。
参考文献:
[ 1]李瑛琦 , 陆文超 ,于治国.三叶青的化学成分研究 [ J] .
中草药 , 2003, 34(11):982-983.
[ 2] AbdulL.Flavonols, ellagicacidandanthocyaanidinsin
leavesofsomemalaysianvitaceae[ J] .Malays.J.Sci,
1980, (6):95.
[ 3]刘东 , 鞠建华 , 林耕 , 等.三叶崖爬藤中的新黄酮碳甙
[ J] .植物学报 , 2002, 44(2):227-229.
[ 4]江苏新医学院.中药大辞典(下册)[ M] .上海:上海人
民出版社 , 1977:2123.
[ 5] CaiX.L.AstudyofTetrastigmahemsleyanumonliver
functionsofrabbitbytheapplicationof131I-rosebengal
[ J] .Chin.Tradit.HerbDrugs, 1980, 11(1):38-39.
[ 6]陈奇.中药药理研究方法学 [ M] .北京:人民卫生出版
社 , 2000:726-727.
[ 7]徐叔云 , 卞如濂 , 陈修.药理实验方法学 [ M] .第 3版.
北京:人民卫生出版社 , 2001:1346.
[ 8] RouachH, FataccioliV, GentilM, etal.Effectofchron-
icethanolfeedingonlipidperoxidationandproteinoxida-
tioninrelationtoliverpathology[ J] .Hepatology, 1997,
25(2):351-355.
[ 9] BohmK.H, LotterH, SeligmannO, etal.Antihepato-
toxicC-glycosylflavonesfromtheleavesofAllophylused
ulisvar.edulisandgracilis[ J] .Planta.Med., 1992, 58
(6):544.
[ 10] BudzianowskiJ, PakulskiG, RobakJ.Studiesonantiox-
idativeactivityofsomeC-glycosylflavones[ J] .J.Phar-
macol.Pharm, 1991, 43(5):3952.
[ 11] HusainS.R, CillardJ, CilardP.Hydroxyradicalscav-
engingactivityofflavonoids[ J] .Phytochemistry, 1987,
26(9):2489-2491.
EffectsofTetrastigmatisHemsleyanionthelevelsoffiveserous
biochemistryindexesinhepaticinjuryratsinducedbyCCl4
WuZhaolong, LvJiangming, LiChunyan, PengYingfu
(SchoolofMedicineofJishouUniversity, 416000, Jishou, China)
　　Abstract:Objective:ToresearchtheprotectiveefectsofwaterextractofTetrastigmatisHemsleyani
(WETH)onacutehepaticinjuryinducedbyCCl4 inrats.Methods:40 SDratswererandomlydividedinto
fivegroups, namelythenormalcontrolgroup, themodelcontrolgroup, thehighandlowdosetreatinggroup
andthepositivecontrolgroup.TheywereintragastricalyadministratedwithNS, WETH(1.6 g/mLand
0.16g/mL)andbifendate(0.000208 g/mL)attheequalvolumedose(10 mL/kg)oncedailyforsixdays.
Afterthelastadministration, algroupsexceptthenormalgroupwereintraperitonealyinjectedwithCCl4 stock
solutiontoinduceacutehepaticinjurymodel.Fiveserousbiochemistryindexesweredetected, including
ALT, AST, ALP, MDAandSOD.Results:Comparedwihthemodelgroup, thecontentsofALT, AST, ALP
andMDAremarkablydecreased(P<0.05 orP<0.01), buttheactivityofSODremarkablyimproved
(P<0.05orP<0.01)afteradministrationwithhighandlowdoseofWETH.ThecontentsofAST, ALP
andMDAinhighdosetreatinggroupwereprominentlylowerthanthatinpositivecontrolgroup(P<0.05).
Conclusion:WETHhasprotectiveefectsonacutehepaticinjuryofratsinducedbyCCl4 , theprotectiveefects
ofhighdoseofWETHsurpassthelowdose.
Keywods:TetrastigmatisHemsleyani;waterextract;hepaticinjury;CCl4
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