全 文 ：第 3 期 施中凯 等 林茜草根醇提取物对 S － 180 荷瘤小鼠抗肿瘤活性试验研究
2011 年 9 月第 34 卷第 3 期 成都中医药大学学报
Sept. 2011，Vol. 34，No. 3 Journal of Chengdu University of TCM
林茜草根醇提取物对 S － 180 荷瘤
小鼠抗肿瘤活性试验研究
施中凯1 胡晓丽1 尤玉红1 罗志文2 张跃华2
(1． 黑龙江省省医院 实验诊断部，黑龙江 哈尔滨 150036;2． 佳木斯大学 生命科学学院，黑龙江 佳木斯 154007)
摘 要:用林茜草根醇提取物给予 S － 180 荷瘤小鼠连续灌胃，10 d 后测定林茜草根醇提取物对荷 S
－ 180 瘤小鼠抑瘤率、碳粒廓清指数、小鼠外周血 －肿瘤坏死因子 (TNF － α)和白介素 － 2 (IL － 2)含
量的影响。结果表明，林茜草根醇提取物对荷 S － 180 瘤小鼠肿瘤的抑瘤率达 39. 67%，可提高小鼠吞噬
碳粒廓清的指数，血清中 IL － 2 和 TNF － α的含量同样提高显著。试验结果揭示，林茜草根醇提取物抑制
S － 180 荷瘤小鼠的抗肿瘤机理可能同增强和提高宿主的免疫功能相关。
关键词:林茜草;根醇提取物;碳粒廓清指数;肿瘤坏死因子-α;白介素-2
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1004-0668 (2011)03-0041-03
基金项目:黑龙江省卫生厅科学技术研究项目 (编号:2007 － 511)
作者简介:施中凯，男，1972 年 9 月生;副主任医师;通讯作者:张跃华，男，1962 年 12 月生，副教授;研究方向:中
药抗肿瘤研究。
Study of Rubia Sylvatica from Roots by Ethanol Anti-tumor Activity
on S-180Tumor-bearing Mice
SHI Zhong-Kai1 HU Xiao-Li1 YOU Yu-Hong1 et al
(1． The Provincial Hospital of Heilongjiang，Harbin，150036，China ;2． The school of life science，Jiamusi university，Jiamusi 154007，China)
［Abstract］:Ethanol extract of roots by Rubia sylvatica to pose S-180 tumor-bearing mice fed with 10d after the determination of
S-180 mice bearing tumor inhibition rate，carbon clearance index，peripheral blood-tumor necrosis factor (TNF-α)and self-interleu-
kin-2 (IL-2)content． The results showed that the alcohol extract of roots Rubia sylvaticai S-180 tumor bearing mice with tumor inhibi-
tion rate was 39. 67%，In the same time，it can increase the carbon clearance phagocytes’index of mice，serum IL-2 and TNF-α lev-
els also increased significantly． The results suggest that inhibition of ethanol extract of roots Rubia sylvatica S-180 mice bearing tumor
mechanism may enhance and improve the host immune response．
［Key words］:Rubia sylvatica;from Roots by Ethanol;carbon clearance index;tumor necrosis factor TNF-α;IL2
林茜草 (Rubia sylvatica)系茜草科茜草属植
物［1］，主要分布在我国东北地区［2］。关于该属植
物茜草的化学成分，国内学者侯柏玲、王素贤对东
北产的林茜草进行了化学成分的研究［3-5］，从该植
物根的醇提取物中分离得到 11 种化合物，分别为
5 － 羟基 － 萘并 ［1，2-b］ 呋喃 － 4 － 羧酸甲酯
(Ⅰ) ，大叶茜草素 (Ⅱ)、1 －羟基 － 2 －甲基蒽醌
(Ⅲ)、β －谷甾醇 (Ⅳ)、胡萝卜甙 (Ⅴ)、1，3，
6 －三羟基 － 2 －甲基蒽醌 － 3 － O － (6’ －乙酰
基)新橙皮糖甙 (Ⅵ)、1，3，6 －三羟基 － 2 －甲
基蒽醌 － 3 － O 新橙皮糖甙 (Ⅶ)、萘酸双糖苷
(Ⅷ)、1，3，6 －三羟基 － 2 －甲基蒽醌 － 3 － O －
(3’，6’ － O －二乙酰基) － α －鼠李糖 － β － D －
葡萄糖苷 (Ⅸ)、1，3，6 －三羟基 － 2 －甲基蒽醌
·14·
DOI:10.13593/j.cnki.51-1501/r.2011.03.020
成都中医药大学学报 2011 年第 34 卷
－ 3 － O － (4’，6’ － O －二乙酰基) － α －鼠李
糖 － β － D －葡萄糖苷 (Ⅹ)、1，3，6 －三羟基 － 2
－甲基蒽醌 － 3 － O － β － D －葡萄糖苷 (Ⅺ)。本
试验研究了林茜草根醇提取物对小鼠 S － 180 肉瘤
的抑制作用及对小鼠机体免疫功能的影响，用以探
讨林茜草根醇提取物抗肿瘤的作用机制。
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 林茜草
野生林茜草采自黑龙江省汤原县境内大亮子河
国家原始森林公园，并将部分植株移栽于黑龙江省
佳木斯大学校区万红花卉研究所内。
1. 1. 2 抑瘤率检测瘤细胞株
S － 180 荷瘤小鼠腹水肿瘤细胞株的小鼠种鼠，
购于哈尔滨医科大学第一附属医院。
1. 1. 3 实验动物
实验用小鼠由佳木斯大学实验动物中心提供的
健康成年昆明种小鼠，依据实验要求选择性别、体
重及动物个体数量，实验前经 1周适应性饲养观察。
1. 1. 4 试剂和仪器
环磷酰胺，江苏连云港恒瑞药业有限公司产
品，批号:20060312089 － 3;The carbon clearance
index生产商为山东青岛海博生物技术有限公司;
TNF － α 试剂盒，上海锐谷生物科技有限公司提
供;IL － 2 试剂盒，上海工硕生物技术有限公司;
其它常规试剂生产商为天津凯达试剂公司，均为分
析纯;分析仪器 752 －紫外分光光度计，上海精密
仪器设备公司产品。
1. 2 方法
1. 2. 1 林茜草醇提取物
取林茜草根用清水冲洗干净并阴干，低温干
燥，称量 50. 0 g，用 95% 乙醇热回流提取 4 次，
回收乙醇，浓缩，残渣重复提取 3 次，滤液合并、
浓缩，加适量双蒸水稀释至 50. 0 mL，以此作为林
茜草根的乙醇提取物原液，澄清黄褐色液体，分装
密封于 10 mL玻璃安瓶后 120℃灭菌 5 min ，待用。
1. 2. 2 荷瘤小鼠模型制备［7］
S － 180 腹水瘤细胞以无菌方法接种于实验小
鼠腹腔内，每只小鼠接种浓度为 1 × 1013个 /mL 的
S － 180 腹水瘤细胞稀释液 1. 0 mL，腹腔传代 1 ～ 2
次;每次处理 8 ～ 10 只，每个处理接种选取腹腔内
接种 8 d 且生长良好的腹水型 S － 180 荷瘤小鼠，
颈椎脱臼处死，无菌条件下抽提腹水，用生理盐水
稀释细胞浓度至 1 × 104个 /mL，接种于试验小鼠左
右后肢腹股沟处的皮下，每只试验小鼠接种 0. 10
mL。
1. 2. 3 实验动物分组及给药方法
实验小鼠造模 24 h后，将 90 只实验小鼠随机
分成对照组、环磷酰胺组和林茜草根醇提取物组
(雌雄分开饲养)。对照组每日灌胃生理盐水 0. 3
mL，并腹腔注射生理盐水 0. 2 mL。环磷酰胺组灌
胃生理盐水 0. 3 mL，并腹腔注射环磷酰胺 (20
mg /kg·d)0. 2 mL。林茜草根醇提取物组灌胃林
茜草根醇提取物 (0. 40 g /kg·d)0. 3 mL，并腹腔
注射生理盐水 0. 2 mL。连续给药处理 10 d，每天
上午灌胃、注射 1 次。
在实验末日给药 24 h 后处死实验小鼠，剥离
皮下实质瘤体同时用薄铝箔称瘤体质量，依据下列
公式计算抑瘤率。
抑瘤率 (%) = (对照组瘤重 －药物处理组瘤
重) /对照组瘤重 × 100%。 Eq － 1
1. 2. 4 碳粒廓清吞噬指数测定［8］
取末次给药 24 h后的实验小鼠，按 0. 1 mL /10
g体重的剂量在小鼠尾静脉注射稀释 3 倍的印度墨
汁。注射前用消毒温热的纱布热敷小鼠尾部，2
min和 15 min后，分别从实验小鼠的内呲静脉丛取
血 20 μL，用 2. 0 mL 的 Na2CO3 溶液稀释，以
Na2CO3 溶液作空白对照，用可见分光光度计测定
在 600 nm处的 A值。小鼠取血后处死，取肝和脾
脏用铝箔称重，计算碳粒廓清指数 (k)和吞噬指
数 (a)。
K = (㏒ w2 －㏒ w15) / (T15 － T2) Eq － 2
A =体重 /肝和脾重 × K1/3 Eq － 3
式中:a2:注射后 2 min所取血样的吸光度;
a15:注射后 15 min所取血样的吸光度;
T15 － T2:为两次取血样的间隔时间。
1. 2. 5 S － 180 荷瘤模型鼠外周血 IL － 2 和 TNF －
α的测定
取末次给药 24 h 后实验小鼠，眼球取血，取
全血室温静止 2 h后，抽取上部血清测定 IL － 2 和
TNF － α含量［7］。
1. 2. 6 试验数据的统计处理
实验数据全部采用以均数加减标准差 (珋x ± s)
方法表示，并采用 SPSS 13. 0 版统计学软件进行统
计计算数据分析，试验数据样本均数的比较均采用
t检验分析数据方法。
2 结果与分析
2. 1 林茜草根醇提取物对荷瘤小鼠抑瘤率的影响
林茜草根醇提取物和环磷酰胺对 S － 180 荷瘤
小鼠的抑瘤率分别是 39. 67%和 49. 53% (见表 1) ，
·24·
第 3 期 施中凯 等 林茜草根醇提取物对 S － 180 荷瘤小鼠抗肿瘤活性试验研究
与对照组比较差异显著 (P ＜ 0. 05)。
表 1 林茜草根醇提取物对荷瘤小鼠的抑瘤率
n 平均瘤重 (g) 抑制率 (%)
对照组 9 2. 71 ± 0. 39
环磷酰胺组 9 1. 41 ± 0. 19* 49. 53
林茜草根醇提取物组 9 1. 61 ± 0. 23* 39. 67
与对照组比较，* P ＜ 0. 05
2. 2 林茜草根醇提取物对 S － 180 荷瘤小鼠碳粒廓
清指数的影响
表 2 中数据表明，环磷酰胺和林茜草根醇提取
物对 S － 180 荷瘤小鼠碳粒廓清指数的影响，与对
照组比较都有极显著差异 (P ＜ 0. 01) ，但不同的
是前者小鼠的 k值和 α值明显降低，后者小鼠的 k
值和 α值则明显升高。
表 2 林茜草根醇提取物对碳粒廓清指数的影响
n 碳粒廓清指数 (k) 吞噬指数 (α)
对照组 9 0. 0249 ± 0. 0037 2. 8760 ± 0. 2698
环磷酰胺组 9 0. 0129 ± 0. 0015＊＊ 2. 2899 ± 0. 2356＊＊
林茜草根醇提取物组 9 0. 0345 ± 0. 0030＊＊ 3. 9300 ± 0. 1965＊＊
与对照组比较，＊＊P ＜ 0. 01
2. 3 林茜草根醇提取物对 S － 180 荷瘤小鼠外周血
TNF － α和 IL － 2 的影响
林茜草根醇提取物组血清 IL － 2 的含量与对照
组比较有极显著差异 (P ＜ 0. 01) ，见表 3;林茜草
根醇提取物组与环磷酰胺组血清的 TNF － α 含量
(P ＜ 0. 05)显著提高;环磷酰胺 IL － 2 的含量与
对照组比较则差异不明显。
表 3 林茜草根醇提取物对血清中 TNF － α和 IL － 2
含量的影响 (珋x ± s)
n 白介素 － 2IL － 2 (ng /mL)
肿瘤坏死因子
TNF － α (ng /mL)
对照组 9 3. 69 ± 0. 28 0. 95 ± 0. 24
环磷酰胺组 9 3. 31 ± 0. 51 1. 87 ± 0. 22*
林茜草根醇提取物组 9 4. 54 ± 0. 51＊＊ 2. 67 ± 0. 31*
与对照组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
3 讨论
本试验发现，林茜草根醇提取物可显著提高 S
－180 荷瘤小鼠的 k和 α值，增加网状内皮细胞功
能，从而提高荷瘤小鼠的免疫功能。林茜草根醇提
取物可明显提高 S － 180 荷瘤小鼠血清中的 IL － 2
和 TNF － α的分泌水平;IL － 2 是机体重要的免疫
调节因子，在体细胞网络中起关键作用，如可诱导
细胞毒 T细胞 (CTL)的分化诱生 LAK细胞。CTL
和 LAK是重要的杀瘤细胞;IL － 2 还可以诱生干扰
素 (IFN)的产生。TNF － α 是迄今发现的抗肿瘤
作用最强的细胞因子，可以通过多条途径杀伤肿瘤
细胞以达到抗肿瘤作用，如 TNF － α 对肿瘤细胞直
接的细胞毒性;TNF － α 能损伤瘤体周围的血管内
皮组织，形成血栓，阻断肿瘤的血液营养供应，致
使肿瘤组织出血、坏死，肿瘤组织高度空泡样变
性;TNF － α 可以诱发肿瘤组织局部的炎症反应，
增强粘附分子和 IL － 2 受体的表达，增强白细胞的
趋化作用，提高肿瘤细胞对白细胞的敏感性［10］，
诱发肿瘤发生坏死反应。本试验提示，林茜草根醇
提取物抗肿瘤作用与荷瘤机体产生免疫因子相关。
肿瘤的发生及其对治疗的耐受与细胞凋亡
(Apoptosis，APO)的抑制有密切关系［9］。细胞凋
亡与坏死相比其所需刺激量小，细胞膜完整性好，
所形成的凋亡小体迅速被周围细胞吞噬，对机体影
响小，因此，诱导细胞凋亡已成为肿瘤治疗的新模
式。国内外学者报道，一些中药复方或单味药的有
效成分亦能诱导肿瘤细胞凋亡。中医中药治疗肿
瘤，是我国在肿瘤治疗领域的独到之处。临床实践
表明，单独用中药或中西医结合治疗肿瘤疗效确
切［11］，同时能减轻放化疗的毒副作用。
参考文献
［1］ 中华人民共和国药典委员会 . 中华人民共和国药典
［S］． 北京:化学工业出版社，2000． 245-247．
［2］ 中国医学科学院药用植物资源开发研究所． 茜草属药
用植物的研究 －Ⅰ． 中药茜草的原植物与国内资源
［J］． 天然产物研究与开发，1991，13 (4) :7-15．
［3］ 侯柏玲，王素贤． 林茜草化学成分的研究 ［J］． 中草
药，2000，31 (7) :492-494．
［4］ 华会明，王素贤，吴立军，等． 茜草中萘酸酯类成分
的研究 ［J］． 药学学报，1992． 27 (40) :279-281．
［5］ Mazzio E． A and Soliman K． F． In Vitro Screening of
Tumoricidal Properties of International Medicinal Herbs:
Part II． Elizabeth A． Mazzio and Karam F． A． Soliman
［J］． Phytother Res，2010，24 (12) :1813-1824．
［6］ Liu Xi，Li Fei and Zhang Li． Experimental Research on
the Effects of the Honey － Boiled Parent Root of Aconitum
Carmichael on the Immune Function in the H-(22)-
Bearing Mice ［J］． Beijing University of Traditional Chi-
nese Medicine，2004，27 (2) :68-70．
［7］ 吕延杰． 药理学实验指导 ［M］． 北京:人民卫生出版
社 (2008) :117．
［8］ 曾雪瑜，李友娣，陈力力，何飞． 香菇菌多糖对免疫
低下小鼠的免疫调节作用 ［J］． 中国中药杂志，
1989，14 (2) :46-49．
［9］ 常徽． 植物黄酮抗肿瘤效应的结构 －效应关系及 ROS相
关作用机制研究 ［D］． 第三军医大学，2008，123-127．
［10］ 韩慧敏． 肿瘤坏死因子 (TNF － α)对耐药肿瘤细胞
凋亡诱导作用的研究 ［D］． 大连医科大学，2007:
123-125．
［11］ 胡松． 复方鹰不泊对环磷酰胺免疫抑制小鼠血清 IFN
－ γ、IL － 2 及血 T 淋巴细胞亚群影响的研究 ［D］．
湖南中医学院，2004，57-60 ．
(收稿日期:2011-05-12 责任编辑:薛红)
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