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动物组织内形成残留 , 通过食物链危害人类健康 , 许多国家
已经规定了雌二醇及其衍生物的最高残留限量 , 甚至规定有
些是禁用药物 , 筛查出这类有害药物有一定的意义 , 同时也
表明方法有较强的实用性。
4.3　前景展望
首次将 H PLC-MS 指纹图谱方法应用于牛奶中有害药物
筛查 , 这种牛奶质量监测方法 , 较之用单一成分或指标监控
其质量更具有科学性 、 全面性和可追溯性 , 也从根本上解决
了其他现有分析技术必须多种方法结合使用及多项指标必须
同时检测才能对其质量合格与否作出判断的弊端 , 大大提高
了质量控制和评价的技术水平和科技含量。该方法是牛奶中
有害物识别和鉴定的新型手段 , 在牛奶质量控制和有害物筛
查方面具有广阔的应用前景。
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(收稿日期:2010-03-31;修回日期:2010-04-08)
高效液相色谱法测定复方青果颗粒中没食子酸含量
龙海燕 , 彭飞城 , 姚蓉 (湖南省药品检验所 , 长沙　410001)
摘要:目的　建立复方青果颗粒的含量测定方法。方法　用 H PLC 法测定诃子及青果中没食子酸的含量 , 采用 Ag-
ilent TC- C18色谱柱;以甲醇-0.1%磷酸溶液 (5∶95)为流动相;流速:0.8 m L·min-1;检测波长:273 nm。结
果　没食子酸在 22.64～ 113 2 ng 与峰面积线性关系良好 , 平均回收率 100.3%, RSD 为 1.9%(n=9)。结论　该
　　基金项目:国家药典委员会国家药品标准提高行动计划工作。
作者简介:龙海燕 , 女 , 副主任药师 , 主要从事中药标准研究 , Tel:13548954035 , E-m ail:f yules@sina.com
Cen t ral South Pharmacy.June 2010 , Vol.8 No.6　中南药学 2010年 6月第 8卷第 6期
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方法专属性强 , 灵敏度高 , 重现性好 , 可用于复方青果颗粒的质量控制。
关键词:复方青果颗粒;没食子酸;高效液相色谱
中图分类号:R927.2 , R917　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672-2981 (2010)06-0416-04
Determination of gallic acid in Fufang Qingguo Keli by HPLC
LONG Hai-yan , PENG Fei-cheng , YAO Rong (Hunan Institute for Drug Control , Changsha 410001)
Abstract:Objective　 To establish the determination method for Fufang Q ingguo Ke li.Methods　The content o f g allic
acid w as de te rmined by HPLC.Agilent TC-C18 column w as used w ith me thanol-0.1% pho sphoric acid solution (5∶
95)as the mobile phase a t 0.8 mL ·min -1 .The detective w aveleng th w as 273 nm.Results　The calibr ation curve of
gallic acid w as linea r a t 22.64-113 2 ng , the average recovery was 100.3%, and RSD w as 1.9% (n=9).Conclusion
　The method is se lective , sensitive and reproducibile , w hich can be used for the quality cont rol o f Fufang Q ingguo
Ke li.
Key words:Fufang Q ingguo Keli;gallic acid;HPLC
　　复方青果颗粒由青果 、 诃子 、 麦冬 、 玄参 、 甘草 、 金
果榄 、 胖大海 7 味药材组成 , 具有清热利咽之功效 , 用于口
干舌燥 , 声哑失音 , 咽喉肿痛等 , 该品种收载于 《卫生部药
品标准中药成方制剂第七册》 [1] , 现行质量标准无含量测定
项目。湖南省药品检验所受国家药典委员会委托 , 承担了该
品种的质量标准提高工作。因处方中青果具有清热利咽 , 生
津解毒之功效 , 与胖大海共为君药;而诃子具有涩肠敛肺 ,
降火利咽之功效 , 与青果 、 胖大海共凑利咽解毒之功 , 是为
佐使之药。为了更好的控制其质量 , 采用 HPLC 法对本品
的青果及诃子中没食子酸的含量进行了定量研究。
1　仪器与试药
1.1　仪器
Agilent 1200 高效液相色谱仪 , Ag ilent VWD 紫外检测
器 (美国 Agilent), Agilent TC-C18色谱柱 (250 mm ×4.6
mm , 5μm), CG-300 超声清洗仪 (青岛港威), AE240 电
子天平 (德国梅特勒)。
1.2　试药与试剂
没食子酸对照品 (中国药品生物制品检定所 , 供含量测
定用 , 批号:110831-200803);7 批复方青果颗粒 [ 华禾药
业冷水江制药有限责任公司 , 批号:20070708 、 20070709 、
20070710、 20080320 、 20080321 、 20080322 、 20080901 , 规
格:10 g·袋-1 (相当于药材约 11 g)] , 甲醇为色谱纯 , 水
为纯净水 , 其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果[ 2-12]
2.1　色谱条件
色谱柱:Agilent TC- C18色谱柱;流动相:甲醇-0.1%
磷酸溶液 (5∶95);流速:0.8 mL ·min -1 ;检测波长:273
nm;柱温:35 ℃, 进样量:5 μL。
2.2　溶液的制备
2.2.1　对照品溶液的制备 　精密称取没食子酸对照品
11.32 mg , 置 50 mL 量瓶中 , 加入甲醇适量 , 振摇使溶解 ,
加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 即得浓度为 0.226 4 mg · mL-1
对照品溶液①。
2.2.2　供试品溶液的制备　取本品适量 , 研细, 取约0.5 g ,
精密称定 , 置具塞锥形瓶中 , 精密加入甲醇 50 mL , 称定重
量 , 超声处理 40 min (功率 300 W , 频率 25 kH z), 放冷 ,
称重 , 用甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 , 取续滤液 , 即
得。
2.2.3　阴性样品溶液的制备　按处方称取除青果和诃子以
外的其余各药材适量 , 按制备工艺制成缺青果和诃子的阴性
样品 , 同法制备缺青果和诃子的阴性样品溶液。
2.3　系统适用性实验
　　分别取对照品 、 供试品和阴性样品溶液各 5 μL , 按
“ 2.1” 项色谱条件进行测定 , 记录色谱图。结果供试品中没
食子酸分离度好 , 阴性样品无干扰 (见图 1)。
图 1　没食子酸 HPLC图
Fig 1　HP LC of gallic acid
A.对照品 (reference subs tance);B.供试品 (sam ple);C.阴性
样品 (negative sam ple);1.没食子酸 (galli c acid)
2.4　线性关系
中南药学 2010年 6月第 8卷第 6期　Cent ral Sou th Pharmacy.June 2010, Vol.8 No.6
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　　精密吸取对照品溶液①10 、 20 mL , 分别置 50 mL 容量
瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 即得对照品溶液②、 ③。
精密吸取对照品溶液③5、 25 m L , 分别置 50 m L容量瓶中 ,
加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 即得溶液④、 ⑤, 精密吸取对照
品溶液①～ ⑤各 5 μL 进样 , 测定其峰面积积分值 , 以进样
量 (ng)为横坐标 , 峰面积积分值为纵坐标 , 绘制标准曲
线 , 线性回归方程为:Y =3.996X -0.354 6 , r=0.999 9。
结果表明:没食子酸对照品在 22.64 ～ 1 132 ng 与峰面积线
性关系良好。
2.5　精密度试验
精密吸取同一供试品溶液 (批号:20070709), 进样 6
次 , 每次 5 μL , 依法测定 , 其没食子酸峰面积积分值的
RSD为 0.70%, 结果表明仪器精密度良好 。
2.6　稳定性试验
取同一批样品 (批号:20070709)5 μL , 在 0、 4、 8 、
12、 16、 24 h 分别进样 , 测定峰面积积分值 , RSD 为
0.62%, 结果表明 , 供试品溶液在 24 h 内基本稳定。
2.7　重复性试验
取同 一批 样品 (批 号:20070709) 5 份 , 分 别按
“ 2.2.2” 项下方法制备供试品溶液 , 按样品含量测定方法测
定结果没食子酸的平均含量为 5.07 mg · g-1 , RSD 值为
0.52%。
2.8　回收试验
取 9个具塞锥形瓶 , 各称取已测定含量的同一批 (批
号:20070709)样品粉末约 0.15、 0.25、 0.5 g , 各 3 份 ,
精密称定 , 各精密加入对照品适量 (见表 1), 按 “ 2.2.2”
项下方法制备供试品溶液;按 “ 2.1” 项下色谱条件测定并
计算 , 结果没食子酸的平均回收率为 100.3% , RSD 为
1.9%。
表 1　回收试验结果 (n=9)
Tab 1　Recovery (n=9)
编号
(No.)
取样量
(sample amoun t)
/ g
样品中含量
(sample content)
/mg
加入量
(added am ount)
/m g
测得量
(detected content)
/mg
回收率
(recovery)
/ %
平均回收率
(average recovery)
/%
RSD
/ %
1 0.149 2 0.756 6 0.678 4 1.455 4 103.0
2 0.150 9 0.765 2 0.678 4 1.458 8 102.2
3 0.143 5 0.727 7 0.678 4 1.400 2 99.1
4 0.247 5 1.255 1 1.130 7 2.378 2 99.3
5 0.248 4 1.259 7 1.130 7 2.360 6 97.4 100.3 1.9
6 0.244 9 1.241 9 1.130 7 2.353 8 98.3
7 0.496 9 2.519 9 2.261 5 4.816 9 101.6
8 0.504 5 2.558 4 2.261 5 4.841 8 101.0
9 0.504 1 2.556 4 2.261 5 4.829 2 100.5
2.9　检测限试验
精密量取对照品溶液⑤2 mL , 置 100 mL 量瓶中 , 加甲
醇稀释至刻度 , 摇匀 , 即得对照品溶液⑥(0.090 56 μg ·
mL-1), 精密吸取对照品溶液⑥2 μL , 注入液相色谱仪 , 测
定 , 信噪比约为 3 , 故检测限为 0.18 ng 。
2.10　定量限试验
精密量取对照品溶液③2 mL , 置 100 mL 量瓶中 , 加甲
醇稀释至刻度 , 摇匀 , 即得对照品溶液⑦(0.905 6 μg ·
mL-1), 精密吸取对照品溶液⑦1 μL , 注入高效液相色谱
仪 , 测定 , 信噪比约为 10 , 故定量限为 0.90 ng 。连续测定
6次 , 其峰面积积分值的 RSD为 2.3%, 说明结果良好。
2.11　样品测定
取 7 批样品 , 按 “ 2.2.2” 项下方法制备供试品溶液;
按 “ 2.1” 项下色谱条件测定并计算 , 结果见表 2。
　　7 批样品的平均含量为 4.23 mg · g -1 , 因中国药典
2005 版一部青果 、 诃子暂无 【含量测定】项 , 根据文献报
道[ 3-4] , 青果中没食子酸含量约为 0.2%, 诃子中没食子酸
含量约为 1.04%, 以此限度折算本品理论含量为 2.68 mg·
g-1 。按测定样品的平均值的 80%规定限度为 3.4 mg· g -1 ,
可能文献报道数据的代表性尚有欠缺 , 故暂以多批样品测定
平均值的八折规定为限度。
3　讨论
表 2　样品含量测定结果表
Tab 2　Sample determination
批号
(batch No.)
没食子酸含量
(content of gallic
acid)/mg· g -1
平均含量
(average con tent)
/mg· g -1
相对偏差
(relat ive
deviation)/ %
20070708 4.99　5.06 5.02 0.69
20070709 5.06　5.08 5.07 0.19
20070710 5.12　5.09 5.10 0.29
20080320 3.63　3.63 3.63 0
20080321 3.59　3.54 3.56 0.70
20080322 3.53　3.53 3.53 0
20080901 3.62　3.72 3.67 1.36
3.1　测定指标的选择
经查阅文献[ 7-9]本品处方中青果 、 诃子中均含有没食子
酸 , 而没食子酸具有抗菌抗病毒作用[ 13] , 该作用与本品的
【功能与主治】“清热利咽” 有明显相关性 , 故选择了青果 、
诃子中共有的没食子酸为测定指标。
3.2　提取溶剂的选择
考察了甲醇 、 50%甲醇 、 30%甲醇及流动相 4种溶剂的
提取效率 , 结果表明 , 用流动相作为提取溶剂的得率最小 ,
其他 3种溶剂的得率无明显差异 , 但用甲醇提取的溶液杂质
较少 , 颜色较浅 , 因此选择甲醇为提取溶剂。
Cen t ral South Pharmacy.June 2010 , Vol.8 No.6　中南药学 2010年 6月第 8卷第 6期
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3.3　检测波长的选择
对没食子酸的甲醇溶液在 200～ 400 nm 进行扫描 , 结果
在 272.0 nm 波长处有最大吸收。中国药典 2005年版一部收
载了 2 个采用高效液相色谱法测定没食子酸含量的品种 , 其
质量标准中均选用 273 nm 作为测定波长[ 14] , 故也选择 273
nm 作为检测波长。
3.4　根据国家药典委员会的有关技术要求设计的回收率实
验情况说明
本品种为我单位承担的国家药品标准提高行动计划品
种。按照国家药典委员会下达的质量标准起草技术要求 , 回
收率试验设计为三水平:低水平为含量限度的 50%～ 80%,
中水平为限度的 100%～ 150%, 高水平为限度的 200%～
500%。本次实验中采用的低 、 中 、 高 3 水平依次为限度的
80%、 140%、 280%。
3.5　复核单位对该方法的评价
该方法已经由国家药典委员会指定的另一家国家认
可实验室复核 , 对方对该方法的评价是:方法可行 , 重
现性好。
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(收稿日期:2010-03-22;修回日期:2010-04-29)
HPLC-MS/MS同时测定人血浆中对
乙酰氨基酚和咖啡因含量的方法学研究
李莉明1 , 彭向东2 , 阳国平2 , 王学峰2＊ , 王大为3 (1.长沙市妇幼保健院 , 长沙　410007;2.中南大学湘三医
院 , 长沙　410013;3.中西医结合医院 , 南京　210014)
摘要:目的　建立同时测定人血浆中对乙酰氨基酚和咖啡因浓度的 HPLC-MS/MS 法。方法　以茶碱为内标 , 血浆
样品用甲醇沉淀蛋白后直接进样。用Waters symmetry C18(150 mm×4.6 mm , 5 μm)为分析柱 , 甲醇-0.2 %醋酸=
35∶65 (v/ v)为流动相 , 流速为 0.9 mL·min-1 , 采用柱后分流 , 0.2 mL· min -1进入质谱 , 柱温 35 ℃。 选择监
测的离子为 m/z 152.1※109.9 (对乙酰氨基酚)、 m/ z 195.3※138.1 (咖啡因)和 m/ z 181.1※123.9 (茶碱)。结
果　血浆中对乙酰氨基酚和咖啡因的线性范围分别为 0.02～ 4.04 μg ·mL -1 , 5.05 ～ 1 010 ng·m L-1 ;日内日间精
密度 RSD均<7.94%。结论　本方法专属性强 , 灵敏度高 , 操作简便 、 快速 , 符合生物样品分析要求 , 适用于临
床药动学研究。
关键词:对乙酰氨基酚;咖啡因;高效液相色谱-质谱/质谱;药动学
中图分类号:R927.2 , R969.1　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672-2981 (2010)06-0419-04
　　作者简介:李莉明 , 女 , 主管药师 , 主要从事医院药学工作 , Tel:13517482243 , E-mai l:lily 95405@126.com 　　＊通讯作者:王学
峰 , 男 , 副主任药师 , 主要从事药物新剂型研究 , Tel:(0731) 88618643 , E-m ail:394011411@qq.com
中南药学 2010年 6月第 8卷第 6期　Cent ral Sou th Pharmacy.June 2010, Vol.8 No.6