全 文 ：复方贞芩肺宁胶囊药材的提取工艺及制剂中
齐墩果酸的含量测定研究
容露萍1，陈奕伸2，廖华卫3，万正兰2*
(1. 广州市胸科医院，广东 广州 510095;2. 中山大学附属第五医院，广东 珠海 519000;3. 广东药学院中
药学院，广东 广州 510006)
摘要 目的:优选复方贞芩肺宁胶囊中药材的提取工艺并建立以高效液相色谱法测定复方贞芩肺宁胶囊中齐
墩果酸含量的方法。方法:以正交试验设计法优选药材的提取工艺。以 Kromasil C18(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)为
色谱柱，流动相为甲醇-0. 3%三乙胺溶液(80∶ 20) ，检测波长为 210 nm，流速为 1. 0 mL /min，柱温为 30℃，进样量为
25 μL。结果:按照 8 倍量 70%乙醇，提取 3 次，每次 0. 5 h的工艺进行提取。齐墩果酸在 59. 68 ～ 596. 8 μg /mL范
围内进样量与峰面积呈良好的线性关系(r = 0. 9997) ，平均回收率为 99. 79%，ＲSD为 0. 5%。结论:该提取工艺合
理可行，含量测定方法简便、准确、专属性强，可用于该制剂的含量测定。
关键词 正交试验法;复方贞芩肺宁胶囊;高效液相色谱法;齐墩果酸
中图分类号:Ｒ286 /Ｒ284 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)08-1340-04
Determination of Oleanolic Acid in Fufang Zhenqin Feining Capsules by ＲP-HPLC
ＲONG Lu-ping1，CHEN Yi-shen2，LIAO Hua-wei3，WAN Zheng-lan2
(1. Guangzhou Chest Hospital，Guangzhou 510095，China;2. The Fifth Affiliated Hospital，Sun Yat-sen University，Zhuhai 519000，
China;3. School of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China)
Abstract Objective:To investigate the optimal technology of extraction of fufang zhenqin feining capsules and establish a method
for determination its oleanolic acid . Methods:Orthogonal test was employed for selecting the optimum extraction technology by the in-
dex of the content of oleanolic acid in extraction. HPLC was performed on a C18(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)column using methanol-
0. 3% triethylamine solution(80∶ 20)as the mobile phase at a flow rate of 1ml /min. The detection wavelength was set at 210 nm. The
column temperature was 30℃ and the injection size was 25 μL. Ｒesults:The optimum extraction technology was as follows:the concer-
tration of alcohol was 70%，the ratio of solid /material was 8∶ 1，extracting 3 times with half an hour for each time. The linear range of
oleanolic acid was 59. 68 ～ 596. 8 μg /ml(r = 0. 9997) ，the average recovery was 99. 79%(ＲSD = 0. 5%). Conclusion:The considera-
ble extraction rate of active components in the drugs is achieved by applying the selected technology，and the simple method is fit for
production. The established HPLC method is simple，accurate，special and can be used for the quality control of fufang zhenqin feining
capsules.
Key words Orthogonal test;Fufang zhenqin feining capsules;HPLC;Oleanolic acid
收稿日期:2013-02-27
* 通讯作者:万正兰，Tel:0756-2528595。
肺结核俗称“痨病”(也称为“肺痨”)、“白疫”，
是结核杆菌侵入体内引起感染的一种慢性和缓发的
传染病。一年四季都可以发病，15 岁到 35 岁的青
少年是结核病的高发峰年龄。潜伏期 4 ～ 8 w。其
中 80%发生在肺部，其他部位(颈淋巴、脑膜、腹膜、
肠、皮肤、骨骼)也可继发感染。复方贞芩肺宁汤剂
是临床经验方，主要用于肺结核疾病的治疗。处方中
主要由女贞子、旱莲草、黄芩、地骨皮、百合等 7 种药
材组方而成。其胶囊剂主要系经过汤剂药材的提取、
干燥、浓缩、成型工艺制备而成。其中女贞子是处方
中的君药，齐墩果酸是其有效成分。本文采用正交设
计试验法优选其提取工艺，并采用 HPLC法测定复方
贞芩肺宁胶囊中齐墩果酸的含量。现报道如下。
1 仪器与试药
Waters2695-2996 型高效液相色谱仪(美国 Wa-
ters公司)。
齐墩果酸对照品(中国食品药品检定研究院，
含量测定用，批号:110709-200505) ;复方贞芩肺宁
胶囊(自制，规格:含女贞子药材 5 g /粒，含齐墩果
酸 60 mg /粒，批号:20130401、20130402、20130403、
20130404) ;甲醇、乙腈(色谱纯) ，其他试剂为分析
纯。
2 方法与结果
2. 1 正交设计试验法优选药材的提取工艺
2. 1. 1 色谱条件及系统适应性试验〔1，2〕:色谱柱:
Kromasil C18(250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ;流动相:甲
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醇-0. 3%的三乙胺水溶液(使用冰醋酸调 pH 至
6. 0) (80 ∶ 20) ;流速:1. 0 mL /min;检测波长:210
nm;柱温:30℃;进样量:25 μL。在此条件下，样品
中齐墩果酸峰能达到基线分离，理论板数按齐墩果
酸峰计应不低于 2 500。
2. 1. 2 对照品溶液的制备:精密称取齐墩果酸对
照品 59. 68 mg 置 50 mL 量瓶中，加流动相溶解，并
稀释至刻度，得到 1. 1936 mg /mL 的齐墩果酸对照
品储备液。再精密移取 5 mL 对照品储备液置 10
mL量瓶中，得到 0. 5968 mg /mL 的齐墩果酸对照品
溶液。
2. 1. 3 供试品溶液的制备:按正交设计试验列号
各条件分别回流提取，滤过，合并滤液，各定容至
500 mL，作为样品溶液。精密移取各样品溶液 50
mL，置蒸发皿中，蒸干，残渣加流动相溶解，定容至
25 mL，作为供试品溶液。
2. 1. 4 阴性对照溶液的制备:按处方量称取除女
贞子外的其余药材进行提取，按“2. 1. 3”项下制备
阴性对照溶液。
2. 1. 5 线性关系考察:精密量取齐墩果酸对照品
储备液(0. 5968 mg /mL)1、2、3、4、5、10 mL 置 10
mL量瓶中，加流动相稀释并定容至刻度，摇匀，滤
过，精密移取 25 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条
件测定齐墩果酸色谱峰面积，以齐墩果酸浓度(X)
为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归，得
回归方程:Y = 404 244. 3X － 0. 8(r = 0. 9997)。结果
表明，齐墩果酸在 59. 68 ～ 596. 8 μg /mL 浓度范围
内有良好的线性关系。
2. 2 单因素考察试验
2. 2. 1 提取时间的考察:按处方量精密称取各个
药材，按照 8 倍量 70%乙醇，提取 1 次，提取时间分
别是 0. 5、1、1. 5 h的工艺分别进行回流提取，滤过，
合并滤液，各定容至 1 000 mL，作为样品溶液。精密
移取各样品溶液 50 mL，置蒸发皿中，蒸干，残渣加
流动相溶解，定容至 100 mL，作为供试品溶液。测
定其中齐墩果酸的含量，结果提取时间分别是 0. 5、
1、1. 5 h 时齐墩果酸的含量分别是 66. 2、70. 1、74. 3
mg /g，具有较大差异。表明在正交试验中可考察此
三水平对齐墩果酸得率的影响。
2. 2. 2 提取溶剂的考察:按处方量精密称取各个
药材，按照乙醇浓度为 50%、70%、90%，用量是 8
倍量，提取 1 次，提取时间是 1. 5 h 的工艺分别进行
回流提取，滤过，合并滤液，各定容至 1 000 mL，作为
样品溶液。精密移取各样品溶液 50 mL，置蒸发皿
中，蒸干，残渣加流动相溶解，定容至 100 mL，作为
供试品溶液。测定其中齐墩果酸的含量，结果乙醇
浓度为 50%、70%、90%时齐墩果酸的含量分别是
57. 2、74. 1、75. 1 mg /g，具有明显差异。表明在正交
试验中可考察此三水平对齐墩果酸得率的影响。
2. 2. 3 提取溶剂用量的考察:按处方量精密称取
各个药材，按照乙醇浓度为 70%，用量分别是 4 倍、
6 倍、8 倍量，提取 1 次，提取时间是 1. 5 h 的工艺分
别进行回流提取，滤过，合并滤液，各定容至 1 000
mL，作为样品溶液。精密移取各样品溶液 50 mL，置
蒸发皿中，蒸干，残渣加流动相溶解，定容至 100
mL，作为供试品溶液。测定其中齐墩果酸的含量，
结果提取溶剂分别是 4 倍、6 倍、8 倍量时齐墩果酸
的含量分别是 56. 2、64. 1、75. 3 mg /g，具有明显差
异。表明在正交试验中可考察此三水平对齐墩果酸
得率的影响。
2. 2. 4 提取次数的考察:精密按处方量称取各个
药材，按照 8 倍量 70%乙醇，提取 1 次、2 次、3 次，
提取时间是 1. 5 h 的工艺分别进行回流提取，滤过，
合并滤液，各定容至 1 000 mL，作为样品溶液。精密
移取各样品溶液 50 mL，置蒸发皿中，蒸干，残渣加
流动相溶解，定容至 100 mL，作为供试品溶液。测
定其中齐墩果酸的含量，结果提取次数分别是 1 次、
2 次、3 次时齐墩果酸的含量分别是 46. 2、65. 3、
78. 6 mg /g，具有显著差异。表明在正交试验中可考
察此三水平对齐墩果酸得率的影响。
2. 3 正交试验设计与结果
2. 3. 1 正交试验设计:本文采用 L9(3
4)正交试
验，对影响提取效率的乙醇浓度、乙醇用量、提取时
间、提取次数等因素进行考察。实验设计见表 1。
按处方量精密称取各个药材，按试验列号各条件分
别回流提取，滤过，合并滤液，各定容至 1 000 mL，作
为样品溶液。精密移取各样品溶液 50 mL，置蒸发
皿中，蒸干，残渣加流动相溶解，定容至 100 mL，作
为供试品溶液。按照“2. 1. 1”项下条件测定齐墩果
酸的含量，结果见表 2，方差分析见表 3。
表 1 因素水平表
水平
A乙醇浓度
/%
B乙醇用量
/倍
C提取时间
/h
D提取次数
/次
1 50 4 0. 5 1
2 70 6 1. 0 2
3 90 8 1. 5 3
2. 3. 2 结果分析:由直观分析可知较优的提取工
艺是 A2B3C1D3。由方差分析结果可知，提取次数对
提取效果有显著差异，比较各因素的极差值可以看
出，影响提取效果的因素顺序为 D ＞ B ＞ A ＞ C。综
·1431·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 8 期 2013 年 8 月
合分析结果，选择 8 倍量 70%乙醇，提取 3 次，每次
0. 5 h为较优的提取工艺条件。
表 2 L9(3
4)正交试验结果
试验号 A B C D
齐墩果
酸含量 /
(mg /g)
1 1 1 1 1 44. 84
2 1 2 2 2 60. 23
3 1 3 3 3 78. 71
4 2 1 2 3 72. 31
5 2 2 3 1 50. 16
6 2 3 1 2 82. 49
7 3 1 3 2 68. 32
8 3 2 1 3 72. 14
9 3 3 2 1 56. 55
Ⅰj 61. 260 61. 823 66. 490 50. 517
Ⅱj 68. 320 60. 843 63. 030 70. 347
Ⅲj 65. 670 72. 583 65. 730 74. 387
Ｒj 7. 060 11. 740 3. 460 23. 870
表 3 方差分析
方差来源 离均差平方和 自由度 F值 显著性检验
A 76. 314 2 3. 847
B 254. 566 2 12. 832
C 19. 839 2 1. 000
D 979. 327 2 49. 364 P ＜ 0. 05
注:F0. 05(2，2)= 19
2. 3. 3 验 证 试 验:称 取 药 材，按 较 优 工 艺
A2B3C1D3 提取，并测定齐墩果酸的含量。即按照 8
倍量 70%乙醇，提取 3 次，每次 0. 5 h的工艺进行提
取，同时比较乙醇浓度为 70%、用量为 9 倍量，提取
4 次，每次 0. 5 h的提取效果。经验证，此两种工艺
能提取出的齐墩果酸分别是 84. 61、85. 12 mg /g，转
移率分别达 96. 8%、97. 3%，两者无显著差异。表
明此提取工艺合理可行、稳定。即按照乙醇浓度为
70%、用量为 8 倍量，提取 3 次，每次 0. 5 h 的工艺
进行提取。
2. 4 复方贞芩肺宁胶囊中齐墩果酸的含量测定
2. 4. 1 供试品溶液的制备:取复方贞芩肺宁胶囊
20 粒，倾出内容物，精密称定，研细，精密称取适量
(约相当于齐墩果酸 60 mg) ，置 100 mL 量瓶中，加
流动相 50 mL 超声 15 min，溶解并定容至刻度，摇
匀，滤过，即得供试品溶液。
2. 4. 2 阴性样品溶液的制备:取处方除女贞子的
其余药材，按复方贞芩肺宁胶囊制备工艺制得空白
胶囊，再按“2. 4. 1”项下方法制得阴性样品溶液。
2. 4. 3 专属性试验:照上述色谱条件，取上述 3 种
溶液，分别注入液相色谱仪，测定辅料、空白胶囊的
阴性样品溶液在主药出峰的保留时间处是否出峰。
结果显示，阴性溶液在齐墩果酸保留时间处并未出
峰，表明供试品色谱在与对照品色谱相应位置上，有
一相同的色谱峰，而阴性供试液在此保留时间内无
干扰，可达基线分离。表明此法专属性强。
2. 4. 4 稳定性试验:取复方贞芩肺宁胶囊样品溶
液，在 0、1、2、4、8、12、24 h测定齐墩果酸的峰面积，
结果显示，在 24 h 内齐墩果酸的峰面积 ＲSD 为
1. 1%，表明在 24 h内样品溶液稳定。
2. 4. 5 重复性试验:取复方贞芩肺宁胶囊 20 粒，
倾出内容物，研细成粉末，精密称取粉末适量(约相
当于齐墩果酸 60 mg)6 份，分别置 100 mL 量瓶中，
测定其齐墩果酸的含量。结果显示，齐墩果酸的平
均含量是 99. 5%，ＲSD为 1. 2%，表明此法测定齐墩
果酸的含量重复性良好。
2. 4. 6 精密度试验:取齐墩果酸对照品溶液，连续
进样 6 次，测定齐墩果酸的含量。结果显示，齐墩果
酸的含量 ＲSD是 0. 7%，表明仪器精密度良好。
2. 4. 7 加样回收试验:取复方贞芩肺宁胶囊(批
号:20130401，含齐墩果酸 0. 1511 mg /mg) ，研细成
粉末，精密称取适量(相当于齐墩果酸 30 mg) ，分别
置 100 mL量瓶中。再精密量取齐墩果酸对照品储
备液(3. 01 mg /mL)10 mL分别加至上述 100 mL 量
瓶中，加流动相 50 mL，超声 15 min，使溶解并稀释
至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液。按“2. 1. 1”
项下色谱条件，测定齐墩果酸的峰面积，计算回收
率，结果见表 4。
表 4 加样回收率试验结果
称取量
/mg
样品
含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
ＲSD
/%
200. 11 30. 24 30. 10 50. 12 100. 2
200. 42 30. 28 30. 10 50. 23 99. 50
200. 24 30. 26 30. 10 50. 18 99. 34
200. 39 30. 28 30. 10 50. 26 99. 60
200. 26 30. 26 30. 10 50. 89 100. 5
200. 14 30. 24 30. 10 50. 05 99. 57
99. 79 0. 5
2. 4. 8 样品测定:取复方贞芩肺宁胶囊(批号:
20130402、20130403、20130404) ，研细，精密称取适
量(约相当于齐墩果酸 60 mg) ，置 100 mL 量瓶中，
加流动相适量，超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤
过，即得供试品溶液。按“2. 1. 1”项下色谱条件测
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定齐墩果酸峰面积，计算复方贞芩肺宁胶囊中齐墩
果酸的含量，3 批样品测定结果分别是 99. 6%、
99. 3%、99. 5%，表明复方贞芩肺宁胶囊的平均含量
是标示量的 99. 5%，ＲSD是 0. 2%。
3 讨论
本文经过波长扫描，确定 210 nm为测定齐墩果
酸的波长。本研究中为了使齐墩果酸达到较好的分
离，在流动相中加入三乙胺，所得峰形较好，可获得
较高的理论塔板数、拖尾因子、分离度均达到要求，
经方法学验证结果满意。此方法简便准确、专属性
强、精密度好、回收率高，为考察复方贞芩肺宁胶囊
中齐墩果酸的含量以及稳定性试验提供可靠的方
法。
参 考 文 献
［1］彭婷婷，王卫华 . 高效液相色谱法测定女贞子中齐墩果
酸的含量［J］. 医学理论与实践，2011，24(20) :2503-
2505.
［2］王文俊，白玮玮，李军超，等 . 一种测定女贞子中齐墩果
酸和熊果酸的新方法［J］. 西北植物学报，2011，31(9) :
1894-1899.
安神补心颗粒质量标准提高研究
彭 维1，郑文燕1，苏 畅1，关倩怡1，黄晓燕2，苏薇薇1*
(1. 中山大学广州现代中药质量研究开发中心，广东 广州 510275;2. 深圳三顺制药有限公司，广东 深圳
518019)
摘要 目的:提高完善安神补心颗粒的质量标准。方法:在原标准基础上增加了丹参中丹参酮ⅡA、石菖蒲、首
乌藤、菟丝子的薄层色谱鉴别，对处方中丹参的有效成分含量测定方法由薄层扫描法改为高效液相色谱法，建立了
丹参以丹酚酸 B计的含量测定方法，增加了五味子以五味子醇甲计的含量测定。结果:石菖蒲、菟丝子、首乌藤、丹
参定性鉴别的专属性强;丹酚酸 B 和五味子醇甲分别在 0. 09984 ～ 1. 24800 μg、0. 03808 ～ 0. 47600 μg 范围内与峰
面积均呈现良好的线性关系，r = 0. 9998、0. 9999;平均回收率为 99. 42%、100. 33%，ＲSD 为 1. 85%(n = 9)、1. 32%
(n = 9)。结论:该研究修订的质量标准，方法简便、准确，重复性好，有效提高了安神补心颗粒的质量控制水平。
关键词 安神补心颗粒;质量标准;高效液相色谱法;丹酚酸 B;五味子醇甲
中图分类号:Ｒ286. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)08-1343-05
收稿日期:2013-04-25
基金项目:国家科技支撑计划课题资助项目(2012BAI29B09) ;广东省部产学研结合项目(2011A091000008)
作者简介:彭维(1971-) ，女，硕士，副主任药师，研究方向:药物分析;Tel:020-84112398，E-mail:pweiyu929@ 126. com。
* 通讯作者:苏薇薇，Tel:020-84110808，E-mail:lsssww@ 126. com。
安神补心颗粒原标准收载于国家药品监督管理
局国家药品标准———新药转正标准中药第 32 册，标
准编号:WS3-089(Z-014)-2001Z，为丹参、五味子等 10
味中药组成的复方制剂，具有养心安神的功效，用于
治疗心悸失眠、头晕耳鸣。为更好地监控和评价本品
的质量，对其原标准进行了修订提高，增加了石菖蒲、
首乌藤、菟丝子的薄层鉴别项。丹参为处方中的君
药，其有效部位有两类:脂溶性丹参酮类和水溶性丹
参酚酸类〔1，2〕，将原标准丹参中丹参酮ⅡA 的薄层色谱
扫描法改进列入定性鉴别项，建立了丹参以丹酚酸 B
计的高效液相色谱含量测定方法。由于处方中五味
子为臣药，用量较大，故增加了五味子以五味子醇甲
计的含量测定项。本研究方法简便、准确，重复性好，
有效提高了安神补心颗粒的质量控制水平。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 BP211D电子分析天平(瑞士赛多利斯
公司) ;Dionex P680 高效液相色谱仪(ASI-100 自动
进样器、ATH-585 柱温箱、P680 四元梯度泵、PDA-
100 检测器，美国戴安公司) ;Agilent 1100 高效液相
色谱仪(自动进样器、四元梯度泵、DAD 检测器，美
国安捷伦公司)。CAMAG AST4 薄层全自动点样
仪、ＲEPＲOSTAＲ 3 数码成像系统、TLC PLATE
HEATEＲⅢ薄层板加热器。
1. 2 材料 德国进口 MEＲCK 硅胶 G 预制薄层
板，硅胶 GF254预制薄层板;液相色谱所用试剂乙腈、
甲醇均为色谱纯，水为超纯水;其他试剂均为分析
纯。对照药材五味子(批号:120922-200304)、丹参
(批号:120923-200610)、首乌藤 (批号:120939-
·3431·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 8 期 2013 年 8 月