全 文 ：3 56
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P r e e l s e a n d a e e u r a t e
.
反相高效液相色谱法测定山荷叶中木脂素含量
马 辰 罗淑荣 何秀峰
`中国医学科学院药物研究所分析室 ,北京 , 1。。 05 0)
山荷叶 之D i p人y z l e i a s i n ￡n s i s L i ) 系小粟科山荷
叶属植物 ,其根茎民间主要用牙痈疖肿毒 、 跌打 、 蛇
咬伤等〔 , 〕 。 药理实验证明其主要成分鬼臼 、 毒素类木
脂素具有抗肿瘤 、 抗病毒 、 抑制细胞中期有丝分裂等
活性 仁2 一 `〕 。 由鬼臼毒素作为前体合成了一系列抗癌
药 (如 V P 一 16 等 ) ,有很好的疗效 。 因此建立这类化
合物分析方法 , 可为控制药材质量及临床用药提供
依据 。
实 验 部 分
( 一 )仪器 、 试剂及标准品
V a r ia n 5 0 0 0 (北分厂 )高效液相色谱仪 ; 岛津
S P D
一
6 A V 紫外可见检测器 ;岛津 C 一 R I B 微处理机 ;
O D S 色谱柱 · 2 5 o m m 只 4m m .l\ d · , 1 0拜m ; R p 一 1 8 色谱
保护柱 , s o m m x 4m m i . d . , 1 0拌m ;惠普 l o g oM 高效
液相色谱仪 。
乙睛 ,色谱纯 ,浙江黄岩化学试验厂产 ;其它试
剂均为分析纯 ;去离子水 。
标 准 品 : 4忆去 甲基 鬼 臼 毒 素 (4 ’ 一de m et h y l -
p o d o p h y l lo t o x in l ) m p 2 3 4一 2 3 6 ℃ , 无色针晶 。 苦
鬼臼素 ( p i e r o p o d o p h y ll in l )m p 2 1 9~ 2 2 l C , 白色
细针晶 。 鬼臼毒素 ( p o d o p h y ll o t o x i n 万 ) m p 1 6 3一
1 6 5℃ , 白色针晶 。 苦鬼臼酮 ( p ie r o p o a o p h y l lo n 。 w )
m p 一5 5一 1 5 9 ℃ , 无色针晶 。 鬼臼醋酮 ( p o d o p h y ll o -
t o x o n e V )m p 1 9 2一 1 9 4 、 C , 白色针晶 。 去氧鬼臼毒
素 ( d e o x y p o d o p h y l lo t o x i n 矶 ) m p 1 5 4 ~ 1 5 4 . S C ,无
色针晶 。 山荷叶素( D ip h y ll in 姗 ) m p 2 6 7一 2 7 0 〔 : ,淡
黄色颗粒 。 去氢鬼臼素 ( d e h y d r o p o d o p h y llo t o x sn 姗 )
m p 2 54~ 2 5 7℃ (变黄分解 ) ,白色针晶 。 其中 z 一 u
由兰州大学化学系田暄先生提供 , 订 、 姗由作者分离
并鉴定 。 安定 , 购于 中国药品生物制品检定所 。
植物样品由本所植物室宋万志和陈毓亨研究员
提供鉴定 。
( 二 )色谱条件
C 18柱 , 乙睛一甲醇一水 一磷酸 ( 8 : 38 : 5 4 : 。 . 01 )
作流动相 ,流速 1 . s m l /m in , 柱温 25 ℃ , 检测波长
Z1 5
n
m
, 灵敏度 0 . o o 5A U F S 。
(三 )标准落液的配制
精密称取标准品 I ~ 姻及内标各 s m g ,分别置
于 l m l容量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 。分别吸
取标准溶液 4 、 s 、 1 2 、 r 6 、 2 0 、 2 4 、 2 5拌l ,置于 l m l 容量
瓶中 , 分别加内标溶液 2 0川 ,加甲醇稀释至刻度 ,备
用 。
( 四 )样品处理
取样 品根茎研磨 . 过 40 目筛 , 精密称量 25 m g ,
加入 1, o m l 甲醇 , 超声提取 4 5m in , 4 0 0 o r /m in 离心
s m i
n
。 吸取上清液 2 0 0拌 l ;加入内标溶液 6 . 0 0拌I , 用甲
醇稀释至 30 闪 ,混匀 , 直接进样 。
结果与讨论
(一 )最先采用甲醇 一水各种配比作流动相 ,均不
能将 8 种组分基线分离 。 加入乙睛后 ,分离有很大改
善 , 加入磷酸改变流动相极性 ,使组分流出快 ,峰形
对称 。 确定乙睛 : 甲醇 : 水 : 磷酸一 8 : 38 : 54 :
0
.
0 1 时 , 8 组分基线分离 (见图 l ) 。
(二 ) 回归方程 、 精密度 、 回收率 :取标准品混合
溶液 ,按上节色谱条件 ,进祥 5川 ,得 8 种木脂素的回
归曲线 ,相关系数和线性范围 (见表 l ) 。
{ 、`、、丫 一J卜es J U 划 , U犯一广“ 又一一一一少弋八~10 20 3 0 40 45 m 王n图 l 样品 ( a )及标准品 ( b) 的色谱图
取标准的混合溶液 , 依上节色谱条件 ,进样 6川 ,
重复进样 1 次 , 测得各组分的变异系数 (见表 1 ) 。
色谱 1 9 9 3 年第 n卷第 6期 .3 57 .
依上节样 品处理方法 , 测得 8种木脂素的回收 管阵列检测器检测 8 种木脂素及 内标的色谱峰纯
率在 97 · 1一 10 · 3% 之间 (表 1 ) 口 度 , 结果表明色谱峰纯度好 。
( 三 )应用惠普 l o 9 0M 高效液相色谱仪及二极
表 1 回归方程 、精密度及回收率
木脂素 回归方程 相关系数 线性范围单 g ) ’ 变异系数 ( % ) “ “ 回收率训力
I )
厂 一 2 . 0 8 X 十 0 . 0 7 1 5 0 . 9 9 9 3 0 . 1 0 ~ 0 . 6 7 1 . 5 98 . 3
I y 一 2 . 6 4 X 一 0 . 0 4 18 0 9 9 9 8 0 、 1 0 ~ 0 . 7 1 1 . 6 9 7 . 1
m y = 2
.
68 X 一 0 . 0 2 9 4 0 . 9 9 9 6 0 . 1 1 ~ 0 . 7 4 1 . 5 9 9 . 1
W Y 一 3 . 54 X 一 0 . 0 1 9 8 0 . 9 9 9 6 0 . 1 2 ~ 0 . 8 2 1 . 7 9 8 . 1
V Y 一 2 . 3 3 X + 0 . 0 13 7 0 . 9 9 9 4 0 . 1 0 ~ 0 . 7 0 1 . 3 9 9 . 2
n y = 2
.
2 8 X 半 0 . 0 10 7 0 . 9 9 9 1 0 . 1 0 ~ 0 . 7 0 2 . 6 9 8 . 4
飞皿 Y = 2 . 9 7 X + 0 . 0 16 4 0 . 9 9 9 4 0 . 1 2 ~ 0 . 8 1 3 . 4 9 7 . 1
恤 Y 一 3 . 1 I X 一 0 . 0 2 1 3 0 . 9 9 9 3 0 . 1 1 一 0 . 7 7 2 . 8 10 0 . 3
* 变异系数 n 一 n ; , ; 回收率 n 一 4 。
( 四 )应用色谱条件和样品处理方法 ,测定了 4 的同种植物化学成分含量不同 。 这几种植物中均含
个不同产地山荷叶及相近属植物鬼臼 、 八角莲中木 有鬼臼毒素和 4 `一去甲基鬼臼 、 毒素 , 而 以山荷叶中
脂素的含量 (内标法计算含量 , 结果见表 2 ) 。 分析结 含量最高 。 这两种化合物是半合成抗癌药的前体 。 因
果表明 ,不同属植物中化学成分有差异 , 而不同产地 此 , 山荷叶为半合成抗癌药提供原料很有意义 。
名称 产地
表 2 样品中木脂亲的含 t 如 g / m g , n 一 3 )
木脂素含量 (拜g /m g )
1 1 VI V U 通 总量
心ULOn6离b1`只dō-口.…口`左一`L乃`内b勺」且hP 刃 ile a 陕西太白s ` n e n 万 15 陕西利平甘肃礼县
陕西宝鸡
p
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do P人刃 lu 功 陕西太白
e m o dl 甘肃
5
.
9 4
17
.
8 2
1
.
4 7
1 5
.
3 0
5 3 3 1 3
0
.
7 1
犯一433 . 2 8
5
.
6 7
3 6 5
4
.
04
2
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5 4
;:
085
1oné0n乙
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` .1
勺,工
2
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7
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60一42
62385一7
45一07
肠20一4
5
.
8 1 0
.
0 5 1
.
6 9 2
.
6 5 1 2
2461一81QU一9ù50口`一CJJ任八J一OJ1
D y s o s m a
P l e i a n t h a
福建 5 7 0 . 3 4 3 9 0 . 3 1 0 . 1 6 0 . 1 9 3 . 9 6
参考文献
〔1 〕全国中草药汇编组 , 《全 国中草药汇编 (上册 ) 》 , 人民卫
生出版社 ,北京 , 2 2 2 页 , 19 7 8 ·
〔2 〕 Y o s h ih i k o In a m o r l e t a l . , C h e m . P h a r m B u l l . , 3 4 ,
3 9 2 8 ( 1 9 8 6 )
.
〔3〕 E . Be d o w s e t a l . , J . N a t . P r o d . , 4 6 ( 6 ) , 7 2 5 ( 19 8 2 ) .
〔4〕 R . H . 1玉〕 n d e r e t a l . , C a n e e r R e s . , 3 1 ( 6 ) , 8 5 1 ( 1 9 7 1 ) .
致谢 本所植化室杨峻山奋i姗究员在实验过程
中给予帮助 ,特此感谢 。
戈收稿 日期 : 1 9 9 2 年 6 月 1 2 日 , 修回日期 : 9 月 1 5 日 )
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e m e t h y l p o d o p h y l lo t o x in ( 1 )
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o p h y l li n ( 2 )
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p o d
o P h y l l
o t o x in ( 3 )
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P i e r o P o d o P h y l lo n e ( 4 )
,
P o d
o P h y l lo t o x o n e ( 5 )
,
d e o x y P o d o p h y l lo t o x i n ( 6 )
,
d ip h y l li n ( 7 )
,
d e h y d r o p o d o p h y l lo t o x in ( 8 ) 15 d e s e r ib e d
.
A s o lv e n t
s y s t e m
,
C H
3 O H : CH 3 C N , H ZO , H 3 P O ; = 3 8 , 8
: 5 4 : 0
.
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5 0拜g · T h e r e e o v , 长 5 w e r e 9 7· l ~ 1 0 0· 3% fo r
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