全 文 ：现代生物医学进展 www.shengwuyixue.com Progress in Modern Biomedicine Vol.10 NO.14 JUL.2010
HPLC法对比不同产地南板蓝根药材靛蓝、靛玉红含量的研究
罗丹冬 1 丘振文
(广州中医药大学第一附属医院 广东广州 510405)
摘要 目的:以高效液相色谱法对广东不同产地（广东高要、广东罗定、广东罗浮、广东鼎湖）南板蓝根药材及常用伪品（爵床科植物
广西马蓝）的主要成分靛蓝、靛玉红进行含量测定，对比不同产地南板蓝根药材靛蓝、靛玉红含量的差别。方法:采用 HPLC法建立
南板蓝根药材中靛蓝与靛玉红的含量测定方法。色谱条件：Kromasil C18(4.6mm×250mm，5μm)；以甲醇—水（75：25）为流动相；
检测波长：290nm；流速：1.0ml/min。柱温：40℃。结果:①靛玉红、靛蓝线性范围分别为 1.652～33.04μg/ml、1.284～25.68μg/ml。回
收率分别为 98.92%，RSD=1.52%，N=5 (靛玉红)；102.61%，RSD=1.28%，N=5(靛蓝)；②广西马蓝中未检测出靛玉红、靛蓝。结论:该
方法操作简便、准确快速、重现性好，可完善现行的南板蓝根的药材质量标准，有效控制南板蓝根药材的质量。
关键词:南板蓝根；靛蓝；靛玉红；HPLC
中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1673-6273（2010）14-2720-03
Determination of Indigo Blue and Indirubin Content in South
Baphicacanthus from Different Places by HPLC
LUO Dan-dong,QIU Zhen-wen
(The First Clinical Medical College of Guangzhou University of TCM; Guangzhou 510405; China)
Abstract Objective:To establish the quality standard for Rhizoma et Radix Baphicacanthis Cusae, especially to develop a method
for determination the content of Indigo blue and Indirubin in Rhizoma et Radix Baphicacanthis Cusae by HPLC. Methods:Adopt the
HPLC to assaying the content of indigo blue and Indirubin in Rhizoma et Radix Baphicacanthis Cusae. Chromatographic condition:
Kromasil C18(4.6mm×250mm，5μm), mobile phase: Methanol-Water(75:25), detect wavelength:290nm; flow rate:1.0ml/min, column
temperature: 40℃ .Result: ①The linear range of Indirubin was 1.652～33.04μg/ml, The linear range of Indigo blue was 1.284～
25.68μg/ml. Recovery rate were 102.61%, RSD was 1.28%(Indirubin); 98.92%, RSD was 1.52%( Indigo blue). Conclusion:The method
to idenfifty Rhizoma et Radix Baphicacanthis Cusae by TLC were established．The method for determination of indigo blue and
Indirubin in Danggui by HPLC Was established．The method is simple，accurate，rapid，reliable，and reproducible And can be used to
control the quality of Rhizoma et Radix Baphicacanthis Cusae effectively
Key word: Baphicacanthus Root; Indigo blue; Indirubin; HPLC；TLC
Chinese Library Classification: R284.2 Document code: A
Article ID: 1673-6273(2010)14-2720-03
作者简介：罗丹冬（1975.1-），女，主管中药师，主要从事中药药理及药学研究
（收稿日期：2010-02-25 接受日期：2010-03-31）
前言
南板蓝根为南板蓝根是爵床科植物马蓝 Baphicacanthus
cusia (Nees) Bremek.的干燥根茎及根，是《中国药典》2005年版
收载的品种[1]。该药材为华南地区常用药材:具有清热解毒、凉
血的功效；用于温病发斑、丹毒、流感、流脑等。现代药理研究表
明南板蓝根具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗炎等药理作用，其中
靛玉红、靛蓝为其中主要的化学成分[2]。目前在商品流通渠道中
南板蓝根以伪劣品居多，市场上基本很少见正品南板蓝根。根
据 2002年广州市药检所的抽检工作情况汇报统计，药监部门
抽检的十三批南板蓝根，不合格率为 100％，其性状、显微特
征、化学反应和薄层色谱均不符合规定，经鉴定应是来源于同
科植物球花马蓝、疏花马蓝、少花马蓝和广西马蓝等[3]。《中国药
典》2005版现有的南板蓝根的质量标准中主要以薄层鉴别为
主，不利于南板蓝根药材质量的控制，为此，我们考察了南板蓝
根药材中的主要有效成分靛蓝、靛玉红的含量测定方法，为提
高南板蓝根药材的质量标准提供快速、准确的含量测定方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Summit P680A型高效液相色谱仪，Summit P680A型低压
四元泵，PDA- 100 ASI100自动进样器，Summit柱温箱以及“变
色龙”色谱工作站；Sartorius德国赛多利斯十万分之一电子天
平；KQ5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1.2 药品与试剂
实验用含量测定标准品：靛蓝，批号：171241－200404；靛
玉红，批号：171237－200103；(中国药品生物制品检定所，含量
测定用 )。药材共 5 批：南板蓝根为爵床科植物马蓝
Baphicacanthus cusia (Nees) Bremek.的干燥根茎及根；样品（样品
1~5）分别来源于广东高要、广东河源、广东鼎湖、广东罗定，伪
2720· ·
DOI:10.13241/j.cnki.pmb.2010.14.014
现代生物医学进展 www.shengwuyixue.com Progress in Modern Biomedicine Vol.10 NO.14 JUL.2010
品为爵床科植物广西马蓝 Strobilanthes guangxiensis S.Z.Huang.
的干燥根茎及根。
高效液相用色谱纯试剂：甲醇（Merck公司）为色谱纯。氯
仿等均为分析纯（来源于广州化学试剂厂）。
2 各样品的靛蓝、靛玉红 HPLC含量测定
2.1 色谱条件
色谱柱：Kromasil C18(4.6mm×250mm，5μm)；以甲醇—水
（75：25）为流动相；检测波长：290nm；流速：1.0ml/min。柱温：
40℃。在此条件下靛蓝、靛玉红与其他组分能达到较好分离（结
果见色谱图 1、2）。
2.2 标准曲线的制备
精密称取经五氧化二磷为干燥剂减压干燥 24h 的靛蓝
（6.42mg）、靛玉红（8.26mg）对照品置 100mL量瓶中，加氯仿溶
解并稀释至刻度，摇匀，制得混合溶液；精密量取以上混合溶液
1ml，2ml，4ml，10ml，20ml置 50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，
即得浓度分别为靛玉红：1.652，3.304，6.608，16.52，33.04
μg/ml；靛蓝：1.284，2.568，5.136，12.84，25.68μg/ml的对照品
溶液。按 3.1色谱条件，分别 20μl进样，以峰面积为纵坐标(Y)，
进样量为横坐标 (X)，得靛玉红回归方程为：Y1=－
568.241X1+3467.396，γ=0.9996；靛蓝的回归方程：Y2=－
473.398X2+4467.617，γ=0.9993。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取以上 5批样品粉末（过三号筛）各约 2g，分别置索
氏提取器中，加三氯甲烷 20ml，加热提取 1小时，提取液滤过，
浓缩，蒸干，以甲醇溶解，过 0.45μm微孔滤膜，取续滤液，即得
供试品溶液。
2.4 精密度试验
取对靛蓝、靛玉红照品溶液重复进样 6次，每次 20μl。测
得靛蓝、靛玉红的峰面积 RSD分别为 0.82%，0.77％，表明仪器
的精密度良好。
2.5 稳定性试验
取 1号样品粉末，按 2.3项下操作制备供试品溶液，再按
2.1色谱条件下，精密吸取供试品溶液 20μL，重复进样 6次，
每次间隔 2 小时，测得靛蓝、靛玉红的峰面积 RSD分别为
1.02%，0.96％。结果表明供试品溶液在 12小时内稳定。
2.6 重复性试验
取 1号样品粉末，按 2.3项下操作制备供试品溶液，再按
2.1色谱条件下，进行测定，测得峰面积并计算含量，结果测得
靛蓝、靛玉红的峰面积 RSD分别为 1.44%，1.26％，表明检测结
果的重复性良好。
2.7 加样回收率试验
取 1号样品约 0.1g，精密加入 0.15mg靛玉红和靛蓝对照
品，按 2.2项下制备样品供试液 5份，按 2.1色谱条件进行测
定、计算回收率。结果平均回收率为 98.92％，RSD=1.52％，n=5
图 1靛蓝对照品 HPLC色谱图
Picture 1 The chromatogram of indigo blue
图 2 靛玉红对照品 HPLC图
Picture 2 The chromatogram of indirubin
图 3 南板蓝根 HPLC图谱（A靛玉红，B靛蓝）
Picture 3 The chromatogram of Rhizoma et Radix Baphicacanthis Cusiae
图 4 广西马蓝 HPLC图谱
Picture 4 The chromatogram of Strobilanthes guangxiensis S.Z.Huang.
2721· ·
现代生物医学进展 www.shengwuyixue.com Progress in Modern Biomedicine Vol.10 NO.14 JUL.2010
(靛玉红)；102.61％，RSD：1.28%，n=5(靛蓝)。
2.8 含量测定结果
3 讨论
3.1 关于指标的选择
由于南板蓝根具有良好的抗病毒及抗菌活性，在 2003年
非典期间，南板蓝根货源紧缺，价格不断上涨，因此，不法商人
以伪品当正品销售。经有关部门调查，南板蓝根的伪品主要有
以 下 几 种 来 源 ： 爵 床 科 植 物 球 花 马 蓝 Strobilanthes
Pentstemonoides (Nees)T．Ander、疏花马蓝 Strobiltnhes divari
catus(Nees)．Anders．少花马蓝 Strobilanthes oliganthus Miq.、广
西马蓝 Strobilanthes guangxiensis S.Z.Huang的干燥根及根茎[4，5]。
以上伪品虽然外观性状与南板蓝根相似，但不含其主要成份靛
蓝和靛玉红。因此，不能代用和混用。
3.2 关于 HPLC色谱条件的选择
据文献报道，HPLC法测定靛玉红、靛蓝的流动相主要有：
甲醇－水－冰醋酸系统[6]、甲醇－水系统[7]、甲醇－氯仿－二乙
胺系统[8]、甲醇－水－磷酸系统[9]、甲醇－0.1％醋酸铵－醋酸系
统[10]等，经试验比较发现甲醇－水（75：25）系统可达到使靛蓝、
靛玉红与其他成分分离的目的，这样可避免了酸碱物质对色谱
柱的损伤，延长其使用寿命。考察流速及柱温，发现以
1.0ml/min 的流速，40℃的柱温时可使得出峰的时间适中；从
DAD检测器记录信号中提取靛玉红、靛蓝 200～400 nm的光
谱图，最大吸收为 290nm，用 DAD检测器记录 250、290、350 nm
的色谱信号，通过比较，290nm下的色谱峰峰形对称性更好，峰
尖锐，故选择 290nm作为检测波长。
4 结论
本文建立了南板蓝根药材中靛玉红、靛蓝的 HPLC法含量
测定方法，并对来自 4个不同产地南板蓝根药材及南板蓝根的
混用伪品广西马蓝进行了鉴别和相关成分的含量检测。该方法
专属、操作简便，结果可靠、重现性好，可完善现行南板蓝根的
质量标准，有效控制南板蓝根药材及其制剂的质量。
参考文献(Reference)
[1] Chinese pharmacopeia committee. Chinese Pharmacopoeia 2005
(subdivision) [S].Beijing: CHENMICAL INDUSTRY PRESS,
2005，170.
[2] Xian Yuan, Zhong Ming. The research progression of Rhizoma et
Radix Baphicacanthis Cusiae in chemical constituent and
pharmacologic actions [J].Henan tradictional Chinese medicine,
2006，26（8）：78-80
[3] Liang Shaozhen，Liang Qian. Analysis and Proposition on Quality
Improvement of Baphicacanthus cusia [J]. Research and practice on
Chinese medicine,2006,20（2）：30-31.
[4] Xiao Peigen. Morden Chinese matiaria medica (the first roll) [M].
BEIJING: CHENMICAL INDUSTRY PRESS, 2002，674.
[5] GUANGXI institute for drug and food control. IDENTITY spectrum of
Chinese crude drug [M]. Guangxi science and technology publishing
company, 1992:50.
[6] Li Li, Cao He.Reversed phase high-performance liquid
chromatography to assay the contents of indigo blue and indirubin in
xilei san [J].Lishizhen Medicine and Materia Medica Research，2006,
7（5）：725-726.
[7] Hou Huichan, Liang Shaozhen. Determination of Indirubin and Indigo
in Baphicacanthus cusia （Nees）Bremek by HPLC [J]. Jorunal of
Chinese Medicinal Materials, 2006, 29（7）：681-682.
[8] Xu Deran, Liu Xuehua. Determination of Indirubin in Radix Isatidis by
HPLC [J].CHINESE WILD PLANT RESOURCES, 2004, 23（2）：
53-55.
[9] WANG Yan-huan, LIU Guo-rui ,XU Fang, et al.Determination of
Indigo and Indirubin in Banlangen Jingao by RP-HPLC[J]. Journal of
Hebei University (Natural Science Edition),2005, 25（5）：507-509.
[10] LUO Wei - wei ,HE Ying - ju,WANGLing,et al.Determination of
indigo and indirubin contents in the extract of Radix isatidis by HPLC
[J]. West China Journal of Pharmaceutical Sciences, 2004, 19 (6)：
455-456.
南板蓝根及其伪品含量测定结果（%，N=5）
The Assaying results of Rhizoma et Radix Baphicacanthis Cusiae and
counterfeit drug
样品号
Sample number
靛玉红（%）
Indirubin
靛蓝（%）
Indigo blue
总量（%）
Total amount
1
2
3
4
5
0.0042
0.0024
0.0016
0.0038
—
0.1123
0.0767
0.0961
0.1539
—
0.1165
0.0791
0.0977
0.1577
—
2722· ·