全 文 ：广东不同产地南板蓝根药材中腺苷含量的测定
李世杰，陈奕龙，张丹雁* (广州中医药大学中药学院，广东广州 510405)
摘要 ［目的］测定广东不同产地南板蓝根药材中有效成分腺苷的含量。［方法］建立南板蓝根药材中腺苷的 HPLC含量测定方法;色谱
条件为: ZORBAX Extend-C18色谱柱( 4． 6 mm ×250 mm，5 μm) ;流动相为无水甲醇 －水( 7∶ 93，V/V) ;检测波长为 260 nm;流速为 1． 0
ml /min;柱温为 30 ℃。［结果］在 4． 65 ～ 232． 6 ng /ml 范围内，腺苷浓度与峰面积有良好的线性关系，加样回收率为 100． 3%，RSD 为
2． 2% ( n =6) ;广东从化市样品中的腺苷含量最高，2种野生品种含量最低。［结论］该方法操作简便、准确快速、重现性好，可有效控制
南板蓝根药材的质量。
关键词 南板蓝根;腺苷; HPLC
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611( 2012) 26 －12852 －03
Comparison of the Content of Adenosine Contained in RHIZOMA ET RADIX BAPHICACANTHIS CUSIAE from Different Produc-
tion Places in Guangdong Province
LI Shi-jie et al ( College of Chinese Materia Medica，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou，Guangdong 510405)
Abstract ［Objective］To make the use of high performance liquid chromatographic method ( HPLC) to determine the content of active ingre-
dient adenosine in RHIZOMA ET RADIX BAPHICACANTHIS CUSIAE from different production places in Guangdong Province． ［Method］A
HPLC method was established for determining the content of adenosine． To be specific，HPLC analysis was performed on a chromatographic
column ZORBAXExtend-C18 ( 4． 6 mm × 250 mm，5 μm) with methanol-water( V /V，7∶ 93) as the mobile phase，detection wavelength at 260
nm，flow rate at 1． 0 ml /min and column temperature at 30 ℃ ． ［Result］Adenosine had good linear relationship between concentration and
peak area from 4． 65 to 232． 6 ng，the recovery rate was 100． 3%，RSD = 2． 2% ( n = 6) ; the sample from Conghua in Guangdong Province
had the highest content，while the two wild species had the lowest of that． ［Conclusion］The method is simple，accurate，rapid and reproduci-
ble． It can complete the existing quality standard of RHIZOMA ET RADIX BAPHICACANTHIS CUSIAE compound feed additives，and make
the control of quality efficiently．
Key words RHIZOMA ET RADIX BAPHICACANTHIS CUSIAE; Adenosine; HPLC
基金项目 广东省科技计划项目( 2010B030700067) 。
作者简介 李世杰( 1989 － ) ，男，江苏南京人，硕士研究生，研究方向:
中药鉴定及中药化学，E-mail: lisj666@ 163． com。* 通讯作
者，教授，硕士生导师，从事中药品种及真伪鉴别和中药质
量标准的研究，E-mail: danyan64@ 21cn． com。
收稿日期 2012-04-24
南板蓝根(RHIZOMA ET RADIX BAPHICACANTHIS
CUSIAE)来源于爵床科植物马蓝(Baphicacanthus cusia
(Nees)Bremek．)的干燥根茎及根。其性寒、味苦，归心、胃
经，具有清热解毒和凉血利咽的功效［1］。现代研究表明，南
板蓝根具有抗炎［2］、抗病毒［3］、抗病原微生物［4］、抗癌以及增
强免疫力［5］等作用。近年来，随着其药理、药效作用研究的
不断深入，特别是对 SARS 的防治作用被肯定后，该药再次
成为研究的热点。但是，2010 版《中国药典》中南板蓝根项
下只收载了以靛蓝及靛玉红为对照的薄层鉴定方法以控制
板蓝根及其饮片的质量，而没有收载指标成分的含量控制方
法，且缺乏针对具有抗炎作用的腺苷含量的控制方法，不利
于南板蓝根药材质量的控制。而且，关于南板蓝根中腺苷含
量指标的研究鲜有报道。因此，笔者考察了南板蓝根药材中
腺苷的含量测定方法，以期为南板蓝根药材的质量控制标准
提供依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。药材共 8 批，经广州中医药大学中药鉴
定教研室张丹雁教授鉴定，均为爵床科马蓝(Baphicacanthus
cusia(Nees)Bremek)的根茎及根，样品Ⅰ～Ⅷ分别来源于:广
东韶关、广东从化、广东从化(野生品)、广东睦州、广东徐闻、
广东围垦、广州中医药大学药王山和广东河源(野生品)。
1． 1． 2 主要仪器。DJ-10A 倾斜式粉碎机，购自上海淀久中
药机械制造有限公司;KQ-250B 型超声波清洗器，购自昆山
市超声仪器有限公司;FA2004 电子天平，购自上海恒平科学
仪器有限公司;MX5 百万分之一精密天平，购自瑞士 MET-
TLER TOLEDO公司;ZORBAX Extend-C18色谱柱，购自美国
安捷伦公司;Waters515 型高效液相色谱仪和 Waters 2487
Dual λ Absorbance Detector检测器，均购自美国Waters公司。
1． 1． 3 主要试剂。腺苷对照品，购自中国药品生物制品检
定所，批号 110879-200702;甲醇为色谱纯，购自天津市大茂化
学试剂厂;蒸馏水，自制。
1． 2 方法
1． 2． 1 色谱条件。色谱柱为 ZORBAX Extend-C18 色谱柱
(4． 6 mm × 250 mm，5 μm) ;流动相为无水甲醇 －水(7∶ 93，
V /V) ;检测波长为 260 nm;流速为 1． 0 ml /min;柱温为 30 ℃;
进样量为 10 μl。
1． 2． 2 标准溶液的制备。精密称取 2． 326 mg经五氧化二磷
干燥至恒重的腺苷对照品，以浓度 10%甲醇稀释溶解并定容
至 100 ml，即得浓度为 23． 26 μg /ml 的Ⅰ号标准溶液，精确吸
取 1 ml至 10 ml的量瓶中，用浓度 10%甲醇定容至刻度，摇
匀，即得浓度为 2． 326 μg /ml的Ⅱ号标准溶液。
1． 2． 3 供试品溶液的制备。精密称取 2． 000 g 经五氧化二
磷干燥至恒重的南板蓝粉末，精密加入 20 ml 浓度 10%甲
醇，称定重量，超声提取 45 min，以浓度 10%甲醇补足重量，
摇匀过滤取续滤液，即得供试品溶液。
1． 2． 4 系统适应性试验。取制备的供试品溶液和对照品溶
液适量，在“1． 2． 1”色谱条件下进行测定，建立 HPLC 色谱
责任编辑 石金友 责任校对 卢瑶安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2012，40(26):12852 － 12854
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.26.129
图，考察系统适应性。
1． 2． 5 方法学考察。①线性关系的考察。分别精密吸取Ⅰ号
标准溶液 2 ml及Ⅱ号标准溶液 2和 5 ml 至 10 ml 容量瓶中，
用浓度 10%甲醇定容至刻度，加上Ⅰ号及Ⅱ号标准溶液，即得 5
个不同浓度的标准液。依据“1． 2． 1”项下选定的色谱条件进
行测定，以对照品进样浓度为横坐标(X) ，峰面积为纵坐标
(Y)绘制标准曲线，计算回归方程。②精密度试验。将同一
标准浓度溶液(2． 28 μg /ml)连续进样 6 次，按“1． 2． 1”项下
的色谱条件进行含量测定，记录腺苷峰面积，并计算 RSD。
③稳定性试验。将同一供试品液按“1． 2． 1”项下的色谱条
件，分别于 0、3、6、9、12 和 16 h各进样 1 次，记录峰面积，计
算各时间段腺苷峰面积的 RSD。④重现性试验。精密称取
同一批南板蓝样品粉末各 6 份，按“1． 2． 2”项下供试品溶液
制备方法制备供试品，按“1． 2． 1”项下的色谱条件进行含量
测定，记录腺苷峰面积，并计算 RSD。⑤加样回收率试验。
精密称取 2． 000 g的已知含量的南板蓝根粉末 6 份，分别精
密加入 2． 61 μg /ml的标准储备溶液 5． 00 ml，按“1． 2． 2”项下
供试品溶液制备法处理，依次测定，计算平均加样回收率和
RSD。
1． 2． 6 南板蓝中腺苷含量测定。分别取 8 份采摘的南板蓝
根样品，按照“1． 2． 3”中方法制备供试品溶液，然后在
“1． 2． 1”色谱条件下进行测定，并以线性回归方程计算其中
腺苷的含量。每份南板蓝样品平行检测 3次，检测结果采用
“珋x ± s”表示。
2 结果与分析
2． 1 系统适应性试验 图 1表明，在试验色谱条件下，待测
组分可达到较好的基线分离，且各组分之间物干扰。表明系
统适应性良好。
注:A为腺苷对照品，B为南板蓝样品。
图 1 南板蓝根腺苷 HPLC图谱
2． 2 方法学考察 ①线性关系的考察。计算得回归方程
为:Y =59 123X － 164 367，R = 0． 999 7。试验结果表明，在
4. 65 ～232． 6 ng /ml的范围内腺苷浓度与峰面积的线性关系
良好。②精密度试验。计算得腺苷峰面积的 RSD 为 1． 3%
(n =6) ，表明精密度良好。③稳定性试验。计算得各时间段
腺苷峰面积的 RSD为 2． 4%，表明样品溶液在 16 h内稳定。
④重现性试验。计算得腺苷峰面积的 RSD为 1． 1%(n = 6) ，
表明该试验的重现性良好。⑤加样回收率试验。由表 1 可
知，平均加样回收率为 100． 3%，RSD为 2． 2%，表明该测量方
法准确、可靠，可用于南板蓝根中腺苷的含量测定。
表 1 加样回收试验结果
序号
样品含量
ng
添加量
ng
测定值
ng
回收率
%
平均回收率
%
RSD
%
1 19． 722 6． 7 26． 526 101． 6
2 19． 703 6． 7 26． 649 103． 7
3 19． 708 6． 7 26． 276 98． 0 100． 3 2． 2
4 19． 732 6． 7 26． 302 98． 1
5 19． 699 6． 7 26． 471 101． 1
6 19． 711 6． 7 26． 384 99． 6
2． 3 南板蓝中腺苷含量测定 由表 2可知，8种来源的南板
蓝根样品中腺苷的含量分别为:(49． 76 ±0． 79) (韶关新丰)、
(73． 16 ± 1． 26) (从化)、(5． 57 ± 0． 19) (从化野生品)、
(28． 56 ±0． 32) (睦州)、(20． 19 ± 0． 58) (徐闻)、(61． 08 ±
0． 63) (围垦)、(31． 93 ±0． 82) (药王山)和(7． 45 ± 0． 21) (河
源野生品)μg /g。其中，腺苷含量最高的为从化的栽培品;其
次是围垦的栽培品;2种野生品的含量最低。
表 2 南板蓝根样品中腺苷的含量 μg /g
编号 样品来源 含量
Ⅰ 韶关新丰 49． 76 ±0． 79
Ⅱ 从化 73． 16 ±1． 26
Ⅲ 从化(野生品) 5． 57 ±0． 19
Ⅳ 睦州 28． 56 ±0． 32
Ⅴ 徐闻 20． 19 ±0． 58
Ⅵ 围垦 61． 08 ±0． 63
Ⅶ 药王山 31． 93 ±0． 82
Ⅷ 河源(野生品) 7． 45 ±0． 21
3 结论与讨论
试验建立了一种南板蓝根药材中腺苷的 HPLC 法含量
测定方法，并对来自 8个不同产地的南板蓝根药材进行了鉴
别和相关成分的检测。该方法专属性强、操作简便，结果可
靠、重现性好，可完善现行南板蓝根的质量标准、有效控制南
板蓝根药材及其制剂的质量，为此类药材和制剂的质量控制
提供了一个新的思路。
为了使马蓝快速生长，以获得更大的经济效益，药农往
往会对栽培品种进行人工增肥，而野生品却只能从土壤中汲
取养分，没有额外的肥料来源。所以，广东不同地区所采集
3582140 卷 26 期 李世杰等 广东不同产地南板蓝根药材中腺苷含量的测定
的马蓝样品里野生马蓝的腺苷含量远低于栽培品种，说明肥
料对南板蓝中腺苷含量影响较大。
参考文献
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78 －80．
( 上接第 12772页) 量变化较大，说明在区分 5类模体可重点考虑 I、V、L、E在这
图 1 氨基酸出现概率统计结果
些位置出现的频率。
2 讨论
由以上统计分析得到了区分 5类模体的有用信息，分析
得出对于 Loop位置应重点考虑 N 端和 C 端即与 N 端 C 端
相连的各 3个位置的氨基酸信息，共 8 个氨基酸信息。但对
于一条未知结构的蛋白质序列，则需要知道其中的 Loop 序
片段列。因此首先需预测 Loop 片段，就可利用笔者得到的
信息，对任给的蛋白质序列预测超二级结构，下一步的工作
将在这方面努力。另外，氨基酸亲疏水性对蛋白质超二级结
构影响较大，笔者在此未考虑亲疏水性信息，下一步将综合
考虑 20氨基酸指标和亲疏水、极性［4］等信息，将有利于进一
步预测。
参考文献
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