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三叶青冻干粉抗炎作用的实验研究



全 文 :2013 年 10月第 51卷第 30期
CHINA MODERN DOCTOR 中国现代医生
·调查与实验研究·
三叶青 (radix tetrastigmae)为葡萄科植物三叶爬藤
(Tetrastigmahemsleyanum Dielset Gilg)的干燥块根,是浙江
地道药材之一 [1],以块根或全草入药 [8],具有清热解毒、祛风
化痰、活血止痛的功能 [2]。 近来关于三叶青的研究较多,但
多集中在抗肿瘤方面 [3~5,9],对于三叶青抗炎方面研究较少,
而且多采用的是三叶青提取物,在提取过程中,大多需要
加热等过程,造成成分损失[2],因而不能很好显示其真正效
果。 基于此,本文在 2012 年 5~10 月采用最大限度保留其
有效成分的三叶青冻干粉来进行研究,以期较为全面地观
察三叶青的抗炎作用,为以后进一步研究提供基础。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 受试物与试剂 三叶青冻干粉白色粉未,由杭州天惠
医药科技有限公司提供;二甲苯(批号:20120204),成都市
科龙化工试剂厂;伊文思蓝(批号:20070948),瑞士 Fluka
公司进口分装;角叉菜胶,Sigma 公司进口分装,25 g/瓶。
1.1.2 实验动物 ICR 小鼠,SPF 级,体重 18~22 g,雌性 50
只,合格证号:2008001619934;雄性 50 只,合格证号:2008
001620192。 大鼠,体重 170~200 g,雌性 50 只,合格证号:
2008001624785。 以上均由上海斯莱克实验动物有限公司
提供,饲养在屏障环境中,自由进食饮水,试验前适应 5 d。
1.2 试验方法
1.2.1 三叶青冻干粉对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抑制
作用 取雌性 ICR 小鼠 50 只,随机分为 5 组,即水对照组
(30 mL/kg)、吲哚美辛对照组(15 mg/kg)、三叶青冻干粉高
剂量组(7.16 g/kg,相当于新鲜药材 46.44 g/kg)、三叶青冻
干粉中剂量组(3.58 g/kg,相当于新鲜药材 23.22 g/kg)、三
叶青冻干粉低剂量组(1.79 g/kg,相当于新鲜药材 11.61 g/kg)。
各组动物连续给相应受试物 3 d,末次给药后 30 min,小鼠
右耳廓内外用二甲苯均匀涂抹,用量 0.1 mL,以引起炎症
反应,左耳不加处理作为自身对照。 致炎后 1 h 将小鼠脱
颈椎处死,用打孔器(直径 9 mm),将左右耳片分别敲下后
称重,每只动物右、左耳片重量差即反映炎症肿胀程度。
1.2.2 三叶青冻干粉对小鼠毛细血管通透性的影响 取雄
性 ICR 小鼠 50 只,随机分为 5 组,分组情况同上。 各组动
物连续给相应受试物 3 d,末次给药后 30 min,小鼠尾静
脉注射 0.5%依文思蓝 0.1 mL/kg, 并立即注射 0.6%醋酸
0.2 mL/只,30 min后将小鼠脱颈椎处死,剪开腹腔,用 5 mL
生理盐水冲洗腹腔 2 次,合并冲洗液,以 3 000 rpm 离心
10 min,取上清液于 721 型分光光度计 590 nm 处比色,测
定其 OD 值。
三叶青冻干粉抗炎作用的实验研究
任泽明 戴关海 童晔玲 陈 宇 杨 锋▲
浙江省中医药研究院,浙江杭州 310007
[摘要] 目的 探讨三叶青冻干粉的抗炎作用。 方法 设三叶青冻干粉三个剂量组,另设阳性对照和溶剂对照组,
采用经口给药方式,给药后观察三叶青冻干粉对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抑制作用、对小鼠毛细血管通透性的
影响以及对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的抑制作用。 结果 三叶青冻干粉在 7.16 g/kg 和 3.58 g/kg 剂量下能有效
抑制二甲苯致小鼠耳肿胀作用;7.16 g/kg 对醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管的通透性有抑制作用;在 5.0 g/kg 和
2.5 g/kg 剂量下能显著抑制由角叉菜胶所致的大鼠足跖肿胀。 结论 三叶青冻干粉有显著的抗炎活性。
[关键词] 三叶青;冻干粉;抗炎作用
[中图分类号] R285 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2013)30-0013-02
The anti-inflammatory effect of radix tetrastigmae lyophilized powder
REN Zeming DAI Guanhai TONG Yeling CHEN Yu YANG Feng
Zhejiang Traditional Chinese Medicine Academy, Hangzhou 310007, China
[Abstract] Objective To observe the anti-inflammatory effect of radix tetrastigmae lyophilized powder. Methods The
experimental animals were randomly divided into five groups, including three treatment groups, positive control and
solvent control. anti-inflammatory effect was assessed by several tests including HAc induced peritoneal capillary per -
meability in mice, xylene-induced ear edema in mice and carrageenin induced paw edema in rats. Results The radix
tetrastigmae lyophilized powder significantly inhibited the phlogistic infiltration in mice at 7.16 g/kg and 3.58 g/kg,
and also decreased the ear edema in mice at 7.16 g/kg (P<0.05) compared with solvent control. It can be found the
same effect on the paw edema in rats at 5.0 g/kg and 2.5 g/kg (P<0.05). Conclusion The lyophilized powder of radix
tetrastigmae has significant anti-inflammatory activity.
[Key words] Radix tetrastigmae; Lyophilized powder;Anti-inflammatory effect
[基金项目] 浙江省科技厅项目(2011C23038)
▲通讯作者
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·调查与实验研究· 2013 年 10月第 51卷第 30期
中国现代医生 CHINA MODERN DOCTOR
1.2.3 三叶青冻干粉对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的抑制作
用 取雌性 SD 大鼠 50 只,体重 170~200 g,随机分为 5 组,
即水对照组(30 mL/kg)、强的松组(5.4 mg/kg)、三叶青冻干
粉高剂量组(5.0 g/kg,相当于新鲜药材 32.4 g/kg)、三叶青
冻干粉中剂量组(2.5 g/kg,相当于新鲜药材 16.2 g/kg)、三
叶青冻干粉低剂量组(1.25 g/kg,相当于新鲜药材 8.1 g/kg)。
各组大鼠连续给相应受试物 5 d, 于注射前先测定大鼠右
后足跖的厚度,末次给药后 1 h,给各组大鼠右后足跖皮下
注射 1%角叉菜胶 0.1 mL 以致炎,分别测量致炎后 1、2、4、
6、24 h 右后足跖的厚度(mm),以大鼠致炎后足跖厚度与
致炎前足跖厚度差表示炎性肿胀程度。
1.2.4 数据分析 本实验数据用(x±s)表示,多组间均数比
较采用方差分析,当总体方差有统计学意义(P<0.05)时,
再进行组间比较,所有数据均由 SPSS 16.0 统计学软件进
行处理,P<0.05 为差异有显著性。
2 结果
2.1 三叶青冻干粉对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抑制作用
三叶青冻干粉在中高剂量对二甲苯所致小鼠耳廓肿
胀有明显的抑制作用,与溶剂对照组相比,差异具有统计
学意义(P<0.05)。 其中高剂量的情况下,其抑制作用与阳
性对照较为接近,见表 1 。
2.2 三叶青冻干粉对小鼠毛细血管通透性的影响
三叶青冻干粉对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性
在中高剂量下出现较好的效果,与溶剂对照相比,有统计
学意义(P<0.05)。 其中,高剂量的抑制效果与阳性药物吲
哚美辛相当,见表 1。
表 1 三叶青冻干粉对二甲苯致小鼠耳廓肿胀及醋酸致毛细血管通
透性的影响(x±s)
注: 与水对照组相比具有统计学意义(*P < 0.05);与吲哚美辛组相
比具有统计学意义(#P < 0.05)
2.3 三叶青冻干粉对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的抑制作用
三叶青冻干粉在中高剂量组对由角叉菜胶致炎后 1 h、
4 h、6 h 大鼠足跖肿胀均有明显的抑制作用, 与溶剂对照
组比较差异有显著性(P<0.05)。 在其他时点,与对照组差
异不显著,见表 2。
3 讨论
三叶青是较新的中药材,历代本草未见 [1],主要分布于
长江以南各地 [6]。 江月仙等发现三叶青大鼠经口半数致死
剂量(LD50)雌雄两性别均大于 100 g/kgBW,按急性毒性分
级标准,属于无毒级[11]。 近来研究发现,三叶青有抗肿瘤[3-5]、
抗病毒 [7]等多种功效。 炎症是十分常见而又重要的病理过
程,是机体对于刺激的一种防御反应,表现为红肿热痛和
功能障碍,很多疾病过程都伴随炎症发生,临床上多采用
消炎镇痛治疗。 近来也有研究表明,三叶青提取物有抗炎
镇痛效果[2]。
有文献指出,由于高温会对有效成分造成破坏或者流
失 [1],三叶青在烘焙干燥和分离提取过程中采用低温真空
冷冻干燥技术,能够较好保存原药的药效成分。 本研究采
用三叶青冻干粉,重点观察了其抗炎方面的作用。 研究发
现,三叶青冻干粉在高剂量组和三叶青冻干粉中剂量组对
二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀有明显的抑制作用,作用强度
与阳性药物吲哚美辛相当,与以往类似研究结论相同[2]。 在
上述同样剂量下,三叶青冻干粉能够抑制醋酸所致小鼠腹
腔毛细血管通透性的升高。 同时,我们发现,三叶青在高
剂量组和中剂量组能明显抑制由角叉菜胶致炎后 1 h、4 h、
6 h 大鼠足跖肿胀程度,但对致炎后 2 h 和 24 h,作用不明
显。 炎症的发生发展是一个过程,致炎和抗炎是个平衡过
程,而致炎 2 h,炎症较为突出,超过了三叶青冻干粉的抗
炎作用,当致炎 24 h,炎症在机体免疫调节下,已经慢慢消
退,所以和对照组相比,无显著性差异。
研究表明,三叶青冻干粉有较好的抗炎活性,其抗炎
效果与临床上抗炎药吲哚美辛在药用剂量下相当。 其具体
抗炎发生的环节和相关机制还需要进一步探讨。
[参考文献]
[1] 王志俊 . 人工种植与野生三叶青冻干粉增强免疫功能的比较 [J].
浙江中医杂志,2012,47(12):922-923.
水对照(30 mL/kg)
吲哚美辛(15 mg/kg)
冻干粉(7.16 g/kg)
冻干粉(3.58 g/kg)
冻干粉(1.79 g/kg)
F 值
P 值
10
10
10
10
10
8.97±2.39
5.82±1.51
5.93±2.65*
6.10±2.62*
8.08±1.66#
4.269
0.005
0.432±0.148
0.280±0.067
0.288±0.076*
0.355±0.149
0.365±0.072
3.239
0.020
组别 n 两耳片差值(mg) 吸光度值
水对照(30 mL/kg)
强的松组(5.4 mg/kg)
冻干粉(5 g/kg)
冻干粉(2.5 g/kg)
冻干粉(1.25 g/kg)
F 值
P 值
10
10
10
10
10
3.25±0.15
3.20±0.07
3.17±0.21
3.21±0.08
3.18±0.12
0.508
0.730
5.39±0.27
4.82±0.20*
4.87±0.24*
4.99±0.34*
5.24±0.23#
8.866
0.000
5.80±0.29
5.51±0.25
5.72±0.26
5.78±0.37
5.88±0.24
2.346
0.069
5.96±0.21
5.53±0.31*
5.66±0.30*
5.67±0.26*
5.86±0.33#
3.249
0.020
5.23±0.31
4.85±0.20*
4.63±0.29*
4.68±0.34*
5.13±0.25
8.967
0.000
4.14±0.34
3.87±0.33
3.91±0.23
4.06±0.25
4.12±0.33
1.644
0.180
151.769
149.862
106.197
167.233
145.339
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
组别与剂量 n 基础值(mm) F 值 P 值
致炎后不同时间段足跖厚度(mm)
1 h 2 h 4 h 6 h 24 h
注:表示与水对照组相比具有统计学意义(*P < 0.05);表示与吲强的松组相比具有统计学意义(#P < 0.05);P 值为组内不同时间点比较
表 2 三叶青冻干粉对角叉菜胶致大鼠足跖厚度的影响(x±s)
(下转第 17 页)
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2013 年 10月第 51卷第 30期
CHINA MODERN DOCTOR 中国现代医生
·调查与实验研究·
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(收稿日期:2013-07-10)
能低下,发生压疮后治疗难度大,恢复时间长,严重影响老
年手术患者术后康复和生活质量,手术室压疮的预防水平
亟待提高。 压疮发生的主要原因为局部组织受压,而手术
时需要较长时间的保持同一体位,在患者皮肤菲薄、皮下
组织较少的受力部位极易发生急性压疮,好发于骨隆突处[8]。
因此压力、体位均是主要的相关物理因素,压疮组体重指
数显著高于对照组,超重或肥胖的患者受压部位承受的压
力更大,局部压强高,组织压迫缺血缺氧损害发生风险较
高。 不同的手术方式采用的体位相异,压疮组仰卧位和俯
卧位较少,而侧卧位、截石位较多,仰卧位是多数手术采用
的体位,患者主要受力部位在臀部和背部,面积大,皮下组
织丰厚,俯卧位采用较少,主要是脊柱手术,受力部位面积
也较大;侧卧位也是较为常见的手术体位,由于人体侧面
组织面积较少,肩部、髋部、膝部等主要受力点,存在肩峰、
髂骨嵴、股骨远端等骨隆突,皮肤下组织相对菲薄,局部循
环受压力影响显著,截石位主要是肛肠、妇科等手术采用,
骶部和小腿受压部位较多发生压力性损伤 [4]。 多因素分析
显示,体重指数是术中压疮的独立危险因素,较重的患者
发生压疮的风险高,采用针对性的体位护理防护是压疮预
防的重要措施。
压疮的发生还与患者自身身体状态有关, 合并高血
糖、营养不良等组织对外界刺激的应对能力减弱,本研究
结果显示,压疮组空腹血糖、血清总蛋白显著低于对照组,
但并不是独立的危险因素。 Braden 评分综合评价患者皮肤
感觉、潮湿、活动力、移动力、营养状况、摩擦力和剪切力等
压疮发生的高危因素, 压疮组 Braden 评分显著低于对照
组,表明患者术前存在更多的压疮高危因素,在相同情况
下发生压疮的风险更高。 术前采用 Braden 评分量表进行
评价将有助于制定防范压疮的措施,积极预防减少压疮的
发生。 手术因素也是重要的压疮风险,手术时间长是最突
出的风险之一, 更长时间手术则组织受压的时间更长,压
力积累造成损害的几率更高,压疮组手术时间显著长于对
照组,并且是独立危险因素之一。 术中生命体征的改变可
能对组织的灌注产生影响,低血压和低氧饱和度都可能导
致患者组织器官的灌注不足,加剧缺血缺氧损害[5]。 本研究
结果认为,两者是影响压疮发生的相关性因素。 术中失血
则直接的影响循环血量和组织灌注,在应激状态下外周组
织灌注减少以保证重要器官需求, 失血则加剧这现象,使
皮肤血管灌注不足,皮肤组织失养[9]。 压疮组每小时出血量
显著高于对照组,术中出血量是压疮发生的独立危险因素
之一。
护理人员对压疮的认知程度是压疮预防的重要基础。
本次调查结果显示,总体认知现状不佳,其中以术中压疮
风险评估的认知程度最差, 而风险评估是预防的基本措
施,与护理人员的年资和职称有关,年资和职称越高风险
评估认知程度越好,但低年资护士则亟需加强培训。 压疮
诊断仅与学历有关,护理人员基础知识认知程度决定了对
压疮诊断认知; 不同年资和学历对危险因素认知差异显
著,说明危险因素认知与临床经验和基础知识认知程度有
关;而年资和职称与术中压疮风险评估、术中压疮防范、术
中压疮观察和处置认知程度有关,说明临床经验积累是压
疮预防实践的决定因素。 针对影响护理人员压疮认知不同
因素,制定针对性培训,将有助提高压疮预防效果,改善患
者预后。
[参考文献]
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(收稿日期:2013-07-08)
(上接第 14页)
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