全 文 ：【实验研究】
不同工艺三叶青制剂对人肺癌Ａ５４９裸鼠移植瘤生长抑制作用比较研究＊
严余明１　王忆黎２＃　童晔玲２　戴关海２　任泽明２　杨　锋２
１　浙江中医药大学　浙江 杭州 ３１００５３
２　浙江省中医药研究院　浙江 杭州 ３１０００７
摘要　目的：观察不同工艺加工的三叶青制剂抗人肺癌Ａ５４９裸鼠移植瘤的作用。方法：将相同生药剂
量的三叶青冻干粉、水煎剂和饮片粉灌胃人肺癌Ａ５４９移植瘤裸鼠，测定其肿瘤生长动态体积和抑瘤率。
结果：三种不同工艺制备的三叶青对人肺癌Ａ５４９裸鼠移植瘤均有一定的抑制作用，抑瘤率在１０．５％～
２８．０％之间，其中三叶青冻干粉和饮片粉高、中剂量均可明显抑制人肺癌Ａ５４９裸鼠移植瘤的生长 （Ｐ＜
０．０５），但肿瘤体积的动态测定表明三叶青冻干粉发挥抑瘤作用的时间要早于饮片粉。水煎剂的抑瘤作
用不显著 （Ｐ＞０．０５）。结论：三叶青冻干粉和饮片粉抗人肺癌Ａ５４９裸鼠移植瘤的作用强于水煎剂，而
冻干粉发挥抑瘤效果的时间要早于饮片粉。
关键词　三叶青　冻干粉　水煎剂　饮片粉　抗瘤作用　比较研究
　＊　基金项目：浙江省科学技术厅公益性技术应用研究计划
项目浙江地产药材三叶青冻干粉与传统饮片的药效学比较研究，
编号：２０１１Ｃ２３０３８
　＃　通讯作者：王忆黎，Ｅ－ｍａｉｌ：３１７２４０１０３＠ｑｑ．ｃｏｍ
　　三叶青又名金线吊葫芦，其基原为葡萄科植物三
叶爬藤Ｔｅｔｒａｓｔｉｇｍａ　ｈｅｍｓｌｅｙａｎｕｍ　Ｄｉｅｌｓ　ｅｔ　Ｇｉｌｇ的干燥
块根，主要含黄酮类如槲皮素及三萜类化合物蒲公英
萜醇等化学成份，临床上具有清热解毒、祛风化痰、
活血止痛的功能，用于治疗高热惊厥、肺炎、哮喘、
肝炎、风湿、月经不调等。传统三叶青服用方法为水
煎或研粉吞服，近年报导了三叶青冰干粉的新工艺，
为明确不同工艺对三叶青疗效的影响，本研究对传统
的水煎工艺、饮片打粉工艺与冻干粉新工艺进行了抗
人肺癌Ａ５４９裸鼠移植瘤作用的药效比较研究，现将结
果报导如下。
１　实验目的
观察三种工艺 （冻干粉、水煎剂、饮片粉）三叶青
口服给药对人肺腺癌细胞株Ａ５４９裸鼠移植瘤的抑制作用。
２　实验材料
２．１　三叶青冻干粉：１ｋｇ粉相当于６．５ｋｇ鲜药材，由
杭州天惠医药科技有限公司提供。
２．２　三叶青饮片粉：１ｋｇ粉相当于４．５ｋｇ鲜药材。将
三叶青饮片 （批号：１２０１１０，杭州华东中药饮片有限
公司提供）打粉，２００目过筛备用。
２．３　三叶青水煎液：取饮片４００ｇ水浸５ｈ （３２００ｍｌ）
后煎煮１ｈ，共２次，合并２次煎液，浓缩至１０００ｍｌ，
使成０．４ｇ生药／ｍｌ浓度，冰箱保存备用。
２．４　 注射用环磷酰胺 （ＣＴＸ）：０．２ｇ／支，批号：
９Ｆ５８６Ｅ，Ｂａｘｔｅｒ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ　ＧｍｂＨ生产。
２．５　动物：ＢＡＬＢ／ｃＡ　ｎｕ／ｎｕ雌性裸小鼠，体重１４～
１６ｇ，１１０只；瘤株：人肺腺癌细胞株 Ａ５４９，由上海
ＳＬＡＣ实验动物中心提供。合格证号：２００７０００５４４２２６。
３　实验方法
３．１　对Ａ５４９裸鼠移植瘤的抑制作用：取生长良好的
Ａ５４９裸鼠２只，脱颈椎处死，７５％乙醇浸泡消毒，纱
布吸干乙醇，剥离皮下肿瘤，用无菌生理盐水配成２
×１０７ 个／ｍｌ细胞悬液。取ＢＡＬＢ／Ｃ裸鼠，均右腋皮
下注射上述 Ａ５４９细胞悬液０．２ｍｌ／只，在肿瘤长到
１００ｍｍ３ 以上，开始分组、称重、给药。分别设水对
照组 （３０ｍｌ／ｋｇ）、ＣＴＸ组 （４０ｍｇ／ｋｇ）、三叶青水煎
液高剂量组 （１０．３２ｇ／ｋｇ，相当于新鲜药材４６．４４ｇ／
ｋｇ）、三叶青水煎液中剂量组 （５．１６ｇ／ｋｇ，相当于新
鲜药材２３．２２ｇ／ｋｇ）、三叶青水煎液低剂量组 （２．５８ｇ／
ｋｇ，相当于新鲜药材１１．６１ｇ／ｋｇ）、三叶青饮片粉高剂
量组 （１０．３２ｇ／ｋｇ，相当于新鲜药材４６．４４ｇ／ｋｇ）、三
叶青饮片粉中剂量组 （５．１６ｇ／ｋｇ，相当于新鲜药材
２３．２２ｇ／ｋｇ）、三叶青粉饮片低剂量组 （２．５８ｇ／ｋｇ，相
当于新鲜药材１１．６１ｇ／ｋｇ）、三叶青冻干粉高剂量组
（７．１６ｇ／ｋｇ，相当于新鲜药材４６．４４ｇ／ｋｇ）、三叶青冻
干粉中剂量组 （３．５８ｇ／ｋｇ，相当于新鲜药材２３．２２ｇ／
ｋｇ）、三叶青冻干粉低剂量组 （１．７９ｇ／ｋｇ，相当于新
鲜药材１１．６１ｇ／ｋｇ）。除ＣＴＸ组在实验第３、６、９日
腹腔注射ＣＴＸ （４０ｍｇ／ｋｇ）外，其余各组连续给药１８
天，每隔３天分别用游标卡尺测量肿瘤最大长径 （ａ）
和横径 （ｂ）。计算肿瘤体积：肿瘤体积 （ｍｍ３）＝１／
·４０６· 浙江中医杂志２０１３年８月第４８卷第８期
２ａｂ２。停药次日，处死动物，剥取实体瘤称瘤重，计
算抑瘤率 （％）。
抑瘤率＝ （对照组平均瘤重－给药组平均瘤
重）／对照组平均瘤重×１００％
３．２　统计方法：各组数据用ｘ±ｓ表示，多组间均数
比较采用方差分析，所有数据均由ＳＰＳＳ１７．０统计软
件进行处理，Ｐ＜０．０５为统计学上差异有显著性。
４　实验结果
４．１　不同工艺三叶青对Ａ５４９裸鼠移植瘤的抑制作用：
见表１～２。
由表１可见，三叶青冻干粉和饮片粉高、中剂量
组瘤重明显下降，与水对照组比较有显著性差异 （Ｐ
＜０．０５）。水煎剂的抑瘤率为１２．３％～１３．５％；饮片
粉的抑瘤率为１０．５％～２０．９％；冻干粉的抑瘤率为
１２．２％～２８．０％。ＣＴＸ组抑瘤率为７０．８％。的冻干
粉高剂量组１１ｄ和１８ｄ的肿瘤生长体积、冻干粉中剂
量组１８ｄ的肿瘤生长体积与水对照组相比差异显著
（Ｐ＜０．０５）。
表１　不同工艺三叶青对Ａ５４９裸鼠移植瘤生长的影响 （ｘ±ＳＤ）
组别及剂量
动物数 （只）
开始 结束
动物体重 （ｇ）
开始 结束
瘤重 （ｇ） 抑瘤率 （％）
水对照 （３０ｍｌ／ｋｇ） １０　 １０　 １５．３±１．０　 １６．８±０．７　 ２．４２５±０．５５８ ／
ＣＴＸ （４０ｍｇ／ｋｇ×３） １０　 １０　 １５．４±０．８　 １６．６±０．７　 ０．７０８±０．２５３＊ ７０．８
水煎剂 （４６．４４ｇ鲜药材／ｋｇ） １０　 １０　 １５．１±０．９　 １６．６±１．１　 ２．０９８±０．４７４　 １３．５
水煎剂 （２３．２２ｇ鲜药材／ｋｇ） １０　 １０　 １５．５±０．８　 １６．６±０．８　 ２．１１６±０．７２０　 １２．７
水煎剂 （１１．６１ｇ鲜药材／ｋｇ） １０　 １０　 １５．１±０．８　 １６．５±１．１　 ２．１２６±０．５６６　 １２．３
饮片粉 （４６．４４ｇ鲜药材／ｋｇ） １０　 １０　 １５．３±０．９　 １６．０±１．９　 １．９１９±０．５７２＊ ２０．９
饮片粉 （２３．２２ｇ鲜药材／ｋｇ） １０　 １０　 １５．１±０．７　 １５．８±１．７　 １．９８０±０．４３０＊ １８．４
饮片粉 （１１．６１ｇ鲜药材／ｋｇ） １０　 １０　 １５．４±０．８　 １５．９±０．８　 ２．１７１±０．４９０　 １０．５
冻干粉 （４６．４４ｇ鲜药材／ｋｇ） １０　 １０　 １５．４±０．９　 １６．７±０．９　 １．７４７±０．４９７＊ ２８．０
冻干粉 （２３．２２ｇ鲜药材／ｋｇ） １０　 １０　 １５．１±０．７　 １６．５±０．８　 １．９３７±０．４１０＊ ２０．１
冻干粉 （１１．６１ｇ鲜药材／ｋｇ） １０　 １０　 １５．１±０．９　 １６．４±１．１　 ２．１２８±０．６０９　 １２．２
　　＊与水对照组比较，Ｐ＜０．０５。
４．２　不同工艺三叶青对 Ａ５４９裸鼠移植瘤动态生长的
影响：见表２。
由表２可见，冻干粉高剂量组１１ｄ和１８ｄ的肿瘤
生长体积、冻干粉中剂量组１８ｄ的肿瘤生长体积与水
对照组相比差异显著 （Ｐ＜０．０５），ＣＴＸ组１１ｄ、１４ｄ、
１８ｄ肿瘤生长体积与水对照组相比差异显著 （Ｐ＜
０．０５）。而水煎剂组、饮片粉组肿瘤体积在各个阶段
与水对照组比较均无明显差异 （Ｐ＞０．０５）。
表２　不同工艺三叶青对Ａ５４９裸鼠移植瘤动态生长的影响 （ｘ±ＳＤ，ｎ＝１０）
组别及剂量
肿瘤生长体积 （ｍｍ３）
ｄ０ ｄ４ ｄ８ ｄ１１ ｄ１４ ｄ１８
水对照 （３０ｍｌ／ｋｇ） １０６．５±４７．２　 ２３７．２±１３８．８　４８３．３±３１６．６　１０５４．７±５１２．５　１６４７．２±６９９．０　２３５９．４±５９７．４
ＣＴＸ （４０ｍｇ／ｋｇ×３） １１２．２±３１．８　 ２０８．７±１３２．５　３３６．９±１９４．４　 ５５８．６±２５３．９＊８８０．４±３１４．４＊１１４２．３±４０７．６＊
水煎剂 （４６．４４ｇ鲜药材／ｋｇ） １０３．８±３５．３　 ２３１．２±６５．０　４６２．１±１３７．１　 ８８５．１±２７９．５　１３６１．７±３７２．５　２０２６．８±３９９．６
水煎剂 （２３．２２ｇ鲜药材／ｋｇ） １０６．３±３８．８　 ２２７．８±７２．９　４８７．０±２４０．８　 ９７３．３±４１４．９　１４８３．２±４５０．８　２１２１．３±５０１．３
水煎剂 （１１．６１ｇ鲜药材／ｋｇ） １０８．３±２８．８　 ２３０．２±４５．１　４７３．９±１４１．１　１０３５．０±３４１．５　１６６９．１±６４３．９　２３１３．５±６９９．１
饮片粉 （４６．４４ｇ鲜药材／ｋｇ） １００．８±１７．３　 ２３５．５±１５１．９　４７０．２±３２３．３　 ９０３．８±３８３．２　１４４９．２±５７６．０　２０１７．４±５６８．３
饮片粉 （２３．２２ｇ鲜药材／ｋｇ） １０２．７±２９．０　 ２２６．１±５８．２　４６２．４±１７３．９　 ８８７．５±２２８．４　１４０２．６±３３８．５　１９８３．２±４３６．２
饮片粉 （１１．６１ｇ鲜药材／ｋｇ） １０９．１±３９．０　 ２３８．２±８７．６　４８７．５±１６４．９　 ９２０．６±３０６．８　１５６９．４±３７３．２　２２２８．９±５２８．９
冻干粉 （４６．４４ｇ鲜药材／ｋｇ） １０８．２±３３．０　 ２２２．８±６９．７　４２５．５±１６６．６　 ７３１．３±２６３．９＊１２０９．３±３７４．２　１６０３．０±３６２．６＊
冻干粉 （２３．２２ｇ鲜药材／ｋｇ） １０１．４±２４．０　 ２３０．０±５８．６　４７０．７±１２８．８　 ８９５．４±２８８．２　１３５５．７±３４１．１　１８６６．７±３５３．１＊
冻干粉 （１１．６１ｇ鲜药材／ｋｇ） １１２．０±３０．４　 ２３８．５±６８．３　４９０．９±２１８．５　 ９２８．８±３８４．４　１５７４．３±８６６．１　２２１５．２±８０５．１
　　注：与水对照组比较，＊Ｐ＜０．０５。
·５０６·浙江中医杂志２０１３年８月第４８卷第８期
５　讨论
实验结果表明，在相同生药剂量的条件下，三种不
同工艺（冻干粉、水煎剂、饮片粉）制备的三叶青对人肺
癌Ａ５４９裸鼠移植瘤均有一定的抑制的抑制作用。抑瘤
率在１０．５％～２８．０％之间，其中三叶青冻干粉和饮片
粉高、中剂量均可明显抑制人肺癌 Ａ５４９裸鼠移植瘤的
生长（Ｐ＜０．０５），但从肿瘤体积的动态测定表明三叶青
冻干粉发挥抑瘤作用的时间要早于饮片粉。而水煎剂
抑瘤作用不显著（Ｐ＞０．０５）。
现代药理实验已证实，三叶青具有良好的抗肿瘤
作用。如倪克锋等［１］通过小鼠肝癌 Ｈ２２细胞右腋窝皮
下接种，观察低、中、高剂量三叶青黄酮对荷瘤小鼠抑
瘤率、脾脏指数、胸腺指数的影响，并通过定量 ＲＴ－
ＰＣＲ检测小鼠皮下移植瘤ｃａｓｐａｓｅ－３、ＣｙｔＣ的表达情
况。结果发现三叶青黄酮具有明显的抗肿瘤作用，但
其作用不呈剂量依赖性。程伟等［２］采用体外细胞培养
技术，用 ＭＴＴ法观察三叶青提取物对肺癌Ａ５４９细胞体
外抑制作用的时效、量效关系；琼脂糖凝胶电泳检测细
胞凋亡；ＲＴ－ＰＣＲ法检测细胞凋亡相关基因Ｂｃｌ－２的表
达。结果显示三叶青提取物以１×１０－３ｇ／Ｌ的浓度与
Ａ５４９细胞共培养４８ｈ，其细胞活性有显著性降低；不同
浓度的三叶青提取物（１×１０－２、１×１０－３、１×１０－４ｇ／Ｌ）和
Ａ５４９细胞共同培养，三叶青提取物对Ａ５４９细胞活性有显
著性抑制作用。汪珍等［３］采用体外细胞培养技术，用
ＭＴＴ法观察三叶青提取物ＲＫＯ细胞的影响，琼脂糖
凝胶电泳检测细胞凋亡，ＲＴ－ＰＣＲ检测Ｂｉｄ、Ｂａｘ、Ｂｃｌ－２
和Ｂｃｌ－ＸＬ的表达改变，结果显示：三叶青提取物能显
著地抑制人结肠癌细胞系ＲＫＯ细胞的生长，并且具有
浓度依赖性，并能下调Ｂｃｌ－ＸＬ、上调Ｂｉｄ来诱导凋亡。
冯正权等［４］通过体外培养ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞，并用
ＭＴＴ法检测三叶青黄酮对肿瘤细胞生长的抑制作用，
流式细胞仪分析细胞周期，光镜和电镜观察细胞形态
改变，酶谱分析基质金属蛋白酶－２（ＭＭＰ－２）蛋白的表
达改变。结果表明：三叶青黄酮能显著地抑制ＳＧＣ－
７９０１人胃癌细胞的生长，并且具有浓度依赖性，且细胞
有明显的凋亡特征性改变，并能降低细胞上清液中
ＭＭＰ－２的含量。这些报导与本文结果相似，说明三叶
青具有一定的抑瘤效果，其作用机制可能与改善荷瘤
小鼠机体的细胞免疫功能有关。本研究发现从肿瘤体
积的动态测定表明，三叶青冻干粉发挥抑瘤作用的时
间要早于饮片粉。而三叶青水煎剂抗人肺癌Ａ５４９裸鼠
移植瘤的作用要差于冻干粉和饮片粉，我们认为这可
能与水煎剂在加工中采用长时间高温煎煮，从而使有
效成分活性降低有关。
逍遥蒌贝散治疗乳癖验案
徐文宏
浙江省淳安县汪宅社区卫生服务站　浙江 淳安 ３１１７００
　　乳癖相当于现代医学中的乳腺囊性增生，为妇科
常见和多发病，近年来，笔者尝试用逍遥蒌贝散加减
治疗，取得了一定疗效。如治王某某，女，３７岁。服
务员。就诊时间２０１１年９月２６日。主诉经前期双乳
胀痛，心情不好时可加重，伴经期延长，饮食，睡眠
尚可，小便黄，便秘。脉缓，苔薄黄。２０１０年９月及
２０１１年９月Ｂ超提示：双侧乳腺增生。中医诊断乳
癖，西医诊断双乳乳腺增生。治则疏肝理气，化痰散
结。方用逍遥蒌贝散加减：当归９ｇ，柴胡、生白芍、
白茯苓、炒白术、全瓜蒌、浙贝母、胆南星、生牡
蛎、山慈姑、制半夏、生甘草各１０ｇ。每日１剂，水
煎分服。服３剂后，患者感到倦怠乏力。二诊于上方
加入焦山楂、生麦芽各１０ｇ。服后精神好转，效不更
方。服５剂后，双乳胀痛明显缓解，月经来潮基本规
律。后改用逍遥蒌贝散剂，每次３ｇ，每日３次。连服
３个月后Ｂ超提示：双侧乳腺未见异常。嘱患者保持
心态平和，适量运动，低脂饮食，定期检查。
按：中医认为，乳癖病多有结块存在，其结块的
形成每与肝郁、痰凝有关。本案患者用当归、白芍养
血柔肝，肝得条达，气顺结散；白术、茯苓健脾祛
湿，运化旺则杜绝生痰之源；瓜蒌、浙贝母、半夏、
胆南星散结化痰；牡蛎、山慈姑软坚散结。合之共奏
疏肝理气，化痰散结之功。因配方便于临床加减，患
者依从性好，故疗效显著。
收稿日期　２０１３－０４－０５
６　参考文献
［１］倪克锋，丁志山，黄挺，等．三叶青黄酮对Ｈ－２２荷瘤小鼠瘤体
的抑制作用及其机理研究［Ｊ］．浙江中医药大学学报，２００８，３２
（６）：７３２－７３４．
［２］程伟，陆曙梅．三叶青提取物对肺癌 Ａ５４９细胞的体外抑制作
用［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２００７，１３（１０）：５３－５６．
［３］汪珍，冯健，王晓华，等．三叶青提取物对人结肠癌细胞系
ＲＫＯ细胞凋亡的影响［Ｊ］．浙江中医药大学学报，２００８，３２（３）：
３２１－３２２，３２４．
［４］冯正权，倪克锋，何煜，等．三叶青黄酮诱导ＳＧＣ－７９０１胃癌细
胞凋亡的实验研究［Ｊ］．中国临床药理学与治疗学，２００６，１１（６）：
６６９－６７２．
收稿日期　２０１３－０５－０９
·６０６· 浙江中医杂志２０１３年８月第４８卷第８期