全 文 ：伤后可引起呼吸链有关蛋白质亚单位的合成障碍 ,形成有缺陷
的呼吸链 , 正常的线粒体数量减少 , ATP合成下降 ,细胞所需的
能量不足 , 从而出现一系列的衰老症状。
　　康欣口服液是在明代古方 “神仙不老丸”的基础上 , 结合
10余年来中药抗衰老现代药理研究成果 ,并在中医抗老防衰理
论的指导下 , 从调节机体的内环境着眼 , 融传统与现代为一体 ,
精心研制的纯中药复方。 该方为补肾健脾养血活血法的代表
方 , 而补肾方药从清除自由基 , 提高氧化酶活力等在生化水平
方面的研究已有大量的报道。近年来 ,王学美等在分子水平上
对补肾药复方五子衍宗丸及其拆方进行系列研究 ,表明复方五
子衍宗丸及其拆方菟丝子 、枸杞子均可明显减少老年大鼠心 、
脑 、骨骼肌组织及肾虚老年人外周血白细胞中 mtDNA的缺失
率 , 提高线粒体呼吸链复合酶Ⅳ的活力。说明补肾药对 mtDNA
有保护作用 〔7 ～9〕。本实验结果表明 , 老年小鼠服用康欣口服液
后 , 其肾脏组织中 mtDNA的缺失明显减少。提示康欣口服液
可以抑制老年小鼠 mtDNA的缺失突变 , 减少自由基对 mtDNA
的氧化损伤 , 从而延缓衰老。此结果在分子水平上 , 提供了补
肾健脾养血活血组方延缓衰老作用的可能机制。
4　参考文献
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7　王学美 ,富　宏 ,刘庚信 .五子衍宗丸及其拆方对老年大鼠心脑线
粒体 DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及 ATP合成的影响〔J〕.中
国中西医结合杂志 , 2001;21(6):437-40.
8　王学美 ,富　宏 ,刘庚信.肾虚衰老与线粒体 DNA氧化损伤关系的
研究〔J〕.中医杂志 , 2002;43(4):294-5.
9　王学美 ,富　宏 ,刘庚信 .五子衍宗丸对男性老年肾虚者外周血白
细胞线粒体 DNA缺失及线粒体呼吸链酶复合体活力的影响〔J〕.中
国中西医结合杂志 , 2002;22(2):101-3.
〔2006-02-11收稿　2006-04-03修回〕
(编辑　胡国义)
琼枝麒麟菜多糖对衰老模型小鼠血浆和肝中 SOD、CAT、MDA的影响
吴显劲　孟庆勇 1　(广东医学院附属医院检验科 ,广东　湛江　524001)
　　〔摘　要〕　目的　探讨琼枝麒麟菜多糖(Eucheumagelatinaepolysaccharide, EGP)对衰老模型小鼠氧化自由基的影响。方法　检测小鼠血浆和
肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)并进行对比分析。结果　200mg/kg和 400 mg/kg的 EGP不仅能明显降低衰老模
型小鼠血清和肝脏的 MDA含量 ,而且能够提高 SOD和 CAT活性 ,并呈剂量依赖性增强。 100mg/kg的 EGP对衰老模型小鼠肝脏 SOD、小鼠血浆和
肝脏 CAT也有明显的促进作用。结论　琼枝麒麟菜多糖具有清除衰老模型小鼠自由基和抑制脂质过氧化的作用。
〔关键词〕　海藻多糖;超氧化物歧化酶;过氧化氢酶;丙二醛;抗衰老
〔中图分类号〕　R217.7　R151.2　R285.5　　〔文献标识码〕　A　　〔文章编号〕　1005-9202(2006)05-0652-03
1　广东医学院分析中心
作者简介:吴显劲(1973-),男 ,主管技师 ,主要从事海洋药物生化学研究。
　　琼枝麒麟菜(Eucheumagelatinae)中含有丰富的多糖 , 主要
由半乳糖组成 , 同时还含有少量的葡萄糖 、木糖 、塔罗糖和艾杜
糖。近年来研究表明麒麟菜多糖具有抗病毒 、抗菌作用 〔1 , 2〕 ,但
其抗衰老作用未见报道。本实验采用 D-半乳糖所致亚急性衰
老小鼠为模型 , 观察琼枝麒麟菜多糖(Eucheumagelatinaepoly-
saccharide, EGP)对衰老模型小鼠抗氧化酶和丙二醛的影响 ,探
讨 EGP抗衰老作用 , 为麒麟菜多糖成为临床抗衰老的保健药
物提供证据。
1　材料与方法
1.1　材料　EGP由本实验室提取。昆明雄性清洁级小鼠 , 6 ～
8周龄 ,体重(20±2)g, 广东医学院动物中心提供。 SOD, CAT,
MDA检测试剂盒(南京建成生物工程公司)。紫外可见分光光
度计(UV-3101PC型 ,日本 SHIMADZU公司),内切式组织匀浆
器(ZS83-1型 , 浙江浙西机械厂), 高速冷冻离心机(Mega-
fuge1.OR型 ,德国 HERAEUS公司)。
1.2　方法
1.2.1　肝组织匀浆的制备　处死小鼠 ,取出肝脏 ,立即用冷生
理盐水漂洗 , 去除血液后用滤纸吸干。取 0.5 g肝组织置匀浆
管中 , 加入 4.5 ml冰冷的 匀浆介 质 (10 mmol/L蔗糖 ,
10 mmol/LTris-HCl, 0.1 mmol/LEDTA· 2Na), 用内切式组织
匀浆器冰浴匀浆 3 min(1500 r/min), 制成 10%(W/V)的肝匀
浆备用。
1.2.2　分组　将小鼠随机分为空白对照(A)组 、模型(B)组和
3个不同浓度 EGP(C、D、E)组 , 每组 10只。 除 A组外每天颈
·652· 中国老年学杂志 2006年 5月第 26卷
背部皮下注射 D-半乳糖(生理盐水配成 5%, 注射量为 0.25%)
复制糖代谢衰老模型 , 每 4 d称体重 1次 , 根据体重调整用药
量。连续给 D-半乳糖 40 d, 从第 10天开始 C、D、E组分别灌服
大 、中 、小剂量的 EGP水溶液 , A、B组小鼠每天分别灌服同体
积的生理盐水 , 每天给药 1次 , 连续给药 30 d。于最后 1次给
D-半乳糖和灌药后 2 h,取眼球静脉血后脱臼处死 ,再取肝脏进
行各项指标测定。
1.2.3　指标测定　SOD活性检测用黄嘌呤氧化酶法 〔3〕, CAT活
性用钼酸铵显色法 〔4〕 , MDA含量用硫代巴比妥酸结合显色法〔5〕。
1.3　统计学处理　实验数据用 x±s表示 ,用 SAS8.2统计软
件进行单因素方差分析。
2　结　果
2.1　SOD活性变化　表 1显示 B组小鼠血浆 SOD活性明显
低于 A组(P<0.01), D组和 E组小鼠血浆 SOD活性降低程度
比 B组明显减小(P<0.05, P<0.01)。 C组小鼠血浆 SOD活
性与 B组比较 , 亦有一定的升高 , 但无统计学差异(P>0.05)。
肝脏 SOD活性的变化:B组小鼠肝脏 SOD活性明显低于 A组
(P<0.01);C、D、E组 SOD活性均显著高于 B组(P<0.01),
且效果随着 EGP剂量的增大而增强(表 1)。
表 1　EGP对衰老模型小鼠血浆 SOD活性的影响(n=10, U/ml, x±s)
组别 EGP用量(mg/kg)
血浆
T-SOD　　　　　Mn-SOD　　　　　Cu, Zn-SOD
肝脏
T-SOD　　　　　Mn-SOD　　　　　Cu, Zn-SOD
A 0 499.3±28.5 199.2±11.6 300.1±16.9 75.4±7.8 22.6±2.8 52.8±5.0
B 0 395.7±25.11) 158.3±9.91) 237.4±15.21) 32.3±5.51) 9.3±1.61) 23.0±3.91)
C 100 401.8±28.5 160.2±12.6 241.6±15.9 44.7±5.83) 14.6±1.53) 30.1±4.33)
D 200 451.8±21.93) 178.9±10.33) 272.9±11.62) 53.1±7.63) 16.4±2.73) 36.7±4.93)
E 400 476.4±22.73) 190.2±9.13) 286.2±13.63) 60.7±6.53) 18.8±2.13) 41.9±4.43)
　与 A组比较:1)P<0.01;与 B组比较:2)P<0.05, 3)P<0.01;下表同
2.2　CAT活性的变化　表 2显示 B组小鼠血浆和肝脏CAT活
性明显低于 A组(P<0.01),且以肝脏 CAT活性的下降更为显
著;D组和 E组小鼠血浆和肝脏 CAT活性降低程度比 B组明显
减小(P<0.01)。 C组小鼠血浆 CAT活性明显高于 B组(P<
0.05), 但 400 mg/kg的 EGP对肝脏 CAT活性的升高效果更好
(P<0.01)。
表 2　EGP对衰老模型小鼠 CAT活性的影响(x±s)
组别 EGP用量(mg/kg)
CAT含量
血浆(U/ml)　　　肝脏(U/mg)
A 0 17.1±2.9 321.5±28.7
B 0 8.3±1.81) 109.9±28.91)
C 100 9.5±2.32) 160.6±11.43)
D 200 11.7±1.63) 178.3±14.83)
E 400 14.8±2.03) 239.2±30.63)
2.3　MDA含量的变化　表 3显示 B组小鼠血浆和肝脏 MDA
含量明显高于 A组(P<0.01), D组和 E组小鼠血浆和肝脏
MDA含量降低程度比 B组明显减小(P<0.01)。
表 3　EGP对衰老模型小鼠 MDA含量的影响(x±s)
组别 EGP用量(mg/kg)
MDA含量
血浆(U/ml)　　　肝脏(U/mg)
A 0 5.8±1.4 2.0±0.7
B 0 10.9±1.51) 3.9±0.51)
C 100 8.9±2.0 3.6±0.7
D 200 7.9±1.83) 2.9±0.33)
E 400 6.9±1.93) 2.5±0.53)
3　讨　论
　　SOD、CAT是体内清除自由基的重要抗氧化酶。 MAD是过
氧化脂质的降解产物 , 其含量与年龄增长呈正相关。 SOD、CAT
酶活力的高低间接反映了机体清除氧自由基能力大小 〔6〕。本
研究显示经 D-半乳糖致衰老模型小鼠血清和肝脏 SOD水平降
低 、CAT活力下降 、MDA含量增高 , 表明经 D-半乳糖注射小鼠
体内产生氧化损伤 ,脂质过氧化物的体内蓄积量增大。
　　本实验显示 EGP不仅对衰老模型小鼠 SOD的活性有促进
作用(表 1), 而且对 CAT的活性也有明显的提高(表 2), 同时
能够抑制 MDA含量的增加(表 3)。说明海藻多糖的抗衰老作
用与其提高抗氧化酶的活性和抑制脂质过氧化物的产生等抗
氧化作用密切相关。孟庆勇等 〔7〕发现半叶马尾藻多糖能够显
著降低辐射损伤小鼠血浆和肝脏 LPO(脂质过氧化物)的含量 ,
增加 SOD和 CAT的活性。表明半叶马尾藻多糖具有清除自由
基和抗脂质过氧化的作用 , 与本实验中 EGP的抗氧化作用相
似。这说明海藻多糖不仅可以提高辐射损伤小鼠的抗氧化酶
活性 ,对衰老模型小鼠的自由基也有清除作用。 H2O2是强氧
化剂 ,对淋巴细胞 DNA的损伤 , 严重干扰了淋巴细胞的正常功
能。单细胞电泳显示 100 mg/L和 200 mg/L的褐藻多糖对
H2O2的这种损伤作用有明显的保护作用 〔8〕 , 提示海藻多糖的
抗氧化作用除通过提高抗氧化酶的活性而发挥之外 ,其直接清
除自由基和抗氧化功能也不容忽视。
4　参考文献
1　郭　凌 ,包惠燕 ,叶绍明 ,等 .琼枝麒麟菜和异枝麒麟菜硫酸多糖及
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〔2005-06-27收稿　2006-02-10修回〕
(编辑　胡国义)
膀胱癌组织端粒酶活性表达及其与临床病理特征关系的研究
许　宁　石爱平 1　王春喜　王有德 1　(吉林大学第一医院泌尿外科 ,吉林　长春　130021)
　　〔摘　要〕　目的　探讨膀胱移行细胞癌(transitionalcelscarcinoma, TCC)组织端粒酶活性表达与膀胱癌临床病理特征的关系。方法　应用端粒
酶重复序列扩增(telomericrepeatamplificationprotocol, TRAP)银染 TRAP-ELISA方法检测 25例膀胱癌组织(实验组)和 4例膀胱正常组织(对照组)
中端粒酶活性的表达 ,并与临床病理分期 、病理分级及预后关系进行分析。结果　实验组中端粒酶活性表达率为 96%,对照组无表达 ,实验组端粒酶
活性高于对照组(P<0.001);端粒酶活性临床病理分期 T2高于 T1、T3高于 T2(P<0.01),晚期组高于早期组(P<0.001);端粒酶活性病理分级 G2
高于 G1、G3 高于 G2(P<0.01)。结论　实验组端粒酶活性高表达 ,并与膀胱癌临床病理分期 、病理分级呈正相关 ,端粒酶激活可能在膀胱癌的发生
及发展过程中起重要作用 ,端粒酶可作为膀胱癌早期诊断及判定预后的分子生物学标记。
〔关键词〕　膀胱肿瘤 /酶学;癌;端粒;末端转移酶 /生理学
〔中图分类号〕　R737.14;R730.5　　〔文献标识码〕　A　　〔文章编号〕　1005-9202(2006)05-0654-02
基金项目:吉林省科技厅基金资助项目(吉科合字第 19990319-01号)
1　普通外科
作者简介:许　宁(1962-),男 ,副教授 ,副主任医师 ,医学博士 , 硕士导
师 ,主要从事泌尿系肿瘤的临床与实验研究。
Researchontherelationshipbetweentelomeraseactivityandtheclinicalypathologicalcharacteristicinbladdercancer
XUNing, SHIAi-Ping, WANGChun-Xi, etal.
DepartmentofUrology, theFirstHospital, JilinUniversity, Changchun130021, Jilin, China
【Abstract】　Objective　Todiscusstherelationshipoftelomeraseactivityandtheclinicalcharacteristicintransitionalcelscarcinoma
(TCC)ofbladder.Methods　Telomeraseactivitywasdetectedbytelomericrepeatamplificationprotocol(TRAP)-AgstainandELISAin25
casesofTCC(asexperimentgroup)and4casesofnormalbladdertissues(ascontrolgroup).Therelationshipoftelomeraseactivityandthe
clinicalstage, pathologicgradesandprognosiswereassayedinTCC.Results　Thepositiverateoftelomeraseactivitywas96% and0inex-
perimentgroupandcontrolgrouprespectively.Thetelomeraseactivityinexperimentgroupwashigherthanthatincontrolgroup
(P<0.001).TelomeraseactivityinT2 washigherthanthatinT1 whilethatinT3 washigherthanthatinT2(P<0.01)andthatofthelatestagewashigherthanthatoftheearly(P<0.001).TelomeraseactivityinG2 washigherthanthatofG1 whilethatinG3 washigherthanthatinG2(P<0.01).Conclusions　TelomeraseactivityoverexpressionsinTCCcouldbepositivelyrelatedtotheclinicalstageandpathologicgrades.TelomeraseactivationcouldplayanimportantroleinthetumorgenesisandprogressinTCC, whichcouldserveasmolecularbiology
markerofearlydiagnosisandprognosisjudgment.
【Keywords】　Bladderneoplasm/enzymology;Carcinoma;Telomere;Telomerase/physiology
　　近年的研究表明 , 端粒酶活性在大部分肿瘤组织中表达 ,
而在正常体细胞中不表达 〔1〕。端粒酶激活是细胞永生及恶性
转化的重要标志 〔2, 3〕。但端粒酶活性表达与泌尿系肿瘤临床生
物学行为的关系及预后的意义 , 目前尚未完全明确;半定量检
测膀胱移行细胞癌(transitionalcelscarcinoma, TCC)组织端粒
酶活性表达 , 并与其临床病理特征关系的研究 , 目前国内尚未
见报道。本研究采用端粒重复序列扩增-银染(TRAP-AgNO
3
)
及 TRAP-ELISA方法 ,检测膀胱癌组织及正常膀胱组织的端粒
酶活性 , 并与临床病理分期 、病理分级及预后的关系进行了分
析。
1　材料与方法
1.1　标本收集　来自 2000年 9月 ～ 2001年 9月在吉林大学
第一医院泌尿外科手术切除的膀胱 TCC新鲜冰冻标本 25例 ,
作为实验组。其中男 19例 ,女 6例 , 44 ～ 74(平均 60.76)岁 ,
随访结果有 2例死亡。其中 1例为 T2G2期肿瘤患者 , 术后 13
月死于心脏病 , 另 1例为 T4G3患者 ,术后 10月死于肿瘤转移。
4例正常膀胱组织作为对照组。上述标本均经病理证实 ,
-80℃储存。按国际标准 TNM分期法 , 临床病理分期(PT-
NM):T1期 9例 , T2期 8例 , T3期 5例 , T4期 3例。病理分级:G1
·654· 中国老年学杂志 2006年 5月第 26卷