全 文 ：临 床 军 医 杂 志 (ClinJMedOffic) 2008年 8月第 36卷第 4期
牛大力多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用
石　焱 ,弓小雪 , 那　婕　(解放军第 210医院　药剂科 ,辽宁　大连　116021)
摘要:目的　探讨牛大力多糖对免疫功能低下小鼠的免疫调节作用。方法　采用环磷酰胺和荷瘤的方法建立免疫抑制小鼠动物模型 ,小
鼠以灌胃的方法给予不同剂量牛大力多糖 ,利用 MTT检测淋巴细胞转化及巨噬细胞吞噬中性红实验 , 分析牛大力多糖对免疫抑制小鼠的
影响 。结果　牛大力多糖可增强吞噬细胞的吞噬功能 ,增加抗体形成细胞的数量 ,促进淋巴细胞转化 。结论　牛大力多糖明显具有增强
小鼠免疫功能的作用 ,以高剂量组效果最为显著。
关键词:牛大力多糖;环磷酰胺;荷瘤;免疫调节
中图分类号:R 392　　　　　　　　文献标志码:A　　　　　　　　文章编号:1671-3826(2008)04-0530-03
ImmunoregulatoryEffectsofPolysaccharideonImmunosuppressedMice
ShiYan, GongXiao-xue, NaJie　(PLANo.210 Hospital, Dalian116021, China)
Abstract:Objective　ToinvestigateimmunoregulatoryactivityofpolysaccharideofNiudali(NDLS)onimmunosuppressedmice.
Methods　Themodelsofimmunosuppressedmicewereestablishedbytreatingwithcyclophosphamideandtumor-bearing.Diferent
dosesofNDLSwereorallyadministeredtothemice.MTTmethodwasusedtoobservetheproliferationoflymphocytesandthefunc-
tionofmacrophagesinabdominalactivitywasalsomeasured.Spectrophotometrywasadoptedtoevaluatetheabilityofplaqueforming
cels.Results　NDLSenhancedthefunctionofmacrophage, increasetheamountofplaqueformingcels, andpromotetheprolifera-
tionoflymphocytes.Conclusion　NDLScanenhancetheimmunofunctionofimmunosuppressedmice.
Keywords:polysaccharideofNiudali;cyclophosphamide;tumor-bearing;immunoregulation
　　牛大力为豆科崖豆藤属植物美丽崖豆藤(Milettiaspe-
cisoaChamp),以根入药 , 始载《花草药性备要 》全年可采 。
以秋季挖根为佳。其性平 , 味甘 , 归肺 、肾经。 具有补虚润
肺 、强筋活络的功能 , 药理研究表明其对实验小鼠 B淋巴
细胞分泌特异抗体及 T淋巴细胞产生白介素-2具有免疫
调节作用 [ 1] 。但是对于牛大力的化学成分及其生物活性
少有报道 , 本实验研究了牛大力多糖(NDLS)对环磷酰胺
(Cy)和荷瘤所致免疫功能低下小鼠的免疫调节作用 , 以期
为牛大力的开发研究提供基础依据 。
1　材料与方法
1.1　药物　牛大力经南方医科大学中医药学院中药鉴定
教研室陈兴兴鉴定 , 用无菌生理盐水配成所需浓度 。
1.2　试剂与仪器　(1)试剂:1640培养液 、MTT、ConA均
为 Hyclone公司产品。 Cy为上海第十二制药厂产品。 (2)
仪器:DG3022型酶联免疫检测仪 , 华东电子仪器厂;721型
分光光度计 , 上海第三分析仪器厂生产;5%CO2 培养箱
(WJ-3A),上海跃进医疗器械厂。
1.3　动物　KIH种小白鼠 50只 , 体重 18 ～ 22 g, 由南方医
科大学实验动物中心提供 ,雌雄各半。
1.4　实验方法
1.4.1　分组及给药　KIH种小鼠 50只 , 体重 18 ～ 22 g,雌
雄各半 , 随机分为对照组 、模型组 、NDLS低中高剂量组
(100、200、400 mg/kg), 每组 10只。对照组 、模型组给予同
容量的生理盐水 , 每天 1次 , 连续 10 d。
1.4.2　造模 [ 2]　于给药第 4天 ip60mg/kgCy, 建立免疫
低下小鼠模型。无菌条件下抽取接种 7 d小鼠的腹水 , 用
灭菌生理盐水 1:3稀释 , 接种小鼠足趾皮下 , 0.2 ml/只 ,于
接种后第 2天开始给药 , 10 d后处死小鼠 , 建立荷瘤小鼠
模型。
1.4.3　抗体形成细胞(PFC)的测定 [ 3 ～ 4]　采用溶血分光光
度法 , 于给药第 4天 ip5%新鲜无菌绵羊红细胞(SRBC)悬
液 0.2 ml进行免疫 , 末次给药后 1 h处死小鼠 ,制备脾细胞
悬液 , 取 1×107脾细胞悬液 、1:10豚鼠血清和 0.2% SRBC
各 1ml混匀 , 37 ℃水浴 1h, 离心取上清 , 用 721分光光度
收稿日期:2008-03-21
作者简介:石　焱(1973-), 女 ,满族 ,大连人 ,主管药师 ,医学硕士 ,目前主要从事临床药理学研究。
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第 3期 牛大力多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用　石　焱 , 等
计在 560 nm处测吸光度。
1.4.4　淋巴细胞转化实验 [ 5]　给药结束后处死动物 , 无菌
取脾 ,制备脾细胞悬液。将同一组细胞悬液混合 , 调细胞浓
度为 5×106 /ml, 取 150 μl细胞悬液加入 96孔培养板 , 并
加入 50 μlConA(终浓度 2 μg/ml), 置 37 ℃ 5% CO2培养
箱培养 48 h, 弃上清 , 加 MTT10 μl孵育 4 h, 每孔加酸化异
丙醇 100 μl, 用酶标仪在 570 nm处测定吸光度。
1.4.5　腹腔巨噬细胞吞噬功能实验　无菌抽取荷瘤小鼠
腹腔液 , 离心洗涤 2次 , 用培养液将细胞浓度调至 1.5×
106 /ml,于 96孔板加细胞悬液 200 μl, 置 37 ℃ 5% CO2培
养箱过夜 , 取出 , 弃上清 ,每孔各加 0.073%的中性红 50μl,
继续培养 30 min, 弃中性红 , 用预温的 PBS洗 2次 , 再加细
胞裂解剂 , 用酶标仪在 540 nm处测定吸光度。
1.5　统计学方法　统计分析采用 SPSS13.0软件 , 结果以
均数 ±标准差表示 , 经方差齐性检验后行单因素方差分析 ,
方差齐性时 , 采用 LSD方法进行组间多重比较;方差不齐
时 ,采用 DunnettT3方法进行组间多重比较 , 以 P<0.05定
为差异有统计学意义。
2　结果
2.1　牛大力多糖对 Cy处理小鼠脾淋巴细胞增殖能力与
PFC的影响　实验结果表明牛大力多糖可明显提高 Cy处
理小鼠脾淋巴细胞无丝裂原的 OD值 、ConA的 OD值和
PFC的 OD值 , 且与剂量呈正相关 , 详见表 1。
表 1　牛大力多糖对 Cy处理小鼠脾淋巴细胞增殖能力与 PFC的影响
(x±s, n=10)
组别 剂量 (mg/kg) 脾淋巴细胞增殖能力 OD值无丝裂原 ConA PFCOD值
对照组 　　　　0 0.57±0.09 0.74±0.35 0.65±0.19
模型组 　　　　0 0.41±0.07① 0.40±0.19② 0.37±0.11②
NDLS高剂量组 　　　400 0.54±0.08③ 0.69±0.26④ 0.58±0.16④
NDLS中剂量组 　　　200 0.49±0.10③ 0.54±0.25③ 0.45±0.14③
NDLS低剂量组 　　　100 0.50±0.08③ 0.45±0.16 0.39±0.16
　　与对照组比较 , ①P<0.05, ②P<0.01;与模型组比较 , ③P<
0.05, ④P<0.01
2.2　牛大力多糖对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖能力与 PFC
的影响　实验结果表明牛大力多糖可明显提高荷瘤小鼠脾
淋巴细胞无丝裂原的 OD值 、ConA的 OD值和 PFC的 OD
值 ,且与剂量呈正相关 , 详见表 2。
表 2　牛大力多糖对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖能力与PFC的影响
(x±s, n=10)
组别 剂量 (mg/kg) 脾淋巴细胞增殖能力 OD值无丝裂原 ConA PFCOD值
对照组 　　　　0 0.73±0.29 0.64±0.25 0.55±0.17
模型组 　　　　0 0.51±0.27① 0.42±0.29② 0.25±0.13②
NDLS高剂量组 　　　400 0.69±0.16③ 0.60±0.26③ 0.52±0.14④
NDLS中剂量组 　　　200 0.54±0.19 0.50±0.15③ 0.45±0.14③
NDLS低剂量组 　　　100 0.53±0.18 0.45±0.19 0.39±0.16③
　　与对照组比较 , ①P<0.05, ②P<0.01;与模型组比较 , ③P<
0.05, ④P<0.01
2.3　牛大力多糖对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的
影响　实验结果表明牛大力多糖可明显提高荷瘤小鼠腹腔
巨噬细胞吞噬能力 , 且与剂量呈正相关 ,详见表 3。
表 3　牛大力多糖对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的影响
(x±s, n=10)
组别 剂量(mg/kg) OD(值)
对照组 　　　0 0.55±0.18
模型组 　　　0 0.38±0.09①
NDLS高剂量组 　　400 0.50±0.15②
NDLS中剂量组 　　200 0.48±0.16②
NDLS低剂量组 　　100 0.39±0.11
　　与对照组比较 , ①P<0.01;与模型组比较 , ②P<0.05
3　讨论
机体的免疫功能与肿瘤的发生发展有密切关系 。当宿
主免疫功能低下或受抑制时 , 肿瘤发生率增高 , 而在肿瘤进
行性生长时肿瘤患者的免疫功能受抑制 , 二者也互为因
果 [ 6] 。
植物多糖具有显著的免疫活性 , 尤其是在抗肿瘤方面
疗效明确。 Cy为较强的免疫抑制剂 ,它对多种免疫活性细
胞均有抑制作用。肿瘤患者常伴有免疫功能低下及免疫器
官萎缩。目前认为 , 机体的免疫功能降低有利于肿瘤的形
成和发展。因此 ,本实验采用 Cy和荷瘤的方法制备免疫功
能低下的动物模型。结果显示 , 对照组和模型组实验指标
差异具有统计学意义 , 说明本实验成功复制了实验动物模
型 。实验研究表明 , NDLS可促进免疫抑制小鼠的 IgM抗体
的生成 , 增加抗体形成细胞的数量 , 促进 B淋巴细胞增殖及
分泌。 NDLS对免疫抑制小鼠和由 ConA诱导的脾 T淋巴
细胞转化能力低下的现象均有明显增强无丝裂原作用 , 并
呈浓度依赖性的双向作用。
机体免疫状态失常是肿瘤发生与发展的重要因素 , 免
疫功能抑制或紊乱 , 使肿瘤细胞能够逃避机体免疫系统对
其的杀伤作用 。肿瘤细胞分泌的可溶性免疫抑制因子可诱
导免疫抑制细胞活化 , 进一步削弱机体整体的免疫功能 ,
因此肿瘤患者多表现不同程度的免疫功能减弱。目前已知
针对多种病毒 、肿瘤的细胞免疫是机体的重要防御因
素 [ 7 ～ 8] 。提高肿瘤病人的免疫机能是肿瘤免疫治疗的重要
方面 ,此项研究为牛大力多糖提高肿瘤患者免疫功能提供
了实验依据。 该药具有药源充足 、疗效显著 、毒副作用小及
不易产生耐药性等优点 ,具有广阔的应用前景。
参考文献:
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高原部队野外驻训演习常见病调查
巴焕玲 ,余　军　(解放军第 8医院 , 西藏　日喀则　 857000)
关键词:高海拔;军人;疾病谱;野外驻训
中图分类号:R 339.54
　　我部地处西藏高寒地区 ,平均海拔 4 000 m余 ,气候较
为恶劣。为了提高广大高原官兵 , 尤其是野外驻训演习的
官兵的健康水平 ,为了制定合理高效的卫勤保障措施提供
依据 ,我们对近两年来野外准训演习人员的健康状况进行
了相关调查 , 现将结果报告如下。
1　对象与方法
1.1　对象　进驻海拔约 4 300 m的 890名官兵 , 包含步
兵 、炮兵 、装甲兵 、以及后勤保障部队 , 年龄 17 ～ 49岁 , 平均
23岁;高原生活 1 ～ 27年 , 平均 2.7年 。
1.2　调查方法　采取问卷 、问诊 、查体 、以及物理和化学等
辅助检查相结合 ,对每一个体逐个检查 , 对既往有的症状因
进驻训地后加重的视为阳性 , 不变化的视为阴性 。对不能
辨别的症状 、体征后送至驻地中心医院进行确诊。
2　结果
高原部队野外驻训演习常见症状 、疾病谱检出情况见
表 1、 2。
表 1　高原驻训部队常见症状检出情况
症状 例数 检出率(%) 症状 例数 检出率(%)
头痛 383 43.03 关节痛 93 10.45
胸闷 349 39.21 便秘 91 10.22
咳嗽 297 33.37 腰腿痛 89 10.00
失眠 259 29.10 腹泻 73 8.20
鼻塞 213 23.93 皮肤灼痛 72 8.09
腹痛 192 21.57 胸痛 64 7.19
焦虑 152 17.08 晕厥 57 6.40
乏力 139 15.62 抑郁 39 4.38
牙龈出血 125 14.04 恐惧 37 4.16
咽痛 114 12.81 嗜睡 25 2.81
腹胀 111 12.47 耳鸣 18 2.02
烦躁 95 10.67 浮肿 4 0.45
　　从表 1、2可以看出 , 高原野外驻训常见的主要疾病症状
依次为头痛(43.03%)、胸闷(39.21%)、咳嗽(33.37%)、失眠
表 2　高原野外驻训演习多发疾病检出情况
疾病名称 例数 检出率(%)
上呼吸道感染 294 33.03
功能性消化不良 183 20.56
高原红细胞增多症 159 17.87
皲裂 157 17.64
维生素缺乏症 139 15.62
日光性皮炎 119 13.37
急性高原反应 103 11.57
关节病 90 10.11
血管神经性头痛 81 9.10
血管抑制性晕厥 74 8.31
紧张性头痛 73 8.20
心理障碍 53 5.96
急性胃肠炎 53 5.96
高原高血压 19 2.13
高原低血压 12 1.35
消化性溃疡 8 0.90
高原心脏病 2 0.22
(29.10%)、鼻塞(23.93%)、腹痛(21.57%)、焦虑(17.08%)
等。主要疾病的分布主要为:上呼吸道感染 、功能性消化不
良 、高原红细胞增多症 、皲裂 、维生素缺乏症 、日光性皮炎 、
高原反应等。近年来备受各级关注的心理方面的疾病也占
了 5.96%。
3　讨论
高原部队野外驻训所处环境极为恶劣 , 与外界相对隔
绝 ,活动范围较狭小 , 获取外界信息渠道单一 , 这样的环境
对驻训官兵无疑是一种应急性刺激 ,对各种疾病的发生 、发
展产生了一定的影响。当然 , 引起这些疾病的原因 , 主要还
包括高原缺氧 、紫外线强度大 、干燥 、寒冷等。此外 , 与绝大
多数官兵来自低海拔地区 ,驻训当地交通落后 、部队的任务
性质和严格的军事管理 、高强度的军事训练以及与之不对
称的卫勤保障现状等诸多因素也不无关系。由此可见 , 今
后在高原部队野外驻训中 , 应有的放矢地针对这些问题做
好卫勤保障。 此外 , 从本调查看出 , 心理疾病有增多趋势 ,
因此加强高原官兵的心理卫生知识以及在相应的时候配置
一定数量的心理医生 , 对提高高原部队战时的战斗力及减
少非战斗减员非常必要 。
(收稿日期:2008-05-13)
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