全 文 ：三叶青抗慢性肝损伤实验研究
张同远 ,倪荷芳＊　(南京中医药大学科技处 ,江苏 南京　210046)
摘要:目的　观察三叶青对慢性肝损伤的保护作用。方法　CCl4 反复多次给药 ,造成大鼠慢性肝损伤 , 检测造模动物血
清ALT、AST、HA、LN 、T-Bili 、TP、ALB 水平及 A/G。结果　三叶青可降低造模大鼠血清 ALT、AST、HA 、LN 及 T-Bili 水平 , 抑
制造模动物血清TP、ALB 水平及 A/ G的下降和提高大鼠存活率。结论　三叶青具有良好的保肝降酶及抗肝纤维化作
用。
关键词:三叶青;慢性肝损伤;肝纤维化
中图号:R282.710.5　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-5005(2008)01-0037-03
　　三叶青为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤
(Tetrastigma Hemsleyanum.Diels et Gilg)的块根或
全草 ,主要分布于长江以南各地 ,全草含有槲皮
素 、山柰酚 、山柰酚-3-新橙皮糖苷等多种黄酮
类化合物[ 1 ,2] , 具有清热解毒 、活血祛风的功
效[ 3] ,民间用于治疗黄疸及急 、慢性肝炎有较好的
疗效 。本研究旨在观察三叶青对大鼠慢性肝损伤
的保护作用。
1　实验材料
1.1　动物
SD大鼠 ,体质量 70 ～ 90 g ,雌雄各半 ,由上海
斯莱克实验动物责任有限公司提供 ,生产许可证:
SCXK(沪)2003-0003;南京中医药大学 ,实验动物
使用许可证:SCXK(苏)2002-0053。
1.2　药品与试剂
三叶青 , 丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒 ,
Vnitech sciences INC ,U.S.A ,批号:103032;天门冬
氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒 , Vnitech sciences
INC ,U.S.A ,批号:101024;白蛋白(ALB)试剂盒 ,
Vnitech sciences INC , USA , 批号:101024;总蛋白
(TP)试剂盒 , Vnitech sciences INC , U.S.A , 批号:
101024;透明质酸(HA)试剂盒(美国 PowerTech公
司),批号:020705;粘连蛋白(Laminin , LN)试剂
盒 ,上海海研医学生物技术中心 ,批号:200512;四
氯化碳(CCl4),化学纯 , 上海长江化工厂 , 批号:
950205;橄榄油 ,化学纯 ,南京化学试剂厂 ,批号:
960806;齐墩果酸粉 ,贵阳制药厂 ,批号:050406 ,
用前以2%吐温-80配置成混悬液 。
1.3　仪器
yital-200 ,全自动生化分析仪 ,荷兰威图科学
仪器公司;奥林巴斯显微镜 ,日本。
2　方法
2.1　分组给药
取健康 SD大鼠 96只 ,雌雄各半 ,随机分成 6
组 ,每组 16只 。6组分为:①正常组:给予等容积
蒸馏水;②模型组:给予等容积蒸馏水;③三叶青
低剂量组 ,给予三叶青 1 g/kg 体质量;④三叶青
中剂量组 ,给予三叶青 2 g/kg 体质量;⑤三叶青
高剂量组 ,给予三叶青 4 g/kg 体质量;⑥阳性对
照组 ,给予齐墩果酸 80 mg/kg 体质量。各组均灌
胃给药 ,每日给药 1次 ,连续给药 8周 。
2.2　大鼠造模及观察指标
于实验 d 1 ,除正常组外 ,其余各组均皮下注
射30%CCl4 橄榄油 ,以后每隔 3 ～ 4 d 皮下注射
CCl4 0.3 mL/kg体质量 ,连续注射3个月 。各组均
于造模第 1个月末开始给药 ,每日 1次 ,连续给药
2个月。于第 3个月末 ,各组动物眼眶取血 ,进行
各项指标检测 。
收稿日期:2007-06-11;修稿日期:2007-08-03
基金项目:江苏省中医药局资助项目(H05067)
作者简介:张同远(1975-),男 ,江苏宿迁人 ,南京中医药大学助理研究员。 ＊通讯作者:025-85811065
—37—南京中医药大学学报 2008 年 1月第 24 卷第 1期JOURNALOF NANJINGTCMUNIVERSITY Vol.24 No.1 Jan.2008
DOI :10.14148/j.issn.1672-0482.2008.01.016
3　结果
3.1　对 CCl4所致慢性肝损伤大鼠存活率的影响
大鼠经 CCl4造成肝损伤后 3个月内 ,各造模
组动物均出现不同程度的死亡 。三叶青 3个剂量
组大鼠存活率均高于模型组 ,其中三叶青高剂量
组大鼠存活率与模型组相比 ,有显著性差异 ,提示
三叶青可以提高造模大鼠的存活率 。结果见表
1。
表 1　三叶青对 CCl4所致慢性肝损伤大鼠存活率的影响
组别 n 剂量/g·kg -1 死亡数/只 存活率(%)
正常组 16 — 0 100.00
模型组 16 — 7 56.25＊＊
三叶青 1组 16 1 4 75.00
三叶青 2组 16 2 3 81.25
三叶青 3组 16 4 2 87.50■
齐墩果酸组 16 80 mg 5 68.75
　　注:与正常组相比 , ＊＊P <0.01;与模型组相比 , ■P <
0.05。
3.2　对大鼠血清ALT 、AST 、T-Bili水平的影响
大鼠经 CCl4造成慢性肝损伤后 ,肝功能出现
明显的异常 ,模型组大鼠血清 AST 、ALT 及 T-Bili
水平均高于正常组 ,与正常组相比 ,均有显著性差
异。三叶青3个剂量均能明显降低造模大鼠的异
常升高的血清AST 、ALT和 T-Bili水平 ,其中高 、中
剂量组大鼠血清 AST 、ALT 及 T-Bili ,与模型组相
比 ,有显著性差异。表明三叶青具有一定的保肝
降酶作用 ,结果见表 2。
3.3　对 CCl4 所致慢性肝损伤大鼠血清总蛋白 、
白蛋白含量 、白蛋白/球蛋白比例的影响
大鼠经 CCl4 造成慢性肝损伤后 ,血清总蛋
白 、白蛋白含量和白蛋白 、球蛋白比例明显下降。
三叶青3个剂量组大鼠血清总蛋白和白蛋白均高
于模型组 ,与模型组相比 ,均有显著性差异。三叶
青高剂量组大鼠血清白蛋白/球蛋白高于模型组 ,
与模型组相比 ,有显著性差异。表明三叶青可阻
止造模大鼠血清总蛋白 、白蛋白的含量下降以及
纠正造模动物血清白蛋白/球蛋白比例失调 ,结果
见表 3。
3.4　对血清 HA 、LN水平的影响
模型组大鼠血清 HA 、LN 含量明显升高。三
叶青高 、中剂量组大鼠血清 HA 和 3个剂量组血
清 LN 含量均低于模型组 ,与模型组相比 ,有显著
性差异 ,表明三叶青具有降低造模大鼠血清 HA 、
LN水平作用。结果见表 4。
表 2　三叶青对 CCl4所致慢性肝损伤大鼠血清ALT、AST、T-Bili水平的影响( x±s)
组别 n 剂量/g·kg-1 AST/U·L-1 ALT/ U·L-1 T-Bili/U·L-1
正常组 16 — 26.8±6.41 8.5±4.2 9.4±3.2
模型组 9 — 247.4±86.1■■ 621.0±167.2■■ 19.2±5.3■■
三叶青 1 组 12 1 231.5±73.5 408.3±110.4 18.6±6.2
三叶青 2 组 13 2 125.6±46.9＊ 369.4±86.6＊ 10.4±7.7＊
三叶青 3 组 14 4 118.4±33.2＊ 357.2±79.4＊＊ 8.4±4.9＊＊
齐墩果酸组 11 80 mg 135.6±44.7＊ 394.5±105.8＊ 10.2±6.6＊
　　　　　注:模型组与正常组相比 , ■■P<0.01;用药各组与模型组相比 , ＊＊P<0.01 , ＊P<0.05。
表 3　三叶青对 CCl4 所致慢性肝损伤大鼠血清 TP、ALB含量及A/G 的影响( x±s)
组别 n 剂量/g·kg-1 TP/ g·L-1 ALB/ U·L-1 A/G
正常组 16 — 81.4±15.3 58.3±14.9 2.5±0.81
模型组 9 — 53.9±11.6■■ 33.5±6.2■ 1.6±0.64■■
三叶青 1 组 12 1 67.2±13.5＊ 46.1±7.3＊ 2.1±0.72
三叶青 2 组 13 2 69.5±12.7＊ 47.0±9.4＊ 2.0±0.69
三叶青 3 组 14 4 72.3±9.8＊ 52.5±8.7＊ 2.4±0.93＊
齐墩果酸组 11 80 mg 69.3±12.1＊ 49.5±9.1＊ 2.3±0.86＊
　　　　　　注:模型组与正常组相比 , ■P<0.05, ■■P<001;用药各组与模型组相比 , ＊P<0.05。
—38— 南京中医药大学学报 2008年 1 月第 24卷第 1 期
表 4　三叶青对 CCl4 所致慢性肝损伤大鼠血清 HA、LN 水平的影响( x±s)
组别 n 剂量/ g·kg-1 HA/μg·L-1 LN/μg·L-1
正常组 16 — 36.1±6.2 29.1±4.9
模型组 9 — 86.1±10.1■■ 69.8±12.4■■
三叶青 1组 12 1 71.2±15.3 44.2±6.9＊
三叶青 2组 13 2 54.1±12.6＊ 43.1±10.3＊
三叶青 3组 14 4 51.6±9.2＊ 49.6±8.2＊
齐墩果酸组 11 80 mg 61.7±11.5 42.3±9.1＊
　　　　　　　　注:与正常组相比 , ■■P<0.01;与模型组相比 , ＊P<0.05。
4　讨论
CCl4 对肝毒性损伤主要是由于经肝细胞微粒
体细胞色素代谢裂解成三氯甲基自由基(CCl3-),
CCl3
-可进一步氧化反应形成具有更强活性的基
团 ,从而产生脂质过氧化作用 ,破坏肝细胞的膜性
结构[ 4 , 5] ,此损伤不断反复 ,继之有肝细胞坏死 、
炎症激活肝脏内 kupffer 细胞 、内皮细胞等 ,使其
释放各种细胞因子 ,细胞因子进一步激活静息状
态的星状细胞 ,使之转化为肌成纤维样细胞(MF-
BLC),MFBLC过度增殖 ,同时大量合成各种细胞
外基质(ECM),过度沉积而导致肝纤维化[ 6] 。本
实验结果显示 CCl4所致慢性肝损伤时 ,大鼠血清
ALT 、AST 、HA 、LN水平均升高 ,TP 、ALB水平和 A/
G均降低。
本研究结果表明 ,三叶青可降低造模大鼠血
清ALT 、AST 、HA 、LN及 T-Bili水平 ,抑制造模动物
血清 TP 、ALB 水平及 A/G 下降和提高大鼠存活
率 ,提示三叶青具有良好的保肝降酶作用。HA
是由间质细胞合成的一种大分子葡萄胺多糖 ,是
结缔组织基质的主要成分 ,是反映内皮细胞功能
和肝硬化程度较为敏感的指标 。其血清测量值改
变与肝纤维化正相关 ,反映已生成的纤维化程度 ,
即肝病变程度。LN是细胞间质的成分之一 ,与肝
纤维化 、肝内炎细胞浸润及肝细胞坏死 、变性程度
呈正相关 ,亦与食管静脉曲张呈显著正相关 。本
研究结果表明三叶青可显著抑制 HA 、LN的异常
增高 ,提示三叶青具有良好的抗肝纤维化的作用。
参考文献:
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(编辑:李伟东)
Experimental Study on Effect of Tetrastigma Hemsleyanum Diels et Gilg in Treating Chronic Hepatic Damage
ZHANG Tong-yuan , NI He-fang
(Department of Scientific Research , Nanjing University of Chinese Medicine , Nanjing , Jiangsu , 210046 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To observe the effect of Tetrastigma Hemsleyanum Diels et Gilg.in treating chronic hepatic damage.
METHOD　Rat chronic hepatic damage was caused by repeated administration of CCl4 , which was used to detect ALT , AST , HA ,
LN , T-Bili , TP , ALB and A/C levels.RESULT　Tetrastigma Hemsleyanum Diels et Gilg could reduce the ALT , AST , HA , LN , and
T-Bili levels in rat serum , inhibit TP , ALB and A/C levels and increase rat survival rate.CONCLUSION　Tetrastigma Hemsleyanum
Diels et Gilg has satisfactory effect to protect the liver , reduce minopherase level and prevent liver fibrosis.
KEY WORDS:Tetrastigma Hemsleyanum Diels et Gilg;chronic hepatic damage;liver fibrosis
—39—张同远 , 等:三叶青抗慢性肝损伤实验研究　第 1期