全 文 ：中草药三叶青抗肿瘤作用机制实验研究和临床应用
魏克民　丁刚强　浦锦宝　梁卫青　郑军献　胡轶娟　祝永强
摘　要　目的　拟对民间常用中草药三叶青抗恶性肿瘤作用机制做深入的实验研究 , 并在此基础上按《保健食品注册管理
办法(试行)》要求以三叶青为主 ,配以药食同用的黄芪 、人参皂苷制成制剂金芪片经过临床验证研制成抗恶性肿瘤的功能性保
健食品。方法　按《保健食品检验与评价技术规范》对三叶青进行抗肿瘤功能实验 、提高人体免疫功能实验和食品安全性毒理学
评价实验 , 证实三叶青有明显抗肿瘤作用 , 且长期服用安全无毒。以三叶青为主配以黄芪 、人参皂苷制成的制剂金芪片经临床验
证 , 证实疗效确切无毒副反应。结果　各项实验结果证实三叶青及金芪片提取物对人体肝癌细胞 HepG2活性具有较强抑制作
用 , 对小鼠 HepG2细胞的端粒酶基因表达有抑制作用 ,并又增强小鼠细胞免疫和体液免疫功能的作用。三叶青提取物经急性毒
性试验及长期毒性实验证实安全无毒。金芪片临床验证:120例恶性肿瘤病人服用 90天 , 完全缓解 52例 , 部分缓解 42例 , 稳定
18例 , 进展 8例 ,总有效率 78.33%。结论　表明三叶青及其制剂金芪片对恶性肿瘤病人有较好的效果 ,值得推广 , 并可期盼做
进一步研究开发成抗恶性肿瘤新药。
关键词　三叶青　恶性肿瘤　免疫　细胞凋亡
StudyontheAnti-tumorMechanismandtheClinicalApplicationofTetrastigmaHemsleyanumDielset.Gilg.　WeiKemin, ZhejiangA-
cademyofChineseMedicine, Hangzhou, Zhejiang310007 , China
Abstract　Objective　Torevealtheanti-tumormechanismofTetrastigmaHemsleyanumDielset.Gilgpenetratinglyandmakeit
intoanewpraeparatum-JinqiPian, andfurtherlyevaluatetheanti-tumorefectsofJinqiPianintheclinicalapplication.Methods　We
studytheanti-tumorefectsandmechanismofTetrastigmaHemsleyanumDielset.Gilg, andevaluatethetoxicityofTetrastigmaHemsley-
anumDielset.GilgaccordingtotheSFDA regulationonsupplementfood.Intheclinicalapplication, weevaluatetheanti-tumorefects
anditstoxicityofJinqiPian.Results　TheextractofTetrastigmaHemsleyanumDielset.Gilghaveasignificanttoxicologicalefectonhep-
atocellularcarcinomacelllineHepG2 , asitwasconformedtoinhibitthegeneexpressionoftelomeraseofHepG2 , andenhanceimmune
functionofmiceincludingcelarimmunityandhumoralimmunity, andthesecouldbesomeoftheanti-tumormechanismsofTetrastigma
HemsleyanumDielset.Gilg.ThetoxicityexperimentindicatedthatthetoxicityofTetrastigmaHemsleyanumDielsetisverylow.Inthe
clinicalapplication, 52 patientsarerecovered, 42patientsarerelieved, 18patientarelasting, and8patientsareminorrelievedinthe120
patientswithtumor, andthetotalefectiverateis78.3%, andwefoundnoobviouslytoxicityofJinqiPian.byoraluseinourstudy.Con-
clusions　TetrastigmaHemsleyanumDielset.GilganditspraeparatumJinqiPianpossessedasignificantanti-tumorefectswithoutno
obviouslytoxicity, andfurtherstudyneededbeforetheyweremadeintoonekindofnewdrug.
Keywords　TetrastigmaHemsleyanumDielset.Gilg;Malignanttumor;Immunity;Apoptosis
　　基金项目:浙江省经贸委资助项目
作者单位:310007　杭州 ,浙江省中医药研究院
　　中医中药的推广应用为恶性肿瘤的防治开辟了
广阔的前景 ,是我国在肿瘤防治独具特色的有效方
法 。近 5年来我们浙江省中医药研究院中药资源重
点学科和浙江省疾病防治控制中心对中草药三叶青
抗恶性肿瘤作用机制作了较深入的实验研究 ,并按规
定申报制剂 “金芪片”做了临床验证 ,积累了一定的
科研资料 ,试着以三叶青为主要原料开发研制成一个
具有确切疗效 、无明显不良反应 、使用安全 、有中国特
色的新一代防治恶性肿瘤的治疗药物 。
三叶青为葡萄科崖爬藤属植物 ,学名为三叶崖爬
藤 TetrastigmaHemsleganumDielset.Gilg.,又名金钱
吊葫芦 、蛇附子 、三叶对 、小扁藤 、三叶扁藤 、拦山虎 、
雷胆子 ,主要分布于我国西南及浙江 、江西 、安徽 、福
建 、台湾 、湖北 、湖南 、广东 、广西等省区。三叶青以块
根或全草入药 。具有清热解毒 、祛风化痰 、活血镇痛
等功效 。用于治疗高热惊厥 、肺炎 、哮喘 、肝炎 、风湿 、
月经不调 、咽痛 、瘰疬 、痈疔疮疖及恶性肿瘤 ,均具有
很好的疗效 [ 1 ～ 3] 。
三叶青的化学成分 ,从其石油醚萃取物中已分离
出 4个化合物:蒲公英萜酮 、蒲公英萜醇 、 β -谷甾
醇 、麦角甾醇 [ 3] 。经实验研究证实三叶青提取物对
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　　医学研究杂志　2007年 11月　第 36卷　第 11期 ·论　　著 · 　
人体肝癌细胞 HepG2活性具有较强的抑制作用 ,对
小鼠 HepG2细胞的端粒酶基因表达具有抑制作用 ,
而对正常原代培养的大鼠肝细胞活性没有明显毒性
作用。三叶青提取物具有增强小鼠细胞免疫和体液
免疫功能的作用 ,并对 K562和 A549细胞周期具有
阻滞作用 ,对 K562和 HepG2细胞促进凋亡作用 ,在
蛋白质水平和 mRNA水平对 K562细胞中促凋亡基
因 BAX均有上调作用 ,对 K562细胞和 HepG2细胞
增生和端粒酶基因的表达具有显著抑制作用 ,由此表
明三叶青具有明显的抗肿瘤作用[ 1] 。
三叶青按 《保健食品检验与评价技术规范 》
(2003年版)中 “食品安全性毒理学评价试验 ”进行
实验 ,结果表明急性毒性试验小鼠经口 LD50 >20g/
kg,属实际无毒 ,长期毒理学研究结果证实:三叶青的
大鼠 30日喂养试验 ,未见试验动物出现中毒症状 ,大
体解剖及组织学观察未见异常病理改变 。对大鼠体
重 、进食量 、食物利用率 、血象 、血生化均无明显影响。
三叶青高剂量组雌 、雄性动物的剂量为人体推荐剂量
[ 60mg/(kg· d)]的 120倍[ 4, 5] 。证实中草药三叶青
长期服用安全无毒。
根据卫生部颁发的 《保健食品检验与评价技术
规范》(2003年版)中的 “保健食品功能学评价程序
和检验方法规范 ”对三叶青进行增强免疫力功能检
验 。结果:(1)实验动物的体重 、胸腺 /体重比值和脾
脏 /体重的检测结果表明 ,三叶青(相当于人体推荐
摄入量的 5倍 、10倍 、20倍)对动物的体重 、胸腺 /体
重比值和脾脏 /体重比值未见明显影响。 (2)ConA
诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验结果表明 ,三叶青具
有增强小鼠细胞免疫功能的作用 。 (3)二硝基氟苯
诱导小鼠迟发型变态反应试验结果表明三叶青具有
增强小鼠细胞免疫力功能的作用 。 (4)抗体生成细
胞检测试验结果表明:三叶青对小鼠体液免疫功能未
见明显影响 。(5)血清溶血试验测定结果表明:三叶
青对小鼠体液免疫功能未见明显影响 。 (6)小鼠碳
廓清试验结果表明:三叶青具有增强小鼠单核吞噬细
胞吞噬功能的作用。 (7)小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡
红细胞试验结果表明:三叶青具有增强小鼠巨噬细胞
吞噬功能的作用 。(8)NK细胞活性测定试验结果表
明:三叶青具有增强 NK细胞活性的作用。以上 8项
试验表明三叶青具有增强免疫力功能作用 。
由杭州天惠医药科技有限公司研制开发生产的
“金芪片 ”主要成分为三叶青 、黄芪提取物 、人参皂
苷 ,是一种适合肿瘤病人及其他免疫力低下的人群长
期服用的功能性保健食品 。金芪片的组方原则:用三
叶青清热解毒 、活血化瘀 、利气化痰 、祛风镇痛 ,提高
免疫功能之功效 ,配伍黄芪补气益血 、温阳利水 、安神
解毒等作用 ,和人参皂苷增补元气 、补益脾肺 、益气生
津 、安神养心 、健脑益智作用。是主治恶性肿瘤病人
和其他慢性消耗性疾病所致免疫功能低下人群的理
想保健食品 。据较完整临床统计共有 120例恶性肿
瘤病人服用金芪片 ,临床观察如下。
材料与方法
2006年 3月 ～ 2007年 3月 , 共收集病例 120例 ,男性 48
例 , 女性 72例 , 最大年龄 74岁 , 最小年龄 20岁 , 病种分类如
下表 1。
表 1　病种分类
病种 n
肺癌 28
乳腺癌 20
胃癌 20
恶性淋巴癌 20
肝癌 12
肾癌 4
鼻咽癌 4
子宫癌 4
慢性粒细胞白血病 4
多发性骨髓瘤 4
总计 120
　　1.服用方法:金芪片每片含三叶青提取物 200mg, 每次 3
片 , 每日 3次 , 90日为一疗程。
2.观察指标:①自觉症状:疼痛发热 , 神疲乏力 , 头晕目
眩 , 心悸耳鸣 , 食欲不振等自觉症状的改善情况;②“望 、闻 、
问 、切”中医四诊:面色 、毛发 、舌象 、脉象;③体重增加情况:正
常体重增长情况;④血象及血沉:血液三系改善情况 , 血沉下
降情况;⑤血液生化检察指标:如血浆总蛋白 、清 /球蛋白比
值 、总胆红素 、直接胆红素 、碱性磷酸酯酶(AKP);⑥实体瘤病
灶大小消涨。
　　3.疗效判定:参考世界卫生组织(WHO)对恶性肿瘤疗效
判定标准统计:①完全缓解(显效):自觉症状完全消失或基本
消失 , 望闻问切中医四诊基本正常 , 血液三系正常 , 血沉 <
20mm/H,血液生化指标基本正常 , 正常体重增加 >2kg, 实体
瘤病灶完全消失 , 至少维持 1个月以上;②部分缓解(有效):
自觉症状明显减轻 ,生活质量基本正常 , 望闻问切中医四诊明
显改善 , 血液三系明显改善 , 血红蛋白上升 >10g/L, 血沉比服
药前下降 10mm/h, 正常体重增加 >1kg,实体瘤病灶的最大横
径与最大垂直径的乘积缩小 50%以上至少维持 1个月以上;
③稳定:自觉症状有所改善或保持原状 , 未觉疼痛其他症状 ,
无加重趋势 , 望闻问切中医四诊维持原状 , 体重保持原状 , 未
下降 , 血液三系未下降 ,血沉未上升 ,血液生化指标维持原状 ,
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　·论　　著 · JMedRes, Nov2007, Vol.36No.11　　
实体瘤病灶 , 两径相乘的乘积缩小 <20%或增大 <20%,无新
病灶出现;④进展(无效):自觉症状进行性加重 , 望闻问切中
医四诊明显恶化 , 每况愈下。 体重减轻 , 日益消瘦 , 血象三系
下降 , 血沉上升马血液生化有些指标恶性上升 ,实体瘤病灶两
径乘积增大 >25%, 或出现新病灶。
结　　果
120例恶性肿瘤病人经过金芪片口服 90天 ,完
全缓解 52例 ,部分缓解 42例 ,稳定 18例 ,进展 8例 ,
缓解及部分缓解共 94例 ,总有效率为 78.33%。
讨　　论
恶性肿瘤治疗目前在医学界尚无理想的药物和
方法。在人类对此疾病药物耐受性日益严重的同时 ,
中医中药及有关营养支持疗法为治疗恶性肿瘤开阔
了一条充满希望的崭新的通道。我们利用我国特有
的中草药三叶青进行抗恶性肿瘤机制的实验研究 ,结
果表明三叶青提取物对人肝癌细胞 HepG2活性具有
较强抑制作用 ,对肿瘤细胞具有很好的细胞毒作用。
而对正常原代培养的大鼠肝细胞活性没有明显影响。
实验结果为进一步研究及临床应用提供了科学依据 ,
临床上用三叶青 、黄芪 、人参皂苷配制而成的金芪片
治疗恶性肿瘤 120例 ,完全缓解 52例 ,部分缓解 42
例 ,稳定 18例 ,进展 8例 ,缓解及部分缓解共 94例 ,
总有效率 78.33%,说明三叶青对防治恶性肿瘤确有
一定作用 ,值得进一步实验研究和临床验证 ,为中草
药防治恶性肿瘤开拓了可喜前景。
参考文献
1　赵永伟.三叶青的生药学鉴定.基层中药杂志 , 1998, 12(3):7-8
2　黄真.三叶青提取物抗炎 、镇痛及解热作用的实验研究.中国新药
杂志 , 2005, 14(7):861-864
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1999, 24(10):611-612
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2005, 26(4):293-295
5　李卫平.人参皂甙的免疫调节作用.安徽医科大学学报 , 1998, 33
(5):348-350 (收稿:2007-05-17)
　　基金项目:杭州市卫生局科研资助项目(2003A023)
作者单位:310053　杭州 ,浙江中医药大学第一临床医学院(余瑾);浙江中医药大学附属广兴医院(杭州市中医院)肾内科(方一卿 、何红权 、
周大卫 、李亚妤 、胡云琴 、鲁盈)
通讯作者:鲁盈 ,电子信箱:hz luying@126.com
尿Ⅳ型胶原对早期诊断慢性肾脏病进展的临床应用价值
余　瑾　方一卿　何红权　周大卫　李亚妤　胡云琴　鲁　盈
摘　要　目的　通过检测慢性肾脏病(CKD)患者尿Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)水平与肾组织 Col-Ⅳ表达和肾脏病理之间的关系 ,
寻找一种能早期反映 CKD进展的非创伤性临床检测指标。方法　选取 98例接受肾穿刺检查的 CKD患者为研究对象 , 76例健
康人为对照组 , 用 ELISA法测定患者血 、尿 Col-Ⅳ浓度;免疫组化法检测肾组织 Col-Ⅳ表达;应用计算机病理图像分析系统对
肾病理进行半定量分析 ,观察尿 Col-Ⅳ水平与肾组织 Col-Ⅳ表达及肾病理损伤的关系;并与尿蛋白排泄和肾小球滤过率(eG-
FR)同步对比分析。结果　肾病患者尿 Col-Ⅳ浓度较健康人明显增高 ,而血中浓度无差异;在硬化的小球和小管间质均有 Col
-Ⅳ表达 , 并随病变加重表达增强 , 尿 Col-Ⅳ浓度与肾组织 Col-Ⅳ表达水平呈正相关 , 也与肾小球基质基膜面密度 、小管间质
损害显著正相关;尿 Col-Ⅳ在轻度肾硬化时已升高 , 其改变明显早于 eGFR异常 , 且与尿蛋白的排泄不相关。结论　尿 Col-Ⅳ
水平反映了肾组织中的 Col-Ⅳ表达水平及肾硬化的程度 ,可以作为 CKD患者病情进展的早期临床检测指标。
关键词　慢性肾脏病　尿Ⅳ型胶原
TheClinicalValueOfUrinaryTypeⅣ ColageninPredictingProgressofChronicKidneyDisease.　YuJin, FangYiqing, HeHongquan
, etal.ZhejiangChineseMedicalUniversity, Zhejiang310053 , China
Abstract　Objective　Todetermineanearlyandnoninvasivepredictorofchronickidneydiseaase(CKD), bydetectingthecorrela-
tionbetweentheurinaryCol-Ⅳ concentration, therenaltissueandrenallesionsinpatientswithCKDCol-Ⅳ expression.Methods　98
CKDpatientsprovedbyrenalbiopsywereselectedand76healthypeoplewereenrolledascontrol.UrinaryandserumCol-Ⅳ concentra-
tionwereexaminedbyenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA).RenalCol-Ⅳ expressionwasdetectedbyimmunohistochemistry.
RenalinjurygradewassemiquantitativebyCMIASimageanalysissystem.TheassociationbetweenurinaryCol-Ⅳ levelandrenalCol-
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　　医学研究杂志　2007年 11月　第 36卷　第 11期 ·论　　著 ·