全 文 ：溶剂浓度对提取山高粱中总黄酮含量的影响
张乐华 , 于敬海 , 董陆陆 , 刘丙义 , 穆云亭 , 徐小明
(哈尔滨医科大学 化学教研室 , 黑龙江 哈尔滨 150086)
[ 摘要] 目的 为从山高粱中提取出较大量的总黄酮寻找提取溶剂的最佳浓度。 方法 分别采用 90%、80%、
70%、60% 4 种浓度的乙醇作为山高粱中黄酮类化合物的提取溶剂 , 进而得到 4种黄酮样品。结果 通过分光光度
法测得4 种黄酮样品的总黄酮的含量分别为 1.26%、1.42%、2.38%、1.98%;平均回收率分别为 100.4%、101.6%、
100.9%、100.4%;变异系数分别为 0.395%、1.58%、0.455%、0.946%。结论 采用乙醇作为山高粱中黄酮类化合
物的提取溶剂时 ,乙醇的浓度以 70%为最佳。
[ 关键词] 山高粱;黄酮;分光光度法
[ 中图分类号] R-331 [ 文献标识码] A [ 文章编号] 1000-1905(2001)05-0387-02
[收稿日期] 2001-03-02
[作者简介] 张乐华(1964-), 女 ,黑龙江齐齐哈尔人 , 副教授, 硕士
研究生。
山高粱(sorbaria , sorbiforid)又名珍珠梅 ,属蔷薇
科植物 ,系多年生灌木。在黑龙江省山区 、半山区 ,
药源极其丰富 ,生于疏林 、河边 、路旁等地。民间常
用于治疗扭伤 、骨折 、风湿性关节炎等 ,有活血化淤 、
消肿止痛作用 ,尚未入药典[ 1] 。60年代前苏联曾报
道其含有黄酮类成分[ 2 ～ 4] ,但对该植物化学成分的
定量研究尚未见文献记载 。为进一步开发和利用山
高粱这一丰富的野生资源 ,为研制新的中成药提供
必要的基础资料 ,我们采用 4种浓度的乙醇作为山
高粱中总黄酮的提取溶剂 ,寻找出从山高粱中提取
黄酮类化合物的最佳途径 。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 药材:山高粱(1998年从黑龙江省帽儿山采
集地上部分)。
1.1.2 试剂:对照品芦丁由中国药品生物制品检定
所提供 ,其它试剂均为国产分析纯 。
1.1.3 仪器:722型分光光度计 ,上海第三分析仪器
厂。
1.2 实验方法
1.2.1 样品制备:分别称取干燥至恒重的山高粱粗
粉4份 ,每份为 25.0g ,分别用 90%、80%、70%、60%
的乙醇 300ml ,冷浸两次 ,每次 72h。浸出液于减压
下浓缩至一定体积。在浓缩液中加入适量水及乙醇
使其成70%乙醇溶液 ,用石油醚萃取 ,至醚层无色 。
回收70%乙醇溶液中的乙醇 ,用正丁醇萃取 ,直至
正丁醇遇FeCl3无特征反应 ,弃去水相 ,回收正丁醇
至干 ,得到 4 种黄酮样品用甲醇分别定容于 4 只
250ml容量瓶中 ,摇匀待用。以上操作均重复进行 3
次 。
1.2.2 标准曲线的制作[ 5] :精密称取 0.00500g 芦
丁标准品 ,用 60%乙醇溶解并定容于 50ml容量瓶
中 ,准确吸取 0.0 、1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、5.0ml于 10ml
容量瓶中 ,分别加入一定量 30%乙醇使成 5.0ml。
先加 5%NaNO2 溶液 0.3ml ,摇匀 ,放置 6min ,再加
10%Al(NO3)3 溶液 0.3ml ,摇匀 , 再放置 6min ,加
4%NaOH溶液 4.0ml ,用水稀释至 10.0ml ,放置 10
～ 20min ,在λ=510nm 处测吸光度 ,得浓度C 对吸光
度 A的标准曲线回归方程为:
A=0.1102C+0.0002 r=0.9998
1.2.3 样品总黄酮含量的测定:精密量取所得到的
4种黄酮样品甲醇溶液各 1.0ml ,用 60%乙醇稀释至
10.0ml ,然后各取 1.0ml稀释后溶液 ,按标准曲线法
操作 ,得到吸光度后代入回归方程 ,经计算得到各样
品的总黄酮含量。
1.2.4 样品回收率的测定:用标准加入法测定回收
率 。
2 结果
见附表 。
附表 4 种黄酮样品中总黄酮的含量
样品
溶剂乙醇浓度
黄酮 1
90%
黄酮 2
80%
黄酮 3
70%
黄酮 4
60%
总黄酮含量(%) 1.26 1.42 2.38 1.98
回收率(%) 100.4 101.6 100.9 100.4
CV(%) 0.395 1.58 0.946 0.455
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第 35卷 第 5期
2001年 10月
哈尔滨医科大学学报
JOURNAL OF HARBIN MEDICAL UNIVERSITY
Vol.35 , No.5
Oct., 2001
3 讨论
实验结果表明 ,采用 4种不同浓度的乙醇作为
山高粱中黄酮类化合物的提取溶剂时 ,以 70%乙醇
所得到的总黄酮含量最高 ,从而筛选出从一定量山
高粱中提取出最大量的黄酮 ,应选用 70%乙醇作为
提取溶剂。另外 ,本实验说明利用分光光度法测定
总黄酮含量方法简便 ,准确性好 ,可为今后成药开发
中建立质量控制标准提供可行的方法。
[参考文献]
[ 1] 江苏新医学院.中药大词典[M] .上海人民出版社 , 1977.
[ 2] Zaitsev VG ,MaKarora GV ,Komissarenko NF.Sorbifolin , a new f larone
glycoside from Sorbaria sorbifolia[ J] .Khim Prir Soedin , 1969 , 5(6):
504-507.
[ 3] Zaitsev VG , MaKarora GV , Komissarenko NF.Phenolic compounds of
Sorbaria sorbifolia[ J] .Khim Prir Soedin , 1969 ,5(6):598.
[ 4] Kruglit LA ,Glyzin VI.Flaronoids of Sorbaria sorbifolia[ J] .Khim Prir
Soedin , 1968 ,4(6):379.
[ 5] 刘松青 ,唐先哲 ,马文秀 ,等.高效液相色谱法测定银杏叶制品
中总黄酮[ J] .中草药 , 1995 , 26(9):461.
白细胞滤器在输血中的应用
丁 巾 , 阎冬梅 , 田 勇
(哈尔滨医科大学附属第二医院 输血科 , 黑龙江 哈尔滨 150086)
随着当代输血学的发展 , 输血观念正在不断发生变化 ,
输血免疫学的重要性越来越受到重视 ,输注全血的适应证愈
来愈少 , 人们对其危害性的认识日益加深 , 由白细胞引起的
输血反应仅次于过敏反应 , 居第二位 , 其中包括:NHFTR(非
溶血性输血反应), GVHD(移植物抗宿主病), 病毒感染 , 免疫
性血小板输注无效 , 非心源性肺水肿。为了减缓其发生率 ,
至关重要的一点就是减少血细胞中白细胞的数量。其中滤
过是最有效的方法。
1 白细胞滤器的工作原理及方法
1.1 工作原理
根据白细胞是血细胞中体积最大的细胞 ,应用高分子技
术制备的筛网状结构 ,依据筛网孔径滤除白细胞。
1.2 方法
关闭滤器上端两开关 ,按无菌操作上端分别接血袋和生
理盐水。打开生理盐水通道和废弃盐水收集袋开关 , 用生理
盐水排尽滤器及管腔中空气 ,排气时应注意将滤器出口倒置
朝上 ,以便完全排尽腔内空气。然后关闭上端生理盐水通道
开关 ,打开原血袋开关。待有红色血液开始从滤器末端排出
时 ,关闭废弃盐水收集袋开关 , 打开生理盐水通道 ,继续按正
常滤血速度注入 60 ～ 80ml 生理盐水 , 将滤器及管腔中剩余
血液继续滤入除白细胞血液收集袋至滤毕。
2 效果比较
2.1 我院采用白细胞滤过器滤除白细胞的方法累计处理全
血40 000ml。滤除血液中的白细胞前后进行血常规比较:滤
除前全血中的WBC 7.35×109/L , RBC 5.2×1012/ L , PCT 201.5
×109/ L;滤除后全血中的 WBC 0.33 ×109/L , RBC 4.75 ×
1012/L , PLT 197.6×109/L , 去除率分别为 95.1%、8.7%、1.
99%。
2.2 将输注全血的患者编为两组 , 即对照组与用白细胞滤
过器组各 200 人。 将其所出现并发症人数及发病率进行比
较。对照组中有 18 人出现并发症 ,发病率为 9%。用白细胞
滤过器组出现并发症 6 人 ,发病率为 3%。两组总计 400 人 ,
出现并发症共 24 人 , 发病率为 6%(经统计学检验 U=4.63
>3.31 , P<0.001)。白细胞滤器组中出现并发症的 6 人中 ,
询问输血史 ,其中4 人曾多次输血。其比较结果可见 , 应用
白细胞滤器可以显著降低输血并发症。
3 讨论
目前输血前一般要给病人注射地塞米松类药物 ,即使这
样 ,随机仍有 6%～ 9%的病人有输血反应 , 反复输血的病人
输血反应发生率达 30%。去除血液中不需要的白细胞很有
必要 ,由以上结果可见 , 白细胞滤器可以有效地去除全血中
的白细胞 , 且根据 AABB 质控标准指出 ,WBC<5×108/ L 可
以有效预防 NHFTR的发生 ,并能有效防止非心源性肺水肿 ,
去除大量白细胞就可以明显减少其并发症的发生。为了患
者的健康及长远输血安全 , 应尽可能应用成分血去除大部分
的白细胞 , 以防止输血反应的发生。
[参考文献从略]
388 哈尔滨医科大学学报 第 35卷
[收稿日期] 2000-12-13