全 文 ：ApproachontheIndustrializedProductionofShoyuFrom
CerevisiaeWasteYeastbyDoubleEnzyme
LIUZhen-yang,TIANGui-zhi,LIXiu-mei,WANGHui-hong
(AappliedtechnicalacademyofNortheastDianLiUniversity,132012Jilin,China)
Abstract:withcerevisiaewasteyeastaskeyrawmaterial,weintroduceonewaytoproduceshoyubyaddingantalzymetodissolveyeastand
maltrootletsenzymetodegradeRNA.Wegotthisonthebasisofexperiments.Inthisarticle,fromthedesignedexperiments,wedescribe
themainfacilitiesandshoweconomicsanalysisintheprogressofshoyuproductionfromcerevisiaewasteyeast.
Keywords:cerevisiaewasteyeast;maltrootletsenzyme;shoyu;economicsanalysis
利用Biolog微生物自动分析系统对两株啤酒
酵母的鉴定和比较
胡桂林 1,王德良*2,段开红 1,陈利娜 1
(1.内蒙古农业大学生物工程学院,呼和浩特010018;2.中国食品发酵工业研究院,北京100027)
摘 要:利用 Biolog微生物自动分析系统对两家大型啤酒厂生产用酵母进行鉴定,并比较了它们在碳源利用
方面的差异性。
关键词:Biolog微生物自动分析系统;酵母;鉴定
中图分类号:TS261.11;TS207.4 文献标识码:
Biolog微生物自动分析系统是美国 Biolog公司从 1989
年开始推出的一套微生物鉴定系统,发展到现在已经能鉴定
包括细菌、酵母、丝状真菌在内的近2000种微生物,其中酵母
菌有52个属,267个种。与其他鉴定系统相比,Biolog微生物
自动分析系统能利用计算机进行数据分析,自动化和标准化
程度高,大大简化了鉴定程序,具有数据库广、鉴定范围大、鉴
定快速等优点[1~2],目前已成为国际上酵母菌多项分类鉴定常
用的技术手段[3~4]。
酵母被称作啤酒酿造的“灵魂”[5],可见其在啤酒酿造中的
作用。不同生产厂家的啤酒,其口感并不完全相同,除受原料、
酿造用水、工艺的影响外,酵母也起到了不可忽视的作用。本
文用Biolog微生物自动分析系统对两家大型啤酒厂生产用酵
母进行了鉴定,并比较了它们在碳源利用方面的差异性。
1材料与方法
1.1测试菌株
B和G,分别来源于国内两家大型啤酒厂。
1.2材料
无菌水;无菌棉签、无菌枪头(Biolog公司);8头电动移液
器(Biolog公司);浊度计(Biolog公司);YT(Biolog公司);11°P
麦汁琼脂培养基(自制);BUY培养基(Biolog公司);
BiologMicrostation(4.2版)系统。
1.3实验方法
1.3.1样品的纯化与制备 将酵母菌株 B和 G在 11°P麦汁琼
脂培养基上划线分离,28℃条件下培养 48~72h。挑选单菌落
在BUY培养基上划线培养,28℃条件下培养48h左右。
1.3.2 样品的鉴定方法
1.3.2.1浊度调整 在关机状态下调整读数为0,打开电源,用无
菌水调整至读数为 100%,再用 YT浊度标准管调整读数至
47%。
1.3.2.2 菌悬液制备 取无菌棉签用无菌水蘸湿,在平板表面
轻轻滚动蘸取菌体,注意不要带出培养基,沿着接种液管内壁
转动棉签,使菌体附着在内壁上,同时把菌体打散,倾斜接种
液管使菌体均匀分散在接种液中,通过加菌体或加无菌水不
断调整浊度大小,最终使浊度值达到47%±3%。
1.3.2.3 接种微平板 用8头电动移液器将菌悬液分别加在鉴
定板的各孔内,每孔100μL,共96孔。
1.3.2.4 培养 盖上鉴定板盖,标上菌株号放置在一个大小适
宜的托盘中,并保持一定的湿度,26℃条件下培养 24h,48h和
72h。
1.3.2.5读取数据 取出鉴定微平板放置在读数仪上,计算机
收稿日期:2007-06-12
作者简介:胡桂林(1982-),男,内蒙古呼和浩特人,硕士研究生,研究
方向:发酵工程。
*通讯作者:王德良。
第34卷 第5期
2007年 9月
酿 酒
LIQUOR MAKING
Vol.34.№.5
Sep.,2007
文章编号:1002-8110(2007)05-0064-02
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读取数据,自动检索数据库,按照可能性大小给出 10个 ID名
称。
2 结果与讨论
2.1B和G酵母的鉴定结果
Biolog系统鉴定结果主要有3个参数,即可能性(Probability,
PROB)、相似性(Similarity,SIM)和位距(Distance,DIST),其中
SIM值和 DIST值是两个重要参数,DIST值表示测试结果与
数据库相应数据条的位置,SIM值表示测试结果与数据库相
应数据条的相似程度。Biolog系统规定:酵母菌的SIM值在培
养 24h时应≥0.75,培养 48h或 72h时,SIM值应≥0.50,系统
自动给出鉴定结果为种名。DIST值≤5.0,SIM值越接近1.00,
表明鉴定结果的可靠性越高。当SIM值小于 0.5,但鉴定结果
中属名相同的结果的SIM值之和大于0.5时,自动给出的鉴定
结果为属名。B和G酵母的鉴定结果见表1。
表1 Biolog系统对B和G酵母的鉴定结果
注:培养时间从接种到微平板开始算起。
由表1可以看出,B和G可以鉴定到种名,鉴定结果显示:
B为Zygosaccharomycescidri,G为Saccharomycesboulardi。
2.2酵母利用碳源分析
Biolog酵母菌鉴定系统通过在一块含有多种脱水碳源的
96孔微平板上进行氧化实验和同化实验,其中 A~C行基于
显色反应原理,D~H行基于浊度差异原理。酵母菌在利用碳
源进行呼吸时,会将 A~C行内的四唑紫(TetrozoliumViolet,
TV)染色剂从无色还原成紫色,同时 D~H行的碳源进行生长
时,细胞浊度增加,从而在鉴定微平板上形成该菌株特征性的
反应模式或“指纹图谱”。通过纤维光学读取设备—读数仪来
读取颜色和浊度变化,由计算机通过概率最大模拟法将反应
模式或“指纹图谱”与数据库中的 267种酵母菌的图谱进行最
大限度匹配,可以在瞬间得到鉴定结果,确定所分析菌株的属
名或种名。微平板反应结果(分析不同点)见表2和表3。
表2 培养时间为48h的碳源利用情况
注:-表示阴性,+表示阳性。
3 结论
3.148h时 G菌株对 D-蜜二糖、水苏糖、D-海藻糖、吐温
80、D-蜜三糖 /棉子糖、松二糖、苦杏仁苷、D-蜜二糖和 D-
木糖/戊醛糖的利用高于B菌株,B菌株对 D-阿洛酮糖的利
用高于G菌株。
3.272h时B菌株开始利用D-蜜二糖、苦杏仁苷、D-蜜二糖和
D-木糖/戊醛糖和麦芽糖醇,而G菌株不能利用麦芽糖醇。
3.3菌种对碳源的利用情况随时间有变化。
[参考文献]
[1]王丽敏,李军,胡小松.苹果原料中酵母菌的分离鉴定[J].中国农业大
学学报,2004,9(4):14-17
[2]冯瑞华,樊蕙,李力,葛诚.Biolog细菌自动鉴定系统的应用[J].微生物
学杂志,2000,20(2):36-38
[3]Shan-HuaYang,Pi-HanWang.ThreespeciesofyeastsnewstoTaiwan
[J].Taiwania,2003,48(2):99-105
[4]程池,李金霞,姚栗,胡海蓉.Biolog微生物自动分析系统在酿酒酵
母菌鉴定中的应用[J].酿酒科技,2006,(7):58-61
[5]于娓娉,林永贤,曹伟峰,贾士儒.不同大小酵母细胞对啤酒发酵的
影响[J].酿酒,2006,33(6):73-77
IdentificationandCompareofYeastbyBiologMicrobialIdentificationSystem
HUGui-lin1,WANGDe-liang2,DUANKai-hong1,CHENLi-na1
(1.BioengineeringColegeofInnerMongoliaAgriculturalUniversity,Hohhot010018,China;
2.ChinaNationalInstituteofFoodandFermentationIndustries,Beijing100027,China)
Abstract:InthistexttwopiecesofyeastcomingfromtwobigbrewerieshavebeenidentifiedbyBiologMicrobialIdentificationsystem,and
thediferenceoftheyeastreferedaboveinusingcarbonsourcehasalsobeencompared.
Keywords:BiologMicrobialIdentificationsystem,yeast,identification
菌株名
B
G
鉴定结果
Zygosaccharomycescidri
Zygosaccharomycescidri
Saccharomycesboulardi
Saccharomycesboulardi
PROB
94
98
99
95
SIM
0.87
0.86
0.84
0.78
DIST
1.00
1.87
2.18
2.74
培养时间/h
48
72
48
72
孔号
B6
B9
B11
C4
C12
E6
E8
E9
E11
F10
H8
B
-
边缘值
边缘值
边缘值
-
边缘值
边缘值
边缘值
边缘值
-
-
孔号
B6
E6
F10
G1
H8
碳 源
D-蜜二糖
D-蜜二糖
苦杏仁苷
麦芽糖醇
D-蜜二糖和D-木糖/戊醛糖
B
+
+
边缘值
边缘值
+
G
+
+
边缘值
-
+
表3 培养时间为72h的碳源利用情况
碳 源
D-蜜二糖
水苏糖
D-海藻糖
D-阿洛酮糖
吐温80
D-蜜二糖
D-蜜三糖/棉子糖
水苏糖
松二糖
苦杏仁苷
D-蜜二糖和D-木糖/戊醛糖
G
+
+
+
-
边缘值
+
+
+
+
边缘值
+
注:-表示阴性,+表示阳性。
第五期 2007酿 酒
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