全 文 ：第 39 卷 第 6期
2014 年 12月
昆明理工大学学报(自然科学版)
Journal of Kunming University of Science and Technology (Natural Science Edition)
Vol． 39 No. 6
Dec． 2014
收稿日期:2014 － 03 － 19． 基金项目:国家自然科学基金项目(31260399，31460430) ，云南省创新人才基金项目
(2011C1078) ，校人才基金项目(KKSY201226109)．
作者简介:胡旭佳(1968 －)，女，副教授．主要研究方向:药物分析，植物化学成分及活性． E －mail:huxjia@ gmail. com
doi:10． 3969 / j． issn． 1007 － 855x． 2014． 06． 014
南板蓝根质量标准研究
胡旭佳，刘永芹
(昆明理工大学 生命科学与技术学院，云南 昆明 650500)
摘要:对 12 批南板蓝根药材和 6 批南板蓝根饮片进行定性定量实验研究，以提高南板蓝根的质
量标准．采用显微法和 TLC法对南板蓝根进行定性鉴别研究，HPLC 法测定靛玉红的含量，色谱
柱:Kromasil － C18(200 × 4． 6 mm，5 μm) ，流动相:乙腈 － 0． 1%磷酸溶液(55 ∶ 45) ;检测波长为
289 nm．结果表明:显微法特征明显，TLC法斑点清晰，专属性强，可与板蓝根区别;靛玉红的定量
测定在 0． 0102 ～ 0． 612 μg /mL呈良好的线性关系，r = 0. 99996，平均回收率为 99. 13%，ＲSD 小
于 3． 0% ．本方法简单灵敏，准确可靠，重现性好，可完善现行的质量标准，对保证其质量和临床
疗效具有重要意义．
关键词:南板蓝根;靛玉红;定性鉴别;含量测定;质量标准
中图分类号:Ｒ931 文献标志码:A 文章编号:1007 － 855X(2014)06 － 0089 － 06
Study of Quality Standard on Ｒoots of Baphicacanthus cusia
HU Xu-jia，LIU Yong-qin
(Faculty of Life Science and Technology，Kunming University of Science and Technology，Kunming 650500，China)
Abstract:To develope the quality standard of Baphicacanthus cusia (Nees)Bremek，a qualitative and quantita-
tive experiment of 12 batches of B． cusia herbs and 6 batches decotion pieces is carried out． The qualitative identi-
fication of B． cusia is studied by microscopy and TLC methods． The content of Indirubin in herbs and decoction
pieces are determined by HPLC． The results are as follows:chromatographic column being Kromasil － C18(200 ×
4． 6 mm，5μm) ;mobile phase being Acetonitrile － 0． 1% phosphoric acid (55:45) ;detection wavelength being
289nm． The results indicate that microscopy method has obvious characteristics． The clear spots of TLC，which are
highly specific，could be distinguished from Ｒadix Isatidis． Quantitative determination of Indirubin between 0． 0102
～0． 612 μg /mL show good linear relationship with r =0． 99996，the average recovery rate being 99． 13% and ＲS-
Ds less than 3． 0% ． The proposed method is simple，sensitive，accurate，reliable with good reproducibility，so that
it could improve the existing quality standard，by ensuring quality and clinical efficacy of B． cusia．
Key words:Baphicacanthus cusia;Indirubin;identification;determination;quality standard
0 引 言
南板蓝根为中国华南和西南地区的常用中药，来源于爵床科马蓝属植物马蓝(Baphicacanthus cusia
(Nees)Bremek)的根及根茎．其性寒，味苦，归心、胃经，具有抗菌、抗肿瘤、抗病毒、抗炎等方面的药理活
性［1 － 2］．而板蓝根是十字花科植物菘蓝(Isatis indigotica Fort．)的干燥根．其性寒，味苦，归心、胃经，具有清
热解毒，凉血利咽的功效． 用于温疫时毒，发热咽痛，温毒发斑，腮腺炎，烂喉丹痧，大头瘟疫，丹毒，
痈肿［3 － 6］．
板蓝根药材从《中国药典》1985 年版开始收载，至现行版药典已有专属性指标成分用于该药材的定性
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定量的质量控制［6］．而南板蓝根自《中国药典》1995 年版就将其作为新增中药品种进行收载，但至现行版
尚未有“含量测定”项，南板蓝根中的靛玉红有抑制肿瘤细胞的活性［7 － 9］，对其定量测定虽已有文献报
道［10 － 11］，但尚未见采用靛玉红对南板蓝根药材与饮片质量进行系统评价的相关报道．为了更好地有效控
制药材的质量，我们对 12 批南板蓝根药材和 6 饮片进行定性定量实验研究，目前取得的实验数据为提高
南板蓝根的质量控制方法，完善现行的质量标准，保证其质量和临床疗效具有重要意义．
1 仪器与试药
薄层硅胶板(青岛海浪硅胶干燥剂厂，040409) ;HP － 1100 液相色谱仪(HP － 1100 系列四元泵，VWD
可变波长检测器，自动进样器，在线脱气装置，柱温箱) ;乙腈、甲醇为色谱纯(德国 Merck 公司) ;磷酸为分
析纯(天津市丰川化学试剂厂) ;水为超纯水;其他试剂均为分析纯(天津市丰川化学试剂厂) ;靛玉红对照
品购自中国药品生物制品检定所(批号为 717 － 200003)．
南板蓝根药材 12 批，南板蓝根饮片 6 批，分别由崔景云、陈德媛、黄忠良等教授鉴定，标本保存在中国
科学院昆明植物研究所．
2 定性鉴别
2． 1 本品根茎的横切面
木栓层为数列细胞，内含棕色物．皮层宽广，外侧为数列厚角细胞;内皮层明显;可见石细胞．韧皮部较
窄，韧皮纤维众多．木质部宽广．细胞均木化;导管单个或 2 ～ 4 个径向排列，木射线宽广．髓部细胞类圆形
或多角形，偶见石细胞．薄壁细胞中含有椭圆形的钟乳体．
2． 2 TLC法
取本品粉末 2 g，加三氯甲烷 20 mL，加热回流 1 h，滤过，滤液浓缩至 2 mL，作为供试品溶液．另取靛蓝
对照品、靛玉红对照品，加三氯甲烷制成每 1 mL含靛蓝和靛玉红分别为 0. 2 mg 的混合溶液，作为对照品
溶液．照药典附录薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各 20 μL，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以石油醚
(60 ～ 90 ℃)－乙酸乙酯 －三氯甲烷(1∶ 1∶ 8)为展开剂，展开，取出，晾干，立即检视．供试品色谱中，在与
对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色和紫红色斑点．
表 1 系统适用性试验结果
Tab． 1 Ｒesults of system suitability test
样品 保留时间 / min 理论塔板数 分离度 对称性
靛玉红 8. 462 14 013 － 0. 90
南板蓝根药材 8. 460 16 100 4. 94 0. 90
表 2 线性关系考察结果
Tab． 2 Ｒesults of linearity，and calibration equation of indirubin
进样量
/μL
对照品溶液浓度
/mg. mL －1
对照品量
/ng
峰面积
1. 0 0. 020 4 20. 4 114. 043 36
5. 0 0. 020 4 102. 0 564. 417 91
10. 0 0. 020 4 204. 0 1 136. 824 22
15. 0 0. 020 4 306. 0 1 715. 981 69
20. 0 0. 020 4 408. 0 2 299. 295 17
25. 0 0. 020 4 510. 0 2 807. 644 04
3 含量测定
3． 1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱为 Kromasil － C18(200 × 4． 6
mm，5 μm) ;流动相:以乙腈 － 0. 1%磷酸
溶液(55∶ 45) ;检测波长为 289 nm;理论板
数按靛玉红计，应不低于 4 000． 系统适用
性实验结果见表 1．
3． 2 对照品溶液的制备
精密称取靛玉红对照品适量，加甲醇
制成每 1 mL 含靛玉红 10 μg 的溶液，
即得．
3． 3 供试品溶液的制备
取本品细粉约 5 g，精密称定，置索氏
提取器中，加乙醇适量，放置过夜，加热回
流至提取液无色．回收溶剂至干，残渣加甲
醇溶解并定容至 10 mL量瓶中，以 0． 45 mm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得．
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3． 4 测定法
分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各 10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得．记录色谱图，如
图 1 所示．靛玉红峰的理论板数为 16 346 ．
表 3 重复性试验结果
Tab． 3 Ｒepeatability of indirubin
序号 取样量 /g 峰面积 靛玉红含量 / mg·g －1
1 4． 714 4 929． 316 72 0． 039 2
2 5． 156 1 1 020． 414 43 0． 039 4
3 4． 607 7 915． 867 68 0． 039 5
4 5． 182 9 1 052． 221 10 0． 040 4
5 5． 037 6 984． 184 69 0． 038 9
6 5． 168 9 1 051． 956 05 0． 040 5
平均值 － － 0． 039 7
ＲSD /% － － 1． 65
3． 5 线性
取靛玉红对照品溶液(0． 020 4 mg /
mL)1． 0，5． 0，10． 0，15． 0，20． 0，25． 0 分别
进样记录色谱图，以峰面积积分值(Y)对
进样量(X)进行回归处理，结果见表 2，得
到回归方程为 Y = 5． 550 74X + 5． 390 33，r
= 0． 999 82，线性范围为 0． 020 4 ～ 0． 510
μg /mL．
3． 6 精密度试验
取同一对照品溶液，连续测定 6 次，以
靛玉红色谱峰面积计算，ＲSD为 0． 42%，精密度良好，达到规定要求．
3． 7 重现性试验
取同一产地为云南金平的南板蓝根的样品，按供试品溶液的制备方法制备 6 份供试品溶液，分别测定
并计算含量，结果如表 3 所示，6 份样品中靛玉红含量测定的平均值为 0． 039 7 mg /g，ＲSD = 1． 65%，证明
此方法重复性良好．
3． 8 稳定性试验
在上述色谱条件下，分别取同一对照品溶液和同一供试品溶液，于 0，4． 5，9． 0，14． 5 和 19 h 分别测定
5 次，测得靛玉红在对照品和供试品中的 ＲSD分别为 1． 31%和 0． 76%，结果表明在 19 h内稳定．
3． 9 准确度(回收率试验)
采用加样回收法．取已知含量的供试品(云南金平，靛玉红含量为 0． 039 7 mg /g)6 份，精密加入靛玉
红对照品溶液(0． 040 8 mg /mL)2． 5 mL，按试验所得方法试验，结果表明，本法回收率在 95% ～ 105%之
间，平均回收率为 99． 13%，符合要求(见表 4)．
3． 10 样品测定
按规定方法制备 18 批样品的供试品溶液及对照品溶液，分别测定，测定结果见表 5．
3． 11 耐用性实验
(1)不同品牌的同类型色谱柱
在其他因素不变的情况下，考查不同品牌的同类型色谱柱对测定结果的影响．如表 6 所示，不同品牌
的同类型色谱柱，对被测成分色谱峰的分离度及测定结果无明显影响．
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表 4 加样回收率试验结果
Tab． 4 Ｒecovery of indirubin． in B． cusia by HPLC
序号 取样量 /g 样品含量 /mg 对照品加入量 /mg 测定量 /mg 回收率 /%
1 2． 911 9 0． 115 6 0． 102 0 0． 216 5 98． 92
2 3． 152 4 0． 125 2 0． 102 0 0． 227 5 100． 29
3 2． 849 8 0． 113 1 0． 102 0 0． 212 0 96． 96
4 3． 078 2 0． 122 2 0． 102 0 0． 226 0 100． 18
5 3． 099 2 0． 123 0 0． 102 0 0． 224 3 99． 31
6 3． 002 1 0． 119 2 0． 102 0 0． 220 4 99． 21
平均值 － － － － 99． 15
ＲSD /% － － － － 1． 20
表 5 样品测定结果(%)(n =2)
Tab． 5 Determination results of samples (n =2)
编号 样品 产地 收集地 样品测定结果 /%
1 南板蓝根药材 云南金平县 昆明菊花村药材市场 0． 003 9
2 南板蓝根药材 云南西双版纳 采集样品，经中科院版纳植物园崔景云鉴定 0． 021 0
3 南板蓝根药材 云南普洱县 云南省药材公司 0． 001 1
4 南板蓝根药材 云南新平县 昆明菊花村药材市场 0． 000 9
5 南板蓝根药材 云南金平县 云南省药材公司 0． 030 3
6 南板蓝根药材 云南金平县 云南省药材公司 0． 027 7
7 南板蓝根药材 云南金平县 云南省药材公司 0． 003 1
8 南板蓝根药材 贵州关岭 采集样品，贵州中医学院陈德媛教授鉴定 0． 001 6
9 南板蓝根药材 贵州贞丰 浙江中医药大学饮片厂 0． 000 2
10 南板蓝根药材 贵州贞丰 采集样品，经贵州中医学院陈德媛教授鉴定 0． 001 8
11 南板蓝根药材 广东肇庆 采集样品，经中科院华南植物所黄忠良教授鉴定 0． 001 7
12 南板蓝根药材 广东罗浮山 采集样品，经中科院华南植物所叶华谷教授鉴定 0． 012 0
13 南板蓝根饮片 云南金平县 昆明菊花村药材市场 0． 003 6
14 南板蓝根饮片 云南新平县 昆明菊花村药材市场 0． 000 8
15 南板蓝根饮片 云南金平县 云南植物药业公司 0． 003 0
16 南板蓝根饮片 贵州关岭 采集样品，经贵州中医学院陈德媛教授鉴定 0． 001 4
17 南板蓝根饮片 贵州贞丰 浙江中医药大学饮片厂 0． 000 2
18 南板蓝根饮片 广东肇庆 采集样品，经中科院华南植物所黄忠良教授鉴定 0． 001 6
表 6 不同品牌的同类型色谱柱的考察结果
Tab． 6 Ｒesults of indirubin in different brands of the same type of column
色谱柱 靛玉红分离度 靛玉红含量 /% 平均含量 /% ＲSD /%
依利特 kromasil C18(5μm，4． 6 × 200mm) 3． 00 0． 003 71
汉邦 C18(5μm，4． 6 × 250mm) 3． 88 0． 003 68
gilent C18(Zorbax Exlipse) (5μm，4． 6 × 150mm) 2． 33 0． 003 81
0． 003 7 2． 14
(2)不同流速
在其他因素不变的情况下，分别考查 0． 9、1． 0 和 1． 1 mL /min 不同流速对测定结果的影响，计算 ＲSD
值为 1． 05% ．结果表明流速变化对被测成分色谱峰的分离度及测定结果无明显影响．
(3)柱温
在其他因素不变的情况下，分别考查柱温为 25℃、30℃和 40℃时，对测定结果的影响．计算 ＲSD 值为
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1. 22% ．表明柱温对被测成分色谱峰的分离度、测定结果无明显影响．
4 讨 论
根据文献报道［12 － 18］及我们所做的化学分离工作，南板蓝根主要成分为靛蓝、靛玉红、谷甾醇羽扇豆
醇、白桦酯醇、羽扇酮、色胺酮、4(3H)－喹唑酮和 2，4(1H，3H)－喹唑二酮等．本实验选取靛玉红 (indiru-
bin，1)、靛蓝 (indigo，2)、色胺酮 (tryptanthrin，3)、4(3H)－喹唑酮(4(3H)－ quinazolinone，4)、2，4
(1H，3H)－喹唑二酮 (2，4(1H，3H)－ quinazolinedione，5)和大黄酚(chrysophanol，6)有效成分，结构如
图 2 所示，考察作为标准物质的可行性．
4． 1 标准物质选取
在上述几种化合物中，
靛蓝溶解性较差，在乙醇、甲
醇中微溶，在三氯甲烷中溶
解也不完全，影响含量测定
的准确性，故未选取;色胺
酮、4(3H)－ 喹唑酮虽然色
谱行为较好，但在根中含量
不及万分之一，故未选取;2，
4(1H，3H)－喹唑二酮，色谱
峰形差，浓度也较低，含量不
及万分之一，故未选取;大黄
酚虽然色谱行为较好，但在
根中含量不及万分之一，故
未选取;靛玉红作为主要的
有效成分，具较好的色谱行为，其对称性、分离度、重现性、稳定性均达到药典的要求，故选为含量测定项目
的测定成分．
表 7 提取条件比较测定结果
Tab． 7 Ｒesults of the different extraction conditions
溶剂 方法 测定结果 /%
三氯甲烷 放置过夜，加热回流 1 h 0． 002 6
三氯甲烷 放置过夜，加热回流 2 h 0． 002 7
三氯甲烷 放置过夜，索氏提取至无色 0． 002 9
乙醇 放置过夜，加热回流 1 h 0． 002 9
乙醇 放置过夜，加热回流 2 h 0． 002 9
乙醇 放置过夜，索氏提取至无色 0． 003 1
4． 2 提取方法筛选
据含量测定成分的性质，对提取方法的研究，在
试验中以同一供试品选择了三氯甲烷和乙醇两种溶
剂，不同时间进行比较，结果见表 7．
如表 7所示，本实验所设置的两种不同极性溶剂
中，乙醇的提取效果稍高于三氯甲烷．预试验结果亦证
明，靛玉红易溶于三氯甲烷、乙醇、甲醇等，故三氯甲烷
和乙醇均可作提取溶剂．但实际操作中发现，靛玉红在
三氯甲烷中并不稳定，随温度和时间而变化．而靛玉红
在乙醇中相对稳定．以三氯甲烷为溶剂在提取过程中，三氯甲烷提取液蒸干后，其残渣在甲醇中溶解性较差，
溶解操作相对耗时费力，较容易造成损失，而用乙醇则有所改善，且乙醇较三氯甲烷价廉而毒性低．综合上述
因素，采用乙醇作提取溶剂．另外，回流提取时间明显短于索氏提取，但是索氏提取比较完全，综合考虑后选
择了正文中规定的提取方法，即以乙醇为溶剂，放置过夜，索氏提取至提取液无色的方法．
4． 3 流动相的选择
根据文献报道［10］，试验中比较了三个系统，见图 3．采用乙腈 －水(55∶ 45)及甲醇 －水(75∶ 25)测定
靛玉红的含量．结果表明:以乙腈 －水(55∶ 45)作为流动相，靛玉红能与其他组分达到基线分离，但色谱峰
拖尾，进一步比较了不同浓度的磷酸对色谱峰的影响．结果表明，以乙腈 － 0． 1%磷酸溶液为流动相，靛玉
红能与其他组分达到基线分离，且峰形对称．
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4． 4 检测波长选择
以甲醇作溶剂，测定了靛玉红的紫外吸收光谱，结果在 289、539 nm波长处均有最大吸收，考虑到检测
灵敏度及其他干扰因素，结合《中国药典》2010 版一部大青叶含量测定项下选用测定靛玉红的波长为 289
nm，故选择 289 nm波长作为测定的检测波长．
5 结 论
本实验对 12 批南板蓝根药材和 6 批南板蓝根饮片进行定量分析．结果表明，各样品均可检出靛玉红，
且正品南板蓝根的根茎和根中靛玉红的含量在 0． 001 7% ～ 0． 004 4%之间，运用 HPLC 法检测其含量，具
有特征性和专属性．定量测定结果表明靛玉红在各样品的含量差异较大，有必要对其质量进行控制．
参考文献:
［1］王建荣，林文津． 南板蓝根研究概况［J］． 中国民族民间医药，2013(10) :9 － 11．
［2］楼之芩，秦波．常用中药材品种整理和质量研究(北方编) :第 1 册［M］． 北京:北京大学医学出版社，1995:310 － 311．
［3］吴佩颖，王景敏． 大青叶、板蓝根和青黛的本草考证［J］． 上海中医药大学上海市中医药研究院学报，1996，10(1) :50 －
51．
［4］武佳，解云霞． 板蓝根化学成分及质量控制研究［J］． 时珍国医国药，2006，17(10) :2067 － 2068．
［5］黄芳，陈渊成，刘晓东． 板蓝根总生物碱中表告依春在发热大鼠体内的药动学 －药效学结合模型研究［J］． 中草药，
2007，38(10) :1514 － 1519．
［6］中华人民共和国卫生部药典委员会． 中华人民共和国药典:2010 年版一部［S］． 2010:229．
［7］吴琦玮，葛忠良，高月，等． 靛玉红对肿瘤细胞抑制作用的研究及相关机制探讨［J］． 天津中医药，2008，25(1) :55 － 58．
［8］曹婧，樊青霞，索振河． 靛玉红对膀胱癌 ScaBer细胞株增殖的影响及机制［J］． 山东医药，2008，48(14) :61 － 62．
［9］ Merz K H，Schwahn S，Hippe F，et a1． Novel indirubin derivatives，promising anti － tumor agents inhibiting cyclin － depend-
ent kinases［J］． International Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics，2004，42(11) :656 － 658．
［10］王金鹏，孙翠萍，林海霞，等． HPLC测定复方南板蓝根颗粒中靛蓝和靛玉红的含量［J］． 中国实验方剂杂志，2012，18
(21) :128 － 130．
［11］侯惠婵，梁少珍． HPLC法测定马蓝根、茎、叶中靛玉红、靛蓝的含量［J］． 中药材，2006，29(7) :681 － 682．
［12］杨秀贤，吕曙华，吴寿金． 马蓝叶化学成分的研究［J］． 中草药，1995，26(12) :622．
［13］李玲，梁华清，廖时萱，等． 马蓝的化学成分研究［J］． 药学学报，1993，28(3) :238 － 240．
［14］高国清，何玉铃，何礼刚，等． 马蓝根中含氮杂环:苯并二氢噁唑 － 2 －酮及 2 －羟基 1，4 －苯并噁［J］． 中医药杂志
(台北) ，2001，12(1) :41 － 49．
［15］王啤． 五种药用植物化学成分与资源的研究［D］． 昆明:中国科学院昆明植物研究所，2008．
［16］ Tomonori T，Tsuyoshi K，Miho K，et a1． A new lignan glycoside and phenylethanoid gycosides from Strobilanthes cusia BＲE-
MEK［J］． Chemical and Pharmaceutical Bulletin，2004，52(10) :1242 － 1245．
［17］裴毅． 菘蓝和马蓝药用部位的药学研究［D］． 哈尔滨:黑龙江中医药大学，2007．
［18］吴煜秋，钱斌，张荣平，等． 南板蓝根的化学成分研究［J］． 中草药，2005，36(7) :982 － 983．
49 昆明理工大学学报(自然科学版) 第 39 卷
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