全 文 ：基金项目:福建省教育厅资助课题(JA13154) ;福建中医药大学校管课题(X2014134;X2013027) ;福建省“大学生创新创业训练计划”项目
(201410393063)
作者简介:林婧，女，助理实验师 研究方向:中药活性成分及作用机制研究 * 通讯作者:许文，男，研究实习员 研究方向:中药药效
物质基础研究 Tel:(0591)22861217 E-mail:yaoxuexuwen@ qq. com;范世明，男，高级实验师 研究方向:中药鉴定与资源评价研究
Tel:(0591)22861135 E-mail:r3570379@ 163. com
·论 著·
三叶青的化学成分及其体外抗肿瘤活性研究
林婧1，纪明妹2，黄泽豪2，于虹敏2，许文1，2，3* ，范世明2* (1． 福建中医药大学中西医结合研究院，福州 350122;2． 福建中医药
大学药学院，福州 350122;3． 福建中医药大学生物医药研发中心，福州 350122)
摘要:目的 研究三叶青全草的化学成分及其体外抗肿瘤活性。方法 运用多种色谱技术分离三叶青中化学成分，采用1 H-
NMＲ、13C-NMＲ、MS、HＲ-MS等波谱技术确定化合物结构。以噻唑蓝法，测试各黄酮化合物对 HepG2，HCT-8，A549 3 种肿瘤细
胞的体外抑制作用。结果 分离鉴定 13 个化合物，分别为 β-谷甾醇(1)、十六烷酸(2)、十七烷酸(3)、芹菜素(4)、槲皮苷
(5)、山柰酚-3，7-O-L-二鼠李糖苷(6)、山柰酚-3-O-新橙皮糖苷(7)、芹菜素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、芹菜素-8-C-α-L-吡喃
鼠李糖-(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、芹菜素-8-C-β-D-吡喃葡萄糖苷(10)、芹菜素-8-C-β-D-吡喃葡萄糖-(1-4)-β-D-吡喃葡萄
糖苷(11)、荭草素(12)、异荭草素(13)。结论 化合物 4 ～ 6，8 ～ 13 系首次从该植物中分离得到，体外噻唑蓝活性筛选表明三
叶青黄酮类化合物具有一定的抗肿瘤细胞增殖作用。
关键词:三叶青;化学成分;抗肿瘤活性
doi:10. 11669 /cpj. 2015. 08. 002 中图分类号:Ｒ284 文献标志码:A 文章编号:1001 － 2494(2015)08 － 0658 － 06
Chemical Constituents of Whole Plants of Tetrastigma hemsleyanum and Their Antitumor Activities
LIN Jing1，JI Ming-mei2，HUANG Ze-hao2，YU Hong-min2，XU Wen1，2，3* ，FAN Shi-ming2* (1． Academy of Integra-
tive Medicine，Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350122，China;2． School of Pharmacy，Fujian University of
Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350122，China;3． Centre of Biomedical Ｒesearch ＆ Development，Fujian University of Tradition-
al Chinese Medicine，Fuzhou 350122，China)
ABSTＲACT:OBJECTIVE To study the chemical constituents and antitumor activity of Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg.
METHODS The compounds were isolated by various column chromatography. Their structures were identified by spectroscopic meth-
ods including 1H-NMＲ，13C-NMＲ，MS，HＲ-MS，etc. The antiproliferative activity of the purified flavonoids compounds were evalua-
ted by MTT assay against HepG2，HCT-8，and A549 tumor cells. ＲESULTS Thirteen compounds were isolated and identified as β-si-
tosterol (1) ，palmitic acid (2) ，heptadecanoic acid (3) ，apigenin (4) ，quercitrin (5) ，kaempferitrin (6) ，kaempferol-3-O-neohes-
peridoside (7) ，apigenin-6-C-β-D-glucopyranoside (8) ，apigenin-8-C-α-L-rhamnopyranosyl-(1-2)-β-D-glucopyranoside (9) ，apige-
nin-8-C-β-D-glucopyranoside (10) ，apigenin-8-C-β-D-glucopyranoside-(1-4)-β-D-glucopyranoside (11) ，orientin (12) ，and isoori-
entin (13). CONCLUSION Compounds 4 － 6 and 8 － 13 were isolated from T. hemsleyanum for the first time. The flavonoids of T.
hemsleyanum showed inhibitory activity on HepG2，HCT-8，and A549 tumor cells.
KEY WOＲDS:Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg;chemical constituent;antitumor activity
三叶青是葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤
(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg) ，别名蛇附
子、石猴子、石老鼠、拦山虎、雷胆子、破石珠、阴灵
子、三叶扁藤、金丝吊葫芦，主要分布在我国福建、浙
江、江苏、江西等地，有活血散瘀、解毒、化痰的作
用［1］。现代药理研究表明，三叶青具有抗炎、抗肿
瘤、抗病毒、调节免疫［1］等活性，并广泛用于多种中
成药或保健品，如华佗风痛宝、结石康胶囊、金丝地
甲胶囊、金芪片等。目前对三叶青化学成分的研究
还较少，至今为止从该植物中分离得到化合物主要
有黄酮类、三萜甾醇类、有机酸类等成分，黄酮类化
合物有 9 个:李瑛琦等［2］从三叶崖爬藤中分离并鉴
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定了 3 个黄酮:山柰酚，槲皮素，山柰酚-3-O-新橙皮
糖苷;刘东等［3-4］从三叶崖爬藤中分离并鉴定了 4 个
黄酮苷:山柰酚-7-O-β-L-吡喃鼠李糖-3-O-β-D-吡喃
葡萄糖苷，芹菜素-6-C-α-L-吡喃鼠李糖-(1-4)-α-L-
吡喃阿拉伯糖苷，芹菜素-8-C-α-L-吡喃鼠李糖-(1-
4)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷;芹菜素-6，8-二-C-β-D-吡喃
葡萄糖苷，刘东等［5］从狭叶崖爬藤中分离到 2 个黄
烷醇类化合物:儿茶素和 7-O-没食子酰基-儿茶素。
三叶青中分离得到的三萜类和甾醇类化合物有 7
个:刘东等［6］和李瑛琦等［2］从三叶青中分离到 β-谷
甾醇，蒲公英萜酮，蒲公英萜醇，麦角甾醇，α-香树脂
醇，胡萝卜苷，6-O-苯甲酰基胡萝卜苷。三叶青中
分离得到的有机酸类化合物有 13 个:刘东等［3-5］从
三叶青中分离得到水杨酸，没食子酸，没食子酸乙
酯，丁二酸，三十二酸;霍昕等［7］采用 GC-MS 从三叶
青块根乙醚提取物中分析得到了 8 个脂肪酸:豆蔻
酸，十五烷酸，棕榈酸，十七烷酸，硬脂酸，油酸，亚油
酸，亚麻酸甲酯。此外，从三叶青中还分得白藜芦
醇，二十五烷，甘露醇，环四谷氨肽，3，3-二甲氧基
鞣花酸-4-O-葡萄糖苷［3，5］及其他类挥发性化合
物［7］。为进一步开发利用该种植物资源，本实验对
三叶青全草的化学成分及其抗肿瘤细胞增殖活性进
行研究，从三叶青全草中分离得到 13 个化合物，分
别鉴定为 β-谷甾醇(1)、十六烷酸(2)、十七烷酸
(3)、芹菜素(4)、槲皮苷(5)、山柰酚-3，7-O-L-二鼠
李糖苷(6)、山柰酚-3-O-新橙皮糖苷(7)、芹菜素-6-
C-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、芹菜素-8-C-α-L-吡喃鼠李
糖-(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、芹菜素-8-C-β-D-
吡喃葡萄糖苷(10)、芹菜素-8-C-β-D-吡喃葡萄糖-
(1-4)-β-D-吡喃葡萄糖苷(11)、荭草素(12)、异荭
草素(13)。其中化合物 4 ～ 6，8 ～ 13 系首次从该植
物中分离得到，经体外噻唑蓝(MTT)活性筛选，发
现三叶青黄酮类化合物具有一定的抗肿瘤细胞增殖
作用。
1 仪器与试药
柱色谱硅胶(100 ～ 200 目，200 ～ 300 目，青岛海
洋化工厂) ;D101 大孔树脂(天津海光化工有限公
司) ;Sephadex LH － 20 (北京绿百草科技发展有限
公司) ;ODS(50 μm，美国 Welch 公司) ;Waters 质谱
引导自动纯化系统:Waters 2545 二元梯度泵，Waters
2767 自动进样器和收集器，Waters 515 补偿泵和在
线稀释泵，Waters 2489 紫外检测器，Waters SQD2 质
谱(美国 Waters 公司) ，Waters X-bridge OBD Prep
C18(19 mm × 150 mm，5 μm) ;Bruker Avance 500 型
超导核磁共振波谱仪(德国 Bruker公司) ;micrOTOF
高分辨率飞行时间质谱仪(德国 Bruker 公司) ;
ＲD －8A熔点仪(上海光学仪器厂) ;CPA225D 型十
万分之一分析天平(德国 Sartorius公司) ;KQ －500E
台式超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司) ;
ELX800 酶标仪(美国 BioTek 公司) ;HF212UV CO2
培养 箱 (香 港 力 康 仪 器 设 备 有 限 公 司) ;
SW － CJ － 1FD超净工作台(苏州安泰仪器设备有限
公司) ;TDL －50B 低速离心机(湖南湘仪实验仪器
开发有限公司) ;TS － 100F 倒置显微镜(日本 Nikon
公司) ;Milli-Q超纯水仪(美国 Millipore公司) ，其余
试剂均为分析纯。
三叶青干燥全草采自福建顺昌和福建福安，经
福建中医药大学药用植物实验室范世明高级实验师
及生药教研室黄泽豪副教授鉴定为葡萄科植物三叶
青(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)的全草，样
本存放于福建中医药大学药学院药用植物标本室。
2 提取与分离
三叶青干燥全草(2 kg) ，用 10 倍量体积分数
80%甲醇回流提取 3 次，每次 1 h，回收甲醇得流浸
膏 146 g，用热水超声混悬，用石油醚萃取后余下的
水溶液过 D101 大孔吸附树脂柱(5. 5 cm × 60 cm)
粗分，用不同体积分数的乙醇(10%，30%，70%，
95%)梯度洗脱，各 5 000 mL，收集体积分数 70%乙
醇洗脱部分(48. 5 g)经硅胶柱(100 ～ 200 目)色谱
分离，以二氯甲烷-甲醇(250∶ 1→10∶ 1)梯度洗脱，每
200 mL收集 1 份，编号为 1，2，3，4…。第 9 ～ 15 号
合并得到化合物 1 (88 mg) ，第 22 ～ 32 号合并，采用
硅胶 200 ～ 300 目石油醚-乙酸乙酯(50∶ 1→20∶ 1)梯
度洗脱得到化合物 2(8 mg) ，3(18 mg) ，第 46 ～ 52
号合并采用 Sephadex LH － 20 凝胶色谱(三氯甲烷-
甲醇 1∶ 1)得到化合物 4(12 mg)、第 64 ～ 78 号合并，
Sephadex LH －20 凝胶色谱(三氯甲烷-甲醇 = 1∶ 1)
结合Waters质谱引导自动纯化系统分离制备得化合
物 5(12 mg) ，6(8 mg)和 7(8 mg) ，第 87 ～ 102 号合
并，ODS柱色谱分离结合自动纯化系统分离制备得化
合物 8(15 mg) ，9(32 mg) ，10(22 mg)和11(7 mg) ，第
79 ～85号合并采用 ODS柱色谱分离结合自动纯化系
统分离制备得化合物 12(25 mg) ，13(18 mg)。
3 结构鉴定
化合物 1:无色针状结晶，mp 137 ～ 138 ℃，与 β-
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中国药学杂志 2015 年 4 月第 50 卷第 8 期 Chin Pharm J，2015 April，Vol. 50 No. 8
谷甾醇标准品混合测熔点不下降。硫酸乙醇加热显
红色，与 β-谷甾醇标准品共薄层，斑点 Ｒf 值一致，
ESCI-MS m/z 437［M + Na］+。1 H-NMＲ (400 MHz，
CDCl3)δ:3. 45(1H，ddd，J = 6. 40，10. 80，16. 00 Hz，
H-3) ，5. 37(1H，d，J = 5. 20 Hz，H-4)。13C-NMＲ (100
MHz，CDCl3)δ:37. 26(C-1) ，31. 57(C-2) ，71. 82(C-
3) ，42. 31(C-4) ，140. 76(C-5) ，121. 73(C-6) ，31. 67
(C-7) ，31. 91(C-8) ，50. 13(C-9) ，36. 51(C-10) ，
21. 09(C-11) ，28. 26(C-12) ，42. 22(C-13) ，56. 77
(C-14) ，24. 31(C-15) ，39. 68(C-16) ，55. 95(C-17) ，
12. 26(C-18) ，19. 4(C-19) ，36. 15(C-20) ，18. 78(C-
21) ，33. 94(C-22) ，26. 06(C-23) ，45. 84(C-24) ，
29. 15(C-25) ，19. 03(C-26) ，19. 82(C-27) ，23. 06
(C-28) ，11. 86(C-29)。以上数据与文献［6］报道基
本一致，故鉴定化合物 1 为 β-谷甾醇(β-sitosterol)。
化合物 2:白色粒状结晶，mp 60 ～ 61. 5 ℃，与十
六烷酸标准品混合测熔点不下降。硫酸乙醇显紫红
色，ESCI-MS m/z 279［M + Na］+。1 H-NMＲ (400
MHz，CDCl3)δ:0. 88(3H，t，J = 6. 80 Hz，H-16) ，1. 28
(2H × 12，brs，H-4 ～ 15) ，1. 63(2H，m，H-3) ，2. 34
(2H，t，J = 7. 60 Hz，H-2)。13 C-NMＲ (100 MHz，
CDCl3)给出了以下碳信号:180. 18(C-1) ，34. 10(C-
2) ，31. 95(C-3) ，29. 72(C-4) ，29. 69 ～ 29. 09(9C，C-
5 ～ C-13) ，24. 71(C-14) ，22. 71(C-15) ，14. 12(C-
16)。以上数据与文献［8］报道基本一致，故鉴定化
合物 2 为十六烷酸(palmitic acid)。
化合物 3:白色粉末，mp 61 ～ 62. 5 ℃。硫酸乙
醇显紫红色，ESCI-MS m/z 293［M + Na］+。1 H-NMＲ
(400 MHz，CDCl3)δ:0. 88(3H，t，J = 6. 80 Hz，H-
17) ，1. 28 (2H ×13，brs，H-4 ～16) ，1. 63 (2H，m，H-
3) ，2. 34(2H，t，J = 7. 20 Hz，H-2)。13 C-NMＲ (100
MHz，CDCl3)δ:180. 18 (C-1) ，34. 10 (C-2) ，31. 95
(C-3) ，29. 72 (C-4) ，29. 69 ～ 29. 09 (10C，C-5 ～ C-
14) ，24. 71 (C-15 ) ，22. 71(C-16) ，14. 12(C-17)。
以上数据与文献［9］报道基本一致，故鉴定化合物 3
为十七烷酸(heptadecanoic acid)。
化合物 4:黄色粉末状结晶，mp 347 ～ 348 ℃。
HＲ-ESI-MS m/z 431. 097 2［M － H］－ (calcd. For
C15H10O5)。
1 H-NMＲ (DMSO-d6，400 MHz)δ:6. 8
(1H，s，H-3) ，12. 98 (1H，s，OH-5) ，6. 21(1H，d，J =
2. 08 Hz，H-6) ，10. 83(1H，brs，OH-7) ，6. 50(1H，d，
J = 2. 08 Hz，H-8) ，7. 94(2H，d，J = 8. 84 Hz，H-2，
6) ，6. 95(2H，d，J = 8. 84 Hz，H-3，5) ，10. 35(1H，
brs，OH-4)。13 C-NMＲ (DMSO-d6，100 MHz)δ:
163. 72(C-2) ，103. 68(C-3) ，181. 72(C-4) ，161. 14
(C-5) ，98. 81(C-6) ，164. 10(C-7) ，93. 93(C-8) ，
157. 28(C-9) ，103. 82(C-10) ，121. 16(C-1) ，128. 44
(C-2，6) ，115. 93(C-3，5) ，161. 43(C-4)。以上
数据与文献［10］报道的芹菜素一致，故鉴定化合物
4 为芹菜素(apigenin)。
化合物 5:黄色粉末，mp 181 ～ 183 ℃。HＲ-ESI-
MS m/z 447. 092 5［M － H］－(calcd. For C21H20O11)。
1H-NMＲ (DMSO-d6，400 MHz)δ:12. 67(1H，s，OH-
5) ，6. 22(1H，d，J = 2. 04 Hz，H-6) ，10. 86(1H，s，
OH-7) ，6. 40(1H，d，J = 2. 04 Hz，H-8) ，7. 31(1H，d，
J = 2. 16 Hz，H-2) ，9. 33(1H，brs，OH-3) ，9. 70
(1H，brs，OH-4) ，6. 88(1H，d，J = 8. 32 Hz，H-5) ，
7. 27(1H，dd，J = 8. 28，2. 16 Hz，H-6) ，5. 27(1H，d，
J = 1. 44 Hz，Ｒha-H-1) ，0. 83(3H，d，J = 6. 00 Hz，
Ｒha-H-6)。13 C-NMＲ (DMSO-d6，100 MHz)δ:156. 42
(C-2) ，134. 20(C-3) ，177. 73(C-4) ，161. 27(C-5) ，
98. 65(C-6) ，164. 15(C-7) ，93. 59(C-8) ，157. 27(C-
9) ，104. 06(C-10) ，120. 71(C-1) ，115. 42(C-2) ，
145. 18 (C-3) ，148. 41 (C-4) ，115. 63 (C-5) ，
121. 07(C-6) ，101. 82(Ｒha-C-1) ，70. 33(Ｒha-C-2) ，
70. 55(Ｒha-C-3) ，71. 16(Ｒha-C-4) ，70. 03(Ｒha-C-
5) ，17. 46(Ｒha-C-6)。以上数据与文献［11］报道的
槲皮苷一致，故鉴定化合物 5 为槲皮苷(quercitrin)。
化合物 6:黄色粉末，mp 207 ～ 209 ℃。HＲ-ESI-
MS m/z 577. 155 4［M － H］－(calcd. For C27H30O14)。
1H-NMＲ(DMSO-d6，400 MHz)δ:12. 62(1H，s，OH-
5) ，6. 48(1H，d，J = 2. 12 Hz，H-6) ，6. 81(1H，d，J =
2. 12 Hz，H-8) ，7. 82(2H，d，J = 8. 76 Hz，H-2，6) ，
6. 94(2H，d，J = 8. 80 Hz，H-3，5) ，5. 32(1H，d，J =
1. 48 Hz，3-Ｒha-H-1) ，0. 83(3H，d，J = 5. 52 Hz，3-
Ｒha-H-6) ，5. 57(1H，d，J = 1. 44 Hz，7-Ｒha-H-1) ，
1. 15(3H，d，J = 6. 12 Hz，7-Ｒha-H-6)。13 C-NMＲ
(DMSO-d6，100 MHz)δ:157. 61(C-2) ，134. 53(C-
3) ，177. 92 (C-4) ，160. 91 (C-5) ，98. 43 (C-6) ，
161. 68(C-7) ，94. 58(C-8) ，157. 75(C-9) ，105. 77
(C-10) ，120. 33(C-1) ，130. 67(C-2，6) ，115. 40
(C-3，5) ，160. 13 (C-4) ，101. 86 (3-Ｒha-C-1) ，
70. 22(3-Ｒha-C-2) ，70. 30(3-Ｒha-C-3) ，71. 09(3-
Ｒha-C-4) ，70. 05(3-Ｒha-C-5) ，17. 88(3-Ｒha-C-6) ，
98. 42(7-Ｒha-C-1) ，70. 06(7-Ｒha-C-2) ，70. 64(7-
Ｒha-C-3) ，71. 57(7-Ｒha-C-4) ，69. 79(7-Ｒha-C-5) ，
17. 44(7-Ｒha-C-6)。以上数据与文献［12］报道的山
柰酚-3，7-O-L-二鼠李糖苷一致，故鉴定化合物 6 为
·066· Chin Pharm J，2015 April，Vol. 50 No. 8 中国药学杂志 2015 年 4 月第 50 卷第 8 期
山 柰 酚-3，7-O-L-二 鼠 李 糖 苷，即 山 柰 苷
(kaempferitrin)。
化合物 7:黄色粉末，mp 196 ～ 198 ℃。HＲ-ESI-
MS m/z 593. 150 4［M － H］－(calcd. For C27H30O15)。
1H-NMＲ (DMSO-d6，400 MHz)δ:12. 65(1H，s，OH-
5) ，6. 21(1H，d，J = 2. 08 Hz，H-6) ，10. 84(1H，brs，
OH-7) ，6. 44(1H，d，J = 2. 04 Hz，H-8) ，8. 05(2H，
dd，J = 6. 88，2. 00 Hz，H-2，6) ，6. 89(2H，dd，J =
6. 92，2. 00 Hz，H-3，5) ，10. 16(1H，brs，OH-4)。
13C-NMＲ (DMSO-d6，100 MHz)δ:156. 08(C-2) ，
132. 69(C-3) ，177. 31(C-4) ，161. 21(C-5) ，99. 50
(C-6) ，164. 05(C-7) ，93. 60(C-8) ，156. 29(C-9) ，
104 (C-10) ，120. 88 (C-1) ，130. 71 (C-2，6) ，
115. 08(C-3，5) ，159. 85(C-4) ，100. 55(Glu-C-1) ，
77. 5(Glu-C-2) ，77. 42(Glu-C-3) ，70. 19(Glu-C-4) ，
77. 24(Glu-C-5) ，60. 77(Glu-C-6) ，98. 27(Ｒha-C-
1) ，70. 58(Ｒha-C-2) ，70. 51(Ｒha-C-3) ，71. 80(Ｒha-
C-4) ，68. 26(Ｒha-C-5) ，17. 20(Ｒha-C-6)。以上数
据与文献［13］报道的山柰酚-3-O-新橙皮糖苷一致，
故鉴定化合物 7 为 山 柰 酚-3-O-新 橙 皮 糖 苷
(kaempferol-3-O-neohesperidoside)。
化合物 8:黄色粉末，mp 239 ～ 241 ℃。HＲ-ESI-
MS m/z 431. 097 8［M － H］－(calcd. For C21H20O10)。
1H-NMＲ (DMSO-d6，400 MHz)δ:6. 80(1H，s，H-3) ，
13. 56(1H，s，OH-5) ，10. 55(1H，brs，OH-7) ，6. 53
(1H，s，H-8) ，6. 94(2H，d，J = 8. 88 Hz，H-2，6) ，
7. 95(2H，d，J = 8. 88 Hz，H-3，5) ，10. 35(1H，brs，
OH-4) ，4. 61(1H，d，J = 9. 80 Hz，Glu-H-1)。13 C-
NMＲ (DMSO-d6，100 MHz)δ:163. 50(C-2) ，102. 78
(C-3) ，181. 93(C-4) ，160. 63(C-5) ，108. 86(C-6) ，
163. 22(C-7) ，93. 60(C-8) ，156. 19(C-9) ，103. 40
(C-10) ，121. 09(C-1) ，128. 45(C-2，6) ，115. 95
(C-3，5) ，161. 15(C-4) ，78. 91(Glu-C-1) ，73. 03
(Glu-C-2) ，70. 20 (Glu-C-3) ，70. 59 (Glu-C-4) ，
81. 54(Glu-C-5) ，61. 44(Glu-C-6)。以上数据与文
献［14］报道的芹菜素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷一致，
故鉴定化合物 8 为芹菜素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷
(apigenin-6-C-β-D-glucopyranoside) ，即异牡荆苷。
化合物 9:黄色结晶，mp 213 ～ 215 ℃。HＲ-ESI-
MS m/z 577. 155 8［M － H］－(calcd. For C27H30O14)。
1H-NMＲ (DMSO-d6，400 MHz)δ:6. 81(1H，s，H-3) ，
13. 16(1H，brs，OH-5) ，6. 28(1H，s，H-6) ，10. 86
(1H，brs，OH-7) ，8. 07(2H，d，J = 8. 84 Hz，H-2，
6) ，6. 92(2H，d，J = 8. 84 Hz，H-3，5) ，10. 35(1H，
brs，OH-4) ，4. 79(1H，d，J = 9. 96 Hz，Glu-H-1)。13C-
NMＲ (DMSO-d6，100 MHz)δ:163. 94(C-2) ，102. 40
(C-3) ，182. 05(C-4) ，160. 63(C-5) ，98. 24(C-6) ，
162. 30(C-7) ，104. 42(C-8) ，155. 78(C-9) ，104. 17
(C-10) ，121. 57(C-1) ，128. 95(C-2，6) ，115. 83
(C-3，5) ，161. 14(C-4) ，71. 63(Glu-C-1) ，75. 05
(Glu-C-2) ，79. 87 (Glu-C-3) ，70. 42 (Glu-C-4) ，
81. 78(Glu-C-5) ，61. 13(Glu-C-6) ，100. 27(Ｒha-C-
1) ，70. 63(Ｒha-C-2) ，70. 20(Ｒha-C-3) ，71. 45(Ｒha-
C-4) ，68. 18(Ｒha-C-5) ，17. 67(Ｒha-C-6)。以上数
据与文献［15］报道的芹菜素-8-C-α-L-吡喃鼠李糖-
(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖苷一致，故鉴定化合物 9 为
芹菜素-8-C-α-L-吡喃鼠李糖-(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖
苷 ［apigenin-8-C-α-L-rhamnopyranosyl-(1-2 )-β-D-
glucopyranoside］，即牡荆素鼠李糖苷。
化合物 10:黄色粉末，mp 268 ～ 270 ℃。HＲ-
ESI-MS m/z 431. 097 2 ［M － H］ (calcd. For
C21H20O10)。
1 H-NMＲ (DMSO-d6，400 MHz)δ:6. 80
(1H，s，H-3) ，13. 18(1H，s，OH-5) ，6. 29(1H，s，H-
6) ，10. 83(1H，brs，OH-7) ，6. 91(2H，d，J = 8. 80 Hz，
H-3，5) ，8. 04(2H，d，J = 8. 76 Hz，H-2，6) ，10. 34
(1H，brs，OH-4) ，4. 71(1H，d，J = 9. 84 Hz，Glu-H-
1)。13C-NMＲ (DMSO-d6，100 MHz)δ:163. 92(C-2) ，
102. 42(C-3) ，182. 06(C-4) ，161. 10(C-5) ，98. 10
(C-6) ，162. 52(C-7) ，104. 59(C-8) ，155. 97(C-9) ，
104. 02(C-10) ，121. 59(C-1) ，128. 93(C-2，6) ，
115. 77(C-3，5) ，160. 36(C-4) ，73. 35(Glu-C-1) ，
70. 81(Glu-C-2) ，78. 64(Glu-C-3) ，70. 53(Glu-C-
4) ，81. 82(Glu-C-5) ，61. 26(Glu-C-6)。以上数据与
文献［16］报道的芹菜素-8-C-β-D-吡喃葡萄糖苷一
致，故鉴定化合物 10 为芹菜素-8-C-β-D-吡喃葡萄糖
苷(apigenin-8-C-β-D-glucopyranoside) ，即牡荆苷。
化合物 11:黄色颗粒状结晶，mp 217 ～ 219 ℃。
HＲ-ESI-MS m/z 593. 150 6［M － H］(calcd. For
C27H30O15)。
1H-NMＲ (DMSO-d6，400 MHz)δ:6. 74
(1H，s，H-3) ，13. 16(1H，s，OH-5) ，6. 24(1H，s，H-
6) ，10. 38(2H，brs，OH-7) ，8. 01(2H，d，J = 8. 80 Hz，
H-2，6) ，6. 91(2H，d，J = 8. 84 Hz，H-3，5) ，10. 38
(2H，brs，OH-4) ，4. 83(1H，d，J = 10. 08 Hz，Glu-H-
1)。13C-NMＲ (DMSO-d6，100 MHz)δ:163. 68(C-2) ，
103. 66(C-3) ，181. 91(C-4) ，160. 02(C-5) ，98. 20
(C-6) ，162. 88(C-7) ，105. 06(C-8) ，156. 18(C-9) ，
104. 41(C-10) ，121. 70(C-1) ，128. 82(C-2，6) ，
115. 81(C-3，5) ，161. 04(C-4) ，81. 74(Glu-C-1″) ，
·166·
中国药学杂志 2015 年 4 月第 50 卷第 8 期 Chin Pharm J，2015 April，Vol. 50 No. 8
70. 07(Glu-C-2″) ，71. 49(Glu-C-3″) ，81. 15(Glu-C-
4″) ，78. 38 (Glu-C-5″) ，60. 94 (Glu-C-6″) ，102. 59
(Glu-C-1) ，74. 33(Glu-C-2) ，75. 95(Glu-C-3) ，
69. 46(Glu-C-4) ，76. 21(Glu-C-5) ，60. 39(Glu-C-
6)。以上数据与文献［17］报道的芹菜素-8-C-β-D-
吡喃葡萄糖-(1-4)-β-D-吡喃葡萄糖苷一致，故鉴定
化合物 11 为芹菜素-8-C-β-D-吡喃葡萄糖-(1-4)-β-
D-吡喃葡萄糖苷［apigenin-8-C-β-D-glucopyranoside-
(1-4)-β-D-glucopyranoside］，即牡荆素-4″-O-葡萄
糖苷。
化合物 12:黄色粉末，mp 265 ～ 267 ℃。HＲ-
ESI-MS m/z 447. 092 8 ［M － H］ (calcd. For
C21H20O11)。
1 H-NMＲ (DMSO-d6，400 MHz)δ:6. 65
(1H，s，H-3) ，13. 18(1H，s，OH-5) ，6. 28(1H，s，H-
6) ，10. 81(1H，brs，OH-7) ，7. 49(1H，d，J = 2. 08 Hz，
H-2) ，10. 03(1H，brs，OH-3) ，9. 06(1H，brs，OH-
4) ，6. 87(1H，d，J = 8. 36 Hz，H-5) ，7. 54(1H，dd，
J = 8. 36，2. 08 Hz，H-6) ，4. 69(1H，d，J = 9. 84 Hz，
Glu-H-1)。13 C-NMＲ (DMSO-d6，100 MHz)δ:164. 06
(C-2) ，102. 39(C-3) ，182(C-4) ，160. 36(C-5) ，
98. 09(C-6) ，162. 51(C-7) ，104. 53(C-8) ，155. 97
(C-9) ，104. 02(C-10) ，122. 01(C-1) ，114. 06(C-
2) ，145. 78(C-3) ，149. 57(C-4) ，115. 63(C-5) ，
119. 35(C-6) ，73. 37(Glu-C-1) ，70. 75(Glu-C-2) ，
78. 75(Glu-C-3) ，70. 69(Glu-C-4) ，81. 97(Glu-C-
5) ，61. 62(Glu-C-6)。以上数据与文献［10］报道的
荭草素一致，故鉴定化合物 12 为荭草素(orientin)。
化合物 13:黄色粉末，mp 237 ～ 239 ℃。HＲ-
ESI-MS m/z 447. 092 9 ［M － H］ (calcd. For
C21H20O11)。
1H-NMＲ (DMSO-d6，400 MHz)δ:6. 67
(1H，s，H-3) ，13. 56(1H，s，OH-5) ，10. 55(1H，brs，
OH-7) ，6. 48(1H，s，H-8) ，7. 40(1H，d，J = 2. 28 Hz，
H-2) ，6. 90(1H，d，J = 8. 24 Hz，H-5) ，7. 43(1H，
dd，J = 8. 24，2. 16 Hz，H-6) ，4. 59(1H，d，J = 9. 80
Hz，Glu-H-1)。13 C-NMＲ (DMSO-d6，100 MHz) δ:
163. 20(C-2) ，102. 79(C-3) ，181. 84(C-4) ，156. 17
(C-5) ，108. 85(C-6) ，163. 63(C-7) ，93. 48(C-8) ，
160. 66(C-9) ，103. 40(C-10) ，121. 42(C-1) ，113. 30
(C-2) ，145. 72(C-3) ，149. 66(C-4) ，116. 03(C-
5) ，118. 95(C-6) ，73. 03(Glu-C-1) ，70. 60(Glu-C-
2) ，78. 93(Glu-C-3) ，70. 20(Glu-C-4) ，81. 54(Glu-
C-5) ，61. 47(Glu-C-6)。以上数据与文献［10］报道
的异荭草素一致，故鉴定化合物 13 为异荭草素
(isoorientin)。
4 体外抗肿瘤活性实验方法及结果
采用 MTT 法测定所得黄酮类化合物对肿瘤
细胞的增殖抑制活性，肿瘤细胞用含 10%新生牛
血清、1% 青霉素和链霉素(100 μg·mL － 1)的
DMEM 高糖培养液培养，37 ℃，5% CO2培养箱中
培养。将对数生长期的细胞配制成细胞悬液接
种于 96 孔板，密度为 5 × 104个·mL － 1，培养 24
h 贴壁后，加入不同质量浓度的含药培养基，使各
化合物的终质量浓度为 50 和 100 μmol·L － 1，同
时设置空白对照组和 5-氟尿嘧啶(5-Fu)阳性对
照组，培养 24 h 后弃上清，每孔加入 100 μL 0. 5
mg·mL －1 MTT 的 PBS 溶液，37 ℃孵育 4 h。再去
上清液，每孔加入 100 μL DMSO，震荡 10 min 使结
晶溶解后，在酶标仪 570 nm 处测定其吸光度值
(A) ，根据下式计算细胞抑制率。细胞抑制
率 =［1 －(药物组 A值 /对照组 A值) ］× 100%。抑
制率结果见表 1。
实验结果表明，三叶青中黄酮类成分在测定质
量浓度范围内对肿瘤细胞均具有一定的抑制作用，
表 1 三叶青中黄酮类化合物体外抗肿瘤活性． n = 6，珋x ± s
Tab. 1 The antitumor activity of the flavonoid compounds from
Tetrastigma hemsleyanum． n = 6，珋x ± s
No.
Concentration
/μmol·L －1
Inhibitory rate /%
Human
hepatocellular
carcinoma
cell line HepG2
Human
colorectal
carcinoma cell
line HCT-8
Human
lung cancer
cell line
A549
4 50 41. 74 ±3. 91 60. 64 ±8. 98 52. 35 ±5. 56
100 61. 03 ±2. 41 76. 36 ±3. 16 70. 12 ±6. 14
5 50 25. 20 ±2. 98 14. 99 ±1. 26 28. 00 ±1. 60
100 30. 72 ±4. 53 20. 13 ±0. 49 34. 33 ±2. 09
6 50 26. 61 ±1. 88 19. 20 ±1. 06 18. 35 ±0. 52
100 31. 09 ±0. 93 37. 79 ±2. 24 30. 02 ±1. 76
7 50 25. 89 ±1. 13 16. 48 ±0. 70 30. 48 ±1. 76
100 33. 61 ±1. 58 37. 58 ±3. 16 43. 48 ±1. 80
8 50 25. 71 ±2. 06 23. 38 ±1. 81 17. 89 ±0. 62
100 34. 73 ±1. 57 39. 68 ±3. 51 26. 13 ±2. 08
9 50 22. 88 ±1. 81 19. 36 ±1. 63 27. 02 ±0. 44
100 33. 30 ±1. 49 33. 88 ±2. 18 41. 59 ±0. 97
10 50 20. 65 ±0. 88 31. 30 ±1. 01 13. 69 ±0. 38
100 32. 31 ±2. 22 40. 79 ±1. 05 25. 31 ±2. 42
11 50 17. 55 ±1. 88 17. 86 ±0. 32 20. 10 ±0. 83
100 25. 31 ±1. 50 29. 18 ±0. 79 35. 32 ±1. 71
12 50 23. 49 ±0. 18 22. 69 ±1. 47 26. 89 ±1. 92
100 33. 42 ±2. 35 36. 99 ±1. 39 38. 77 ±2. 79
13 50 24. 61 ±1. 30 27. 94 ±5. 62 26. 36 ±2. 81
100 33. 97 ±2. 05 37. 60 ±3. 34 40. 09 ±2. 22
5-Fu 50 41. 50 ±0. 64 52. 52 ±1. 20 45. 21 ±0. 92
100 67. 42 ±0. 35 82. 36 ±0. 90 78. 34 ±0. 80
·266· Chin Pharm J，2015 April，Vol. 50 No. 8 中国药学杂志 2015 年 4 月第 50 卷第 8 期
其中化合物 4 芹菜素抗肿瘤作用较好，其对 HepG2，
HCT-8，A549 3 种癌细胞的半数抑制质量浓度分别
为(73. 16 ± 0. 96) ，(45. 04 ± 1. 25) ，(48. 66 ± 1. 56)
μg·mL －1。因此，我们初步认为黄酮类成分可能是
三叶青抗肿瘤作用的药效物质基础。
致谢:中国科学院福建物质结构研究所张旭东研究员在核磁
结构解析的帮助，福建中医药大学中西医结合研究院陈达鑫
在化合物质谱测定的帮助。
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