全 文 ：1. 60 ,日间精密度 RSD 为 1. 82 。表明方法的精密度良
好。
2. 3. 3　重复性实验　取 1号样品 5份 , 按 “ 2. 2”项下制备供
试品溶液 ,以上述色谱条件分别进样 20μL,测得其峰面积 ,计
算其 RSD为 2. 24 ,表明方法的重复性良好。
2. 3. 4　加样回收率实验　取已知含量的 1号样品 5份 , 分
别精密加入已知浓度的芒柄花素标准品 5, 10, 15, 20, 25 μL,
按 “ 2. 2”项制备样品 , 依 “ 2. 1”条件进样 ,结果加样回收率(n
=5)为 102. 6 。
2. 4　样品测定　10批次样品各平行取 3份 ,以上述色谱条
件进样 , 测得的芒柄花素含量见表 2,色谱图见图 2。
表 2　 不同批次甘草中芒柄花素含量测定结果
批次 含量 /m g /g 批次 含量 /m g /g
1 0. 110 30 8 0. 478 62
2 0. 406 06 9 0. 288 54
3 0. 397 32 10 0. 259 10
4 0. 583 68 11 0. 136 08
5 0. 265 88 12 0. 323 48
6 0. 027 12 13 0. 211 40
7 0. 217 48
3　讨论
3. 1　甘草中黄酮类成分复杂 , 可分为黄酮类 、黄酮醇类 、异
黄酮类 、查尔酮类 , 双氢黄酮类 、双氢查尔酮类等 , 化合物
150多种。等梯度洗脱无法得到有效的分离 ,我们选择了不
同的梯度洗脱 , 最终确定了本实验的梯度洗脱条件 , 得到了
分离度较好的色谱峰 。
图 2　样品色谱图
1芒柄花素
3. 2　我们在提取过程中采用了水 、50 甲醇 、甲醇 3种溶
剂 ,结果显示本实验提取方法芒柄花素含量最高 , 故选用上
述方法进行样品供试液制备。
3. 3　从实验数据上看 , 不同批次甘草黄酮中芒柄花素含量
相差较大 ,某些批次相差悬殊 ,其中原因有待进一步研究。
参考文献:
[ 1] 　董　菁 ,王秀梅 ,杨棉华 ,等.甘草叶中黄酮成分体外诱生细胞
毒因子的实验研究 [ J] .汕头大学医学院学报 , 1994, (2):9.
[ 2] 　王根生 ,韩哲武.甘草类黄酮对乙醇所致肝脏损伤的影响 [ J] .
中国药理学通报 , 1993, 9(4):271.
[ 3] 　张莲珠.甘草黄酮肠内菌代谢及吸收入血成分活性研究 [ D ] .
吉林:长春中医学院 2002.
[ 4] 　王明利 ,李春明 ,董　萍 ,等 ,甘草黄酮治疗黄褐斑临床疗效观
察 [ J] .辽宁药物与临床 , 2003, 6(3):128.
HPLC测定湿生扁蕾中熊果酸和齐墩果酸的含量
卢永昌 , 　林鹏程 , 　王杏芳
(青海民族学院化学系 青海 西宁 810007)
收稿日期:2006-06-15
作者简介:卢永昌(1965～ ),男 ,教授 ,研究方向:药物分析 ,电话:0971-6173363。
关键词:高效液相色谱;熊果酸;齐墩果酸;湿生扁蕾
中图分类号:R284. 1　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2007)08-1233-02
　　湿生扁蕾 (Gcn tianopsis paludosa(munro)M a. )为龙胆科
扁蕾属植物 , 也叫沼生扁蕾。 产于青海 、西藏 、四川等地 , —
年生草本 , 生于海拔 1 180 ～ 4 600米的海滩 , 沼泽地 ,山坡草
地。湿生扁蕾全草入药 , 具有镇咳 , 止痛 , 清热解毒 , 利湿消
黄 , 健脾止泻等功效 [ 1] 。是民间藏医用于治疗肝炎 ,胆囊炎 ,
热病发斑 , 目赤肿痛 , 消化不良 ,胃肠炎等单方草药 , 疗效显
著 [ 2, 3] 。齐墩果酸和熊果酸为湿生扁蕾中所含的活性成分 ,
前者具有较强的抑菌 ,强心 ,利尿和保肝作用 , 是肯定的免疫
增强剂 [ 5] 。后者除具有对中枢神经有明显的安定与降温作
用外 ,对多种恶性肿瘤细胞有抑制生长作用 [ 6, 7] 。有关齐墩
果酸的分离测定方法有比色法 [ 8] 、薄层一比色法 [ 9] 、高效液
相色谱法 [ 10] , 但对湿生扁蕾中以上两种活性成分的同时测
定尚末见报道。本文采用 HPLC测定湿生扁蕾中齐墩果酸
和熊果酸两种成分的含量 ,为评价湿生扁蕾药材的质量及研
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究开发提供依据。
1　仪器与试剂
　　Ag ilent 1100高效液相色谱仪 , 配置:手动进样器 , 在线
脱气机 , 高效二元梯度泵 , 恒温柱温箱 , DAD检测器;Ag ilent
1100色谱工作站 , KQ 3200超声波清洗器(昆山市超声仪器
有限公司), SZ -97自动三重纯水蒸馏器 (上海亚荣生化仪
器厂)。
齐墩果酸 、熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所)。
甲醇为色谱纯(山东禹王实业有限公司禹城化工厂), 水:自
制三重蒸馏水;磷酸二氢钾等均为分析纯。湿生扁蕾 2004
年 7月采于青海省北山林场 , 由中国科学院西北高原生物研
究所魏立新研究员鉴定。样品阴干 ,粉碎后 , 过 80目筛 , 冷
藏保存。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件　色谱柱:K rom asil C18柱(250 mm ×4. 60 mm
5 μm), 流动相:甲醇 -水(含 0. 04 磷酸二氢钾)=87∶13,
流速:0. 8 mL /m in, 检测波长:215 nm , 柱温:35 °C。分离图
谱见图 1。
图 1(A)　熊果酸和齐墩果酸混合对照品
1齐墩果酸
图 1(B)　湿生扁蕾样品的 HPLC图谱
2熊果酸
2. 2　对照品溶液的制备　精密称取对照品熊果酸 16. 4 mg,
齐墩果酸 22. 0 mg, 分别置 100 m L量瓶中 , 以甲醇溶解并定
容 , 配置成相应浓度的对照品储备液。
2. 3　供试品溶液的制备　精确称取 80目的湿生扁蕾的样
品 1 g,加分析甲醇 15 m L,超声提取 45 m in后 ,抽滤 ,以甲醇
洗涤滤渣 3次 , 每次 2 m L;滤渣重复上述操作 , 所得滤液与
前一次滤液合并 , 浓缩 , 用甲醇定容至 25 mL的量瓶中。过
0. 45μm滤膜 , 即得。
2. 4　线性关系　取熊果酸和齐墩果酸对照品储备液 ,用流
动相溶解并稀释成每 1 mL. 含熊果酸 0. 016 4 mg, 齐墩果酸
0. 022 0 m g的混合溶液。精密吸取 2. 0, 2. 5 , 5. 0, 10. 0,
15. 0, 20. 0, 25. 0μL。以对照品的进样量为横坐标(X), 峰面
积的积分值为纵坐标 (Y), 求得标准曲线的回归方程 , 熊果
酸:Y =821. 48X - 5. 516, r=0. 999 9, 在 0. 033 ～ 0. 41 μg的
范围内有良好的线性关系;齐墩果酸:Y =882. 43X - 43. 69, r
=0. 999 8, 在 0. 044 ～ 0. 55μg的范围内有良好的线性关系。
2. 5　精密度试验　分别取 0. 016 4 m g /m L的熊果酸和
0. 022 0 mg /mL齐墩果酸 ,在选定的色谱条件下测定色谱峰
的峰面积 ,计算得 RSD 分别为 0. 72 , 1. 09 (n =6)表明仪
器精密度良好。
2. 6　重复性试验　取同—供试品 , 依本方法独立测定 5次 ,
熊果酸的 RSD为 1. 3 ,齐墩果酸为 0. 9 。
2. 7　稳定性试验　取同一供试品溶液 , 隔一定时间进样 1
次 ,结果在 24 h内 , 供试品中熊果酸和齐墩果酸含量稳定。
2. 8　检出限测定　在选定的色谱条件下 , 测得当信噪比为
S /N=3时 , 熊果酸和齐墩果酸的最低检出限为 12. 3 ng和
3. 3 ng。
2. 9　回收率试验　精密称取已知含量的供试品约 1 g, 一式
10份 ,前 5份分别精密加入熊果酸对照品溶液 ,后 5份分别
精密加入齐墩果酸对照品溶液 , 依法测定 , 计算回收率结果
见表 1。
表 1　 加样回收率试验结果(n=5)
样品
种类
样品
含量 /mg
加入量
/m g
测定量 /
m g
回收率
/
平均回
收率 /
RSD
1. 017 5 0. 865 1 1. 727 99. 63
1. 016 4 0. 865 1 1. 699 7 96. 47
熊果酸 1. 018 8 0. 865 1 1. 720 3 98. 86 97. 59 1. 57
1. 015 3 0. 865 1 1. 699 7 96. 48
1. 019 2 0. 865 1 1. 7 96. 51
0. 851 0. 723 9 1. 445 4 99. 67
0. 850 8 0. 723 9 1. 438 5 98. 72
齐墩果酸 0. 852 1 0. 723 9 1. 446 4 99. 81 99. 25 0. 63
0. 853 3 0. 723 9 1. 445 99. 61
0. 850 9 0. 723 9 1. 436 5 98. 44
2. 10　样品测定　称取 5份各 1 g湿生扁蕾药材 , 按 2. 1项
条件方法操作 , 分别测定熊果酸与齐墩果酸的含量分别为
1. 02 mg /g(RSD =2. 1 n =5)和 0. 85 m g /g(RSD =1. 2 n =
5)。
3　讨论
3. 1　检测波长的确定　取各对照品溶液 , 按色谱条件进样 ,
利用 DAD检测器在 190 ～ 400 nm 扫描得各自溶液的紫外吸
收光谱 ,在 207 nm左右有最大吸收 ,但考虑到甲醇作为流动
相 ,故选择 215 nm作为检测波长。
3. 2　流动相的选择　由于熊果酸和齐墩果酸为五环三萜类
化合物 ,是同分异构体 ,两者不易分离 , 曾采用多种流动相 ,
分离效果都不理想 , 经试验用甲醇和水作流动相 , 在水中加
入 0. 04 的磷酸二氢钾时可使两者很好的分离 , 故选择甲
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醇和含 0. 04 的磷酸二氢钾的水作为流动相 。
3. 3　所建立的方法具有简便 ,快速 , 结果准确 ,可靠等优点 ,
对于评价药材质量与新药物的研制有重要意义。
参考文献:
[ 1] 　罗达尚.藏药资源及其研究开发 [ J] .中国藏药学. 1997, 4:2.
[ 2] 　纪兰菊.青海龙胆科植物部分藏药植物化学成分研究进展
[ J] .高原生生物学集刊 , 2002, 2:243.
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版杜 , 1996:123-124.
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60细胞凋亡的实验研究. [ J]中国中西医结合杂志 , 1999, 19
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[ 8] 　沙世炎.中草药有效成份分析法 [M ] 　上册 北京:人民卫生
出版社 , 1982:204-205.
[ 9] 　沙世炎.中草药有效成分分析法 [M ] 　下册 北京:人民卫生
出版社 , 1982:202-203.
[ 10] 　杨慧玲 ,刘建全.不同地区和生长物候期藏药花锚有效成分
齐墩果酸的含量变化研究 [ J] . 中国药学杂志, 2004, 39(9):
659.
聚酰胺膜在橄榄苦苷分离上的工艺研究
游双银 1 , 　尹卫平 1 , 　张　丽2 , 　王忠东 1
(1河南科技大学化学工艺天然产物重点实验室 河南洛阳 , 471003;2洛阳师范学院化学工艺实验室 ,河南洛
阳 , 471022)
收稿日期:2006-11-15
基金项目:河南省洛阳市十一五规划基金项目(0602046A-15)
作者简介:游双银(1982～ ),女 ,硕士生 ,从事天然产物分离及膜分离技术的研究 ,电话:13849902371。
关键词:聚酰胺;超滤;纳滤;橄榄苦苷
中图分类号:R284. 2　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2007)08-1235-03
　　橄榄苦苷是一种重要的苯酚类裂环环烯醚萜苷 [ 1] ,广泛
存在于木犀科的木犀榄属 、丁香属 、女贞属 、木犀属和茉莉属
植物中 , 到目前为止已提取分离出橄榄苦苷的木犀科植物至
少在 25种以上。研究表明 [ 2]橄榄苦苷具有抗真菌 、抗炎 、抗
病毒 、抗氧化以及抗癌和降血糖等多种作用 , 传统上从小叶
丁香花中提取橄榄苦苷多采用以下工艺:小叶丁香花→乙醇
回流提取→渗滤浓缩→溶剂萃取→正丁醇浸膏→柱层析分
离→橄榄苦苷。但是这种工艺存在以下问题:大量有机溶剂
的使用可能会破坏成分 , 增大生产成本 , 同时也造成环境污
染;提取步骤繁琐 ,生产周期长。中草药中化学成分非常复
杂 , 但是其药物有效成分如生物碱 、黄酮类 、苷类 、萜类等物
质的相对分子质量较小 , 一般不超过 1 000, 而蛋白质 、纤维
素等非药用性成分的相对分子质量较大 , 一般在 5万以上 ,
基于中草药中有效成分和非药用性成分相对分子质量相差
较大 , 利用超滤和纳滤膜分离的筛分机理可以将其很好的提
取 、纯化 ,从而提高有效成分的相对含量 [ 3] 。
膜分离技术具有高效 [ 4] 、过程基本无相变 , 可在常温下
运作以及工艺简单 、无污染等优点 ,已成为一项新兴的用于
澄清 、分离 、浓缩等方面的绿色和节能技术 , 在食品 、生物医
药 、环保 、化工等领域得到了较为广泛的应用。将膜分离技
术应用于中药有效成分的提取分离研究十分活跃 , 是膜分离
技术重点推广的领域之一 , 本研究正是利用膜分离技术 (主
要是超滤和纳滤)的 “筛分机理”即膜孔径大小特征 , 采用分
子截留手段将植物药用成分截留为具有某一相对分子质量
区段的多种成分来分离橄榄苦苷 ,简化生产过程 , 降低对环
境的污染。
1　仪器与方法
1. 1　小型超滤纳滤装置　江苏无锡膜科技发展有限公司制
造;超滤膜:切割相对分子质量 1 500(M olecuarWe igh t ofCu t-
Off,简称 MWCO 1 500);纳滤膜:MWCO 500和 MWCO 200
(膜材料均由江南大学化学与材料工程学院提供);膜材质:
聚酰胺膜(尼龙-66)。
1. 2　高效液相色谱分析仪　大连依利特分析仪器有限公司
制造;其主要设备有 UV230紫外-可见检测器 , P230 /P230p
高压恒流泵 , EC2000 /EC2003色谱数据处理系统。
1. 3　试验工艺　小叶丁香原料 95 乙醇回流提取 粗提液
预处理 提取液 超滤 纳滤 浓缩液 柱层析分
离纯化。
2　结果与讨论
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第 29卷　第 8期
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