全 文 ：表 1　桂皮醛线性关系考察表
序号 桂皮醛对照品进样量(μg) 桂皮醛对照品峰面积
1 0.005989 56.5292
2 0.011978 114.709435
3 0.029945 282.12146
4 0.089835 859.846835
5 0.119780 1175.23865
6 0.149725 1505.51282
　　以峰面积(mAU)为纵坐标 , 相应的对照品(μg)为横坐
标 , 绘制标准曲线(见图 3)。
图 3　桂皮醛的标准曲线图
　　结果表明桂皮醛的进样量在 0.005989 ～ 0.149725μg范
围内 , 峰面积积分值与浓度呈良好的线性关系。回归方程为:
y=9989.5093x-12.3818, r=0.9996。
2.6　稳定性试验　取灵源万应茶同一样品溶液 , 在室温下 ,
每隔 2h进样一次 ,测 5次 , 每次 10μL, 测定峰面积 ,测得桂皮
醛 RSD=1.00%(n=5),结果表明桂皮醛在 8h内稳定良好。
结果(见表 2)。
表 2　稳定性试验结果
放置时间(小时) 称样量(g) 桂皮醛峰面积 桂皮醛平均峰面积 RSD(%)
0 10.0724 491.20981
2 10.0724 499.11237 493.475203 1.00
4 10.0724 488.31207
6 10.0724 490.35132
8 10.0724 498.39407
2.7　重复性试验　取同一批样品(20050101), 按 2.2项下的
方法平行操作 6份 , 测得桂皮醛平均含量为 0.0168(mg·
g-1), RSD为 2.12%,表明重现性良好 。
2.8　加样回收率试验　取已知含量的同一批号(20050101)
样品细粉(过二号筛), 采用加样回收试验 , 精密加一定量桂
皮醛对照品 ,按正文 2.2.3项下方法操作 ,按上述色谱条件进
行测定 , 并计算回收率 , 取得了满意的回收率 , 表明该方法可
行。结果(见表 4)。
表 4　回收率测定结果
NO. 样品重量(g)
样品中含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
1 5.3280 0.0895 0.07190.1606 99.91
2 5.2924 0.0889 0.07190.1608 99.98
3 5.1106 0.0859 0.07190.1559 97.49 99.09 1.26
4 5.1683 0.0868 0.07190.1581 99.20
5 5.1598 0.0867 0.07190.1584 99.84
2.9　样品的测定结果　按正文方法测定 3批样品 , 3个批号
20050101, 20050201, 20050301的桂皮醛含量(mg· g-1)分别
为 0.0168、 0.0160、0.0180,平均含量为 0.0169。
3　讨论
3.1　供试品溶液的制备曾参考杨松 、靳宝峰 〔2〕等人用乙醇超
声提取。由于桂皮醛不稳定 , 所以在供试品溶液制备时 ,在浸
渍过程中应放置在阴凉处。
3.2　肉桂中指标性成分主要有桂皮醛 ,但研究发现 , 桂皮醛
性质比较活泼 , 不够稳定 , 故前处理时 , 本方法中温度控制在
25℃以下 , 超声时间控制在 25min, 减少前处理的操作程序 ,
以减少损失。
3.3　在含量测定实验中 , 曾采用乙腈-水(35∶65)、乙腈-水
(33∶67)、乙腈-0.1%磷酸(32∶68)为流动相进行色谱分析 , 结
果表明 , 桂皮醛在流动相为乙腈-水(33∶67)时 ,分离效果好 ,
峰形较理想 , 故选择乙腈-水(33∶67)为流动相 。
参考文献
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2005, 17(6):72-73.
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中桂皮醛和桂皮酸含量〔J〕.中成药 , 2002, 24(6):421-423.
反相高效液相色谱法测定青果颗粒中没食子酸的含量
刘舜慧 1 ,吴春敏 2(1.福建中医学院药学系 福州 350003;2.福建省药品检验所 福州 350001)
摘要:目的　建立青果颗粒中没食子酸的含量测定方法。方法　采用 HypersilBDSC18色谱柱(250mm×4.6mm, 5μm), 甲醇 -0.05%磷酸溶
液(5∶95)为流动相 ,检测波长为 220nm。结果　没食子酸在 4.0688 ～ 203.4400μg之间有良好的线性关系。 平均回收率为 100.41%(n=6),
RSD为 1.03%。结论　本法操作简便 、灵敏 、准确 、重复性好 ,可用于青果颗粒的质量控制。
关键词:青果颗粒;没食子酸;反相高效液相色谱
中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1006-3765(2008)-01-0030-03
·30·
海峡药学　2008年　第 20卷 第 1期
DeterminationofgalicacidinQingguogranulesbyRP-HPLC
LIUShun-hui1 , WUChun-min2 (1.DepartmentofPharmacy, FujianColegeofTraditonalChineseMedi-
cine, Fuzhou350003, China;2.FujianInstituteofDrugControl, Fujian, Fuzhou, 350001, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　TodevelopamethodfordeterminingofgalicacidinQingguogranules.METHODS
　 HypersilBDSC18 column(250mm×4.6mm×5μm)wasusedwithmethanol-0.05%phosphonicacid(5∶95)
asmobilephase, detectionwavelengthat220nm.RESULTS　Thelinerrangewas4.0688 ～ 203.44004μg·mL-1
forgalicacid.Theaveragerecoveryratewas100.41% (n=6), withRSD1.03%.CONCLUSION　Themethod
wassimple, sensitiveandaccuratewithgoodreproducibility.ThismethodisavailableforqualitycontrolofQingguo
granules.
KEYWORDS:Qingguogranules;Gallicacid;RP-HPLC
　　青果为橄榄科植物橄榄 Canariumalbum(Lour.)Rae-
usch.的果实 , 主产于广东 、 广西 、 福建 、 四川等地。本品
味甘酸 、 性平 , 归肺 、 胃二经 , 临床上常用于咽喉疾患等的
治疗 , 具有清热利咽 、 生津 、 解毒的功效 〔1〕。没食子酸为
青果中有效成分之一 , 具有抗 HBsAg的作用 〔2〕。在参考有
关文献的基础上 〔3, 4〕 , 本方法采用反相高效液相色谱法测定
青果颗粒中没食子酸的含量 , 并进行方法学考察 , 取得满意
的结果 , 可用于青果颗粒的质量控制。
1　仪器与试剂
1.1　仪器　Agilent-1100高效液相色谱仪 , 包括:真空脱气
机 , 四元梯度泵 , 自动进样器 , 二极管阵列检测器 ,
Ver08.01-Chemistation色谱工作站 (美国 Agilent公司),
Simplicity超纯水器 (Milipore)。
1.2　试药　甲醇为色谱纯;水为超纯水;其他试剂均为分
析纯。没食子酸对照品 (中国药品生物制品检定所 批号:
110831-200302供含量测定用)。
2　实验方法与结果
2.1　样品溶液的制备
2.1.1　对照品溶液的制备:精密称取常温减压干燥 12h的
没食子酸对照品适量 , 加甲醇制成每 1mL含 1mg的溶液 ,
精密吸取 2mL置 100mL量瓶中 , 加 40%甲醇溶液制成每
1mL含 20μg的溶液。
2.1.2　供试品溶液的制备:取青果颗粒约 2g, 精密称定 ,
置具塞锥形瓶中 , 精密加入 80%甲醇溶液 50mL, 称定重
量 , 超声处理 30min, 放冷 , 再称定重量 , 用 80%甲醇溶液
补足减失的重量 , 滤过 , 取续滤液 5mL至 10mL量瓶中 , 用
水稀释至刻度 , 摇匀 , 滤过 , 取续滤液过 0.45μm微孔滤
膜 , 即得。
2.2　色谱条件　色谱柱:HypersilBDSC
18
色谱柱 (250mm
×4.6mm, 5μm);流动相:甲醇 -0.05%磷酸溶液 (5∶
95);检测波长:220nm;体积流量:1mL· min-1;进样量:
10μL。在上述色谱条件下 , 样品溶液色谱图中未见其他组
分和辅料对测定组分没食子酸干扰 , 结果 (见图 1)。
图 1　没食子酸对照品 (A)、 青果颗粒 (B)、
缺青果阴性样品 (C)的 HPLC图谱
2.3　线性关系考察　精密称取常温减压干燥 12h的没食子
酸对照品适量 , 加甲醇溶解 , 制成每 1mL含 1.0172mg的溶
液。精密吸取上述溶液 0.1、 0.2、 0.4、 0.8、 1、 2、 5mL置
25mL量瓶中 , 加 40%甲醇溶液稀释至刻度 , 摇匀 , 得到浓
度分别为 4.0688μg· mL-1 、 8.1376μg· mL-1 、 16.2752μg
· mL-1、 32.5504μg· mL-1、 40.688μg· mL-1 、 81.376μg
· mL-1、 203.4400μg· mL-1的溶液。分别精密吸取上述溶
液各 10μL注入液相色谱仪 , 以峰面积 (Y)对进样量 X
·31·
StraitPharmaceuticalJournalVol20 No.1 2008
(μg)回归 , 得回归方程 Y=78.443X+31.364, r=1。没食
子酸量在 4.0688μg· mL-1 ～ 203.4400μg· mL-1与峰面积呈
良好的线性关系。
2.4　方法学考察
2.4.1　准确度试验:精密称取已知含量 0.94mg· g-1的青
果颗粒 6 份 , 每份约 1g, 精密称定 , 分别精密加入
1.1720mg· mL-1没食子酸对照品溶液 1mL, 照 “ 2.1.2” 项
下方法操作制备所需溶液 , 按上述高效液相色谱条件测定 ,
并计算回收率。结果没食子酸的平均回收率为 100.41%。
测定结果 (见表 1)。
2.4.2　重复性试验:取同一批青果颗粒样品 6份 , 每份约
2g, 分别精密称定 , 照 “ 2.1.2” 项下方法制备供试品溶液 ,
按上述高效液相色谱条件测定 , 结果青果颗粒中没食子酸平
均含量为 0.94mg· g-1 , RSD为 1.43%, 表明该法具有良好
的重现性。
2.4.3　稳定性试验:取重复性试验项下的样品 , 放置 0、
4、 6、 8、 10、 12h, 测定峰面积 , 没食子酸峰面积的 RSD
为 0.16%, 结果表明样品溶液放置 12h稳定。
表 1　没食子酸回收率测定结果
样品中含量(mg) 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均值(%) RSD(%)
0.9695 1.9792 99.26
0.9455 1.9770 101.40
0.9508 1.0172 1.9599 99.20 100.41 1.03
0.9883 2.0224 101.66
0.9659 1.9897 100.65
0.9420 1.9622 100.30
2.4.4　耐用性试验:①流动相比例考察:取重复性项下的
样品 , 分别以甲醇 -0.05%磷酸溶液 (4:96)、 (5:95)、
(6:94)为流动相 , 测定峰面积 , 结果上述条件实验分离
度均符合要求。没食子酸含量 RSD为 1.84%。 ②色谱柱考
察:取重复性项下的样品 , 分别采用大连依利特 Hypersil
ODSC18色谱柱 (250mm×4.6mm, 5μm)、 YMC-packODS-A
色谱柱 (250mm×4.6mm, 5μm)和 PhenomenexDescLuna
色谱柱 (250mm×4.6mm, 5μm)进行测定 , 结果上述条件
实验分离度均符合要求。没食子酸含量 RSD为 1.62%。
2.5　样品测定　取 3批青果颗粒 , 制备供试品溶液 , 进行
测定 , 结果 3个批号:0060601、 20060602、 20060603的没
食子酸 , 含量 (mg· g-1)分别为 0.94、 0.94、 094。
3　讨论
3.1　检测指标的选择　据文献报道 , 青果含游离型没食子
酸和结合型没食子酸即没食子酸鞣质 , 本次实验欲采用酸水
解的方法 , 将结合型没食子酸水解成游离型没食子酸进行检
测。经实验发现 , 青果药材经过酸水解后 , 测得的没食子酸
含量是 80%甲醇回流提取的 4.5倍 , 但是青果颗粒采用同
样方法 , 没食子酸的含量仅为 80%甲醇回流的 15%。进一
步实验发现 , 青果颗粒酸水解时 , 颗粒中的蔗糖会影响没食
子酸的含量 , 含糖量越大 , 水解后没食子酸的含量越低。 分
析原因 , 可能为蔗糖被酸水解后产生等量的 D-葡萄糖和 D-
果糖 , 水解生成的单糖与没食子酸酚羟基作用发生反应 , 导
致没食子酸的浓度降低。
3.2　实验条件的选择
3.2.1　溶剂的选择:分别用水 、 甲醇及乙醇回流提取 1h
(n=3), 结果表明甲醇提取没食子酸含量较高 , 因此选择
甲醇提取。
3.2.2　溶剂浓度的选择:分别用 70%、 80%、 90%甲醇及
甲醇回流提取 1h(n=4), 结果表明 80%甲醇溶液提取的没
食子酸含量比 90%甲醇稍高 , 与 70%甲醇提取的相差不多 ,
但是 80%甲醇溶液提取出的杂质少些 , 因此选择 80%甲醇
溶液为提取溶剂。
3.2.3　提取方法的选择:分别采用 80%甲醇超声及回流 1h
(n=2), 结果表明超声提取没食子酸的含量较高 , 因此选
择超声为提取方法。
3.2.4　提取时间的选择:采用 80%甲醇溶液分别超声 10、
20、 30、 60min(n=4), 结果表明 , 当提取时间超过 30min
时 , 没食子酸含量趋于稳定 , 因此选择提取时间为 30min。
3.2.5　不同溶剂用量的选择:分别采用 50、 100、 150mL提
取 , 结果表明溶剂用量为 50mL与 150mL没食子酸含量相差
不大 , 因此选用 50mL提取。
3.3　小结　本实验所建立的检测方法简便 , 灵敏度高 , 准
确性好 , 可以用于控制青果颗粒中没食子酸的含量。
参考文献
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海峡药学　2008年　第 20卷 第 1期