全 文 ：HPLC法测定复方南板蓝根片中靛蓝的含量
许 刚
(昆明云健制药有限公司 , 云南 昆明 650032)
摘 要:目的:采用 H PLC 法对复方南板蓝根片中南板蓝
根含的靛蓝进行含量测定。方法:HPLC 法 ,江苏汉邦 C18柱
(Υ4.6 × 150 mm , 5 μm), 甲醇 -水(55 ∶ 45), 流速
1.2 mL/min , 检测波长 294 nm。 结果:靛蓝在 0.0636 ～
0.5088 μg 范围内呈良好线性关系(r=0.9994), 加样回收率
为 98.79%, RSD为 0.60%。结论:此方法简便 、准确 、重现性
好 ,可用于复方南板蓝根片的质量控制。
关键词:HPLC 法;含量测定;复方南板蓝根片;靛蓝
中图分类号:R284 文献标识码:A
文章编号:1007-2349(2010)09-0070-02
复方南板蓝根片由南板蓝根 、紫花地丁 、蒲公英 3 味药组
成。具有消炎解毒之功 , 是治疗腮腺炎 、咽炎 、乳腺炎等疾病
的常用中成药。现行标准中仅有显色反应和南板蓝根的对照
药材薄层色谱鉴别项目 , 但该方法专属性不佳[ 1] 。药典中的
南板蓝根药材检验项目也只有靛蓝和靛玉红的薄层鉴别[ 2] 。
为了更好地控制药品质量 ,保证疗效 ,本实验对药方中的君药
南板蓝根所含有效成分靛蓝进行 HPLC 含量测定 , 方法简便 、
准确 、可行[ 3] 。
1 实验材料
1.1 仪器 Wate rs2487 -1525 -717 高效液相色谱仪 ,
KQ3200DB 超声仪 , Sar toriusBS210S 电子天平 , 岛津 UV -
1601 紫外分光光度计。
1.2 试药与样品 甲醇为色谱纯 , 乙酸乙酯为分析纯;靛蓝
对照品(中国药品生物制品检定所 , 批号:110716 -200509);
复方南板蓝根片由昆明云健制药有限公司生产。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:江苏汉邦 C18柱(Υ4.6 mm ×150
mm , 5 μm), 流动相:甲醇-水(55∶45), 流速:1.2 mL/ min ,
检测波长为 294 nm , 柱温:30 ℃, 样品进 10 μL , 对照品进
5μL 。理论塔板数按靛蓝峰计算不低于 3000 , 靛蓝峰的分离
度应符合要求。
2.2 波长的选定 取靛蓝对照品的乙酸乙酯溶液 , 用紫外分
光光度计在 200～ 400 nm 范围内扫描 ,结果在 294 nm 处有最
大吸收峰。
2.3 供试品溶液的制备 取本品 20 片 , 除去糖衣 ,精密称定
重量(计算平均片重),研细 , 混匀 ,过四号筛 ,取约 2.5 g ,精密
称定 ,置具塞锥形瓶中 , 精密加入乙酸乙酯 50 mL , 密塞 , 称定
重量。超声处理 120 min(功率 120 W , 频率 80 kH z), 冷却至
室温 ,精密称定并用乙酸乙酯补足重量 , 摇匀 , 滤过 , 取续滤
液 ,即得。
2.4 对照品溶液的制备 精密称取靛蓝对照品适量 ,加乙酸
乙酯制成每毫升含靛蓝 60 μg 的溶液作为对照品溶液。
2.5 阴性样品溶液的制备 按本品处方及制备工艺 ,取除南
板蓝根外的药材和辅料适量 , 照供试品溶液制备方法制备阴
性样品溶液。
2.6 专属性实验 按上述色谱条件 ,分别取对照品液 、供试
品液及阴性样品液 10 μL 注入液相色谱仪 ,记录色谱图 , 对照
品与样品主峰的保留时间一致 , 供试品溶液靛蓝色谱峰分离
度大于 1.5 ,理论塔板数为 9800 , 色谱适应性考察结果符合药
典要求。阴性样品液在与靛蓝色谱峰相同的保留时间 , 无干
扰峰出现。表明在此色谱条件下 , 除靛蓝外的其他药材 、辅料
和溶剂对测定无干扰 , 此方法的专属性良好。见图 1。
A:对照品溶液 B:供试品溶液 C:阴性样品溶液
图 1 高效液相色谱图
70 云 南 中 医 中 药 杂 志 2010 年第 31 卷第 9 期
2.7 线性关系考察 取靛蓝对照品用乙酸乙酯溶解并稀释
成每毫升含靛蓝 0.0636 mg 的溶液。吸取 1.0、2.0、4.0 、6.0 、
8.0 、10.0、12.0 mL 置 10 mL 容量瓶中 ,用乙酸乙酯稀释至刻
度 ,分别吸取 10 μL 注入高效液相色谱仪 , 以靛蓝的进样量
(μg)为横坐标 , 峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲线 , 得回归方程:
Y=9087.5 X-3880.4 , r=0.9994 , 结果表明靛蓝在浓度为
0.0636～ 0.5088μg 范围内线性关系良好。
2.8 精密度试验 精密吸取对照品溶液 5μL ,按测定方法重
复进样 6 次 ,以靛蓝峰面积计算 , 结果 RSD 为 1.86%, 表明本
方法精密度良好。
2.9 稳定性试验 精密吸取供试品溶液 10 μL ,按测定方法
分别于 0、1、2、3、4、5 h 进样 , 以靛蓝峰面积计算 ,结果 RSD为
1.97%,表明供试品溶液在 5 h 内基本稳定。
2.10 重复性试验 取供试品 6 份(昆明云健制药有限公司 ,
批号:201004125),按供试品制备方法处理 , 测定靛蓝含量 ,结
果 RSD为 1.49%, 表明本方法重复性良好。
2.11 回收率试验 取已测得含量的样品(昆明云健制药有
限公司 ,批号:201004125 , 靛蓝的质量比为 0.0748 mg/ g), 分
别添加浓度为 0.0636 mg/ mL 的靛蓝对照品溶液各 1 mL ,按
含量测定方法测定 ,计算回收率 , 结果见表 1。
表 1 回收率试验结果
称样量
(g)
样品中靛蓝
的量(mg)
加入靛蓝量
(mg)
测得靛蓝量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
2.5125
2.5685
2.5025
2.5365
2.5487
2.6587
0.1879
0.1921
0.1871
0.1897
0.1906
0.1988
0.0636
0.2506
0.2550
0.2496
0.2528
0.2530
0.2622
98.58
98.89
98.27
99.21
98.11
99.68
98.79 0.60
2.12 样品含量测定 取不同批号(200910141 , 201004123 ,
201004124 , 201004125)的复方南板蓝根片 , 按含量测定方法
测定靛蓝的含量 ,结果见表 2。
表 2 样品测定结果
批号 靛蓝含量(m g/片)
200910141
201004123
201004124
201004125
0.0598
0.0799
0.1409
0.0748
3 讨论
3.1 溶剂选用 曾采用氯仿 , 但与乙酸乙酯对比峰型不好 ,
而且具毒性 , 因此选用乙酸乙酯。
3.2 溶剂用量 本实验对比 10、25、50、100 mL , 最后测得
50 mL足可以提取完全。
3.3 提取方式 索式回流提取法与超声提取法对比后证明:
超声法不仅能有效破碎药品微粒 , 而且一定时间后还能使水
温升高 , 起到回流法的加热提取作用 ,并且操作方便 , 有利于
药厂和药检所等多批次的检验 , 所以选用超声提取法。
3.4 提取时间 本实验对比 60、120、240 min , 最后测得
120 min足可以提取完全。
3.5 关于过筛 考虑到手工研磨粉碎程度有限 ,过四号筛的
药品细度能加强溶出率。
3.6 流动相选用 曾用过乙腈-水(47:53), 但分离效果不
好 ,改用甲醇-水后有改善。
3.7 流动相比例 甲醇比例用过 80%、70%、68%都有拖尾;
减到 60%拖尾消失 , 但分离度不好;减到 50%时 , 到 40 min 还
未出峰 , 判断在 50%～ 60%之间最好。 比较得出甲醇比例
55%,分离度最好 , 塔板数最高。但出峰时间较长 , 提高流速
到 1.2mL/ min ,出峰时间较合适。
本实验测定的 4 批样品靛蓝含量有一定差异 , 更增添了
改进复方南板蓝根片含量测定方法 , 进而更好控制质量的迫
切要求。
参考文献:
[ 1] 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制
剂[ S].1992:107.
[ 2] 国家药典委员会.中国药典[ S].一部.北京:化学工业出版社 ,
2005:170.
[ 3] 曹红 ,刘云 ,秦红霖.高效液相色谱法测定复方青黛片中靛蓝和靛
玉红的含量[ J].药物分析杂志, 1999 , 19(3):195.
(收稿日期:2010-06-10)
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