全 文 ：天然产物研究与开发 NatProdResDev2008, 20:892-895
文章编号:1001-6880(2008)05-0892-04
　
　
　收稿日期:2007-09-24　　　接受日期:2007-12-03
　基金项目:国家自然科学基金(30571520)
＊通讯作者 Tel:86-013093402998;E-mail:dingze08@hotmail.com
山核桃叶总黄酮抗衰老作用的研究
陈红红 1 ,李助乐 1 ,章　健 2 ,丁之恩 1＊
1安徽农业大学林学与园林学院 , 合肥 230036;2安徽中医学院方剂教研室 , 合肥 230000
摘　要:本文就山核桃叶总黄酮对衰老小鼠的抗衰老作用进行了研究。实验采用颈背部皮下注射 D-半乳糖
1250 mg· kg-1· d-1 42 d造成衰老模型。结果表明 , 山核桃叶总黄酮显能使衰老小鼠血清中 SOD酶活力升高 ,
MDA含量显著降低 , 脑组织中 MAO活性降低。表明山核桃叶总黄酮对 D-半乳糖致的衰老小鼠具有延缓衰老
作用。
关键词:山核桃叶总黄酮;超氧化物歧化酶;丙二醛;单胺氧化酶
中图分类号:R285.5;Q946.91 文献标识码:A
StudyontheAnti-agingEffectofFlavonoidsinHickoryLeaf
CHENHong-hong1 , LIZhu-le1 , ZHANGJian2 , DINGZhi-en1＊
1SchoolofForestry＆LandscapeArchitecture, AnhuiAgriculturalUniversity, Hefei230036 , China;
2AnhuiCollegeofTraditionalChineseMedicine, FormulaofTraditionalChineseMedicineOffice, Hefei230000 , China
Abstract:Theefectofflavonoidsinhickoryleafwasinvestigatedinthispaper.Modelsofagingmicewerepreparedby
injectionD-galactose1250mg· kg-1· d-1 for42d.TheresultsshowedthattheactivityofSODinserumwassignificantly
increased, whilethecontentofMDAinserumwasdecreasedremarkably, theMAOactivityinthebrainorganizationwas
suppressed.Itissuggestedthattheflavonoidsinhickoryleafhasanti-senileeffectinagedmice.
Keywords:flavonoidsinhickoryleaf;SOD;MDA;MAO
　　山核桃(CaryacathayensisSarg.)是我国特有的
名优干果和木本油料作物 ,胡桃科山核桃属植物 ,主
要分布在浙江临安 ,皖南山区和皖西大别山 。具有
营养 、保健 、美容及药用价值[ 1] 。国内外对山核桃
的研究主要集中于对其植物形态分类 、栽培 、山核桃
仁营养价值等方面 。如:刘力等 [ 2]报道临安 、淳安 、
安吉三地区山核桃种仁粗蛋白含量平均值为 113.0
mg/g,富含 17种氨基酸 ,其中含人体 8种必需氨基
酸中的 7种 ,必需氨基酸占氨基酸总量的 33.07%,
胡旭姣等 [ 3] 亦报道山核桃叶具有抗肿瘤的功效 。
目前 ,尚未发现对山核桃叶中化学成分的抗氧化 、抗
衰老等作用的相关研究报道。
人参皂甙是人参的主要有效成分之一 。王红丽
等 [ 4, 5]研究发现人参皂甙可有效拮抗 D-半乳糖所致
皮肤细胞的衰老 ,其机制为人参皂甙水解后生成皂
甙元 ,即人参二醇 、人参三醇 、齐墩果酸等 ,特别是人
参皂甙 Rb-1和 Rg-1,这些物质可促进细胞的新陈
代谢 ,加快衰老皮肤细胞核酸和蛋白质的合成 ,同时
增加皮肤中 SOD含量和活性 ,发挥其强大的抗氧化
和清除自由基作用。本文即以人参皂甙为阳性对
照 ,对山核桃叶子中提取总黄酮的延缓衰老作用进
行初步探讨 ,旨在开展安全无毒的天然抗氧化剂以
及药品和保健品 ,用于食品的保鲜和清除人体内多
余的自由基 ,并且从中寻找有效的抗氧化剂 ,可以用
于医药 、食品 、保健品 、饮料 、化妆品等之中。
1　材料与方法
1.1　实验材料
1.1.1　实验动物
昆明种 5周龄雌性小鼠 50只 ,清洁级 ,体重(18
±2)g(由南京医科大学提供 , 许可证号:SCXK
(苏)2002-0031),标准饲料饲养 (饲料由安徽省中
医药研究院全椒安立动物中心提供)。饲养环境:
低噪音(<60 dB), 温度 18 ～ 25 ℃,湿度 35% ～
55%。
1.1.2　实验仪器
755B紫外可见光分光光度计(上海精密科学仪
器有限公司);HH-2数显恒温水浴锅(江苏省金坛
市荣华仪器制造有限公司);800型离心沉淀器(上
海手术器械厂);H-1微型混匀器(上海康禾光电仪
器有限公司)。
1.1.3　主要试剂
山核桃叶总黄酮(自制), D-半乳糖 (泰格生物
有限公司), 80%人参皂甙(惠州市东方植物保健有
限公司),超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒 ,丙二醛
(MDA)试剂盒 ,单胺氧化酶(MAO)试剂盒均购于
南京建成生物工程研究所 。
1.2　实验方法
1.2.1　山核桃叶总黄酮的制备
山核桃叶于 2006年 10月采自安徽宁国市南极
乡成年山核桃树 ,由安徽农业大学丁之恩教授鉴定 。
叶子采摘后带回实验室真空干燥破碎 , 20目过筛 ,
备用。将粉碎后山核桃叶用石油醚回流浸泡 30 ～
50 min进行脱腊处理 ,挥尽石油醚 ,再用 70%的乙
醇于 65 ℃回流提取 12 h,提取液减压浓缩 ,同时回
收乙醇 ,水相部分经大孔树脂 ,蒸馏水洗去杂质后依
次用 30%、50%、70%、90%乙醇进行洗脱 ,合并乙
醇溶液洗脱组分 ,减压浓缩真空干燥后得棕黄色粉
末为山核桃叶总黄酮 ,测得总黄酮含量为 85.63%。
1.2.2　动物分组与给药方法
取小鼠 50只随机分为 5组:①空白对照组;②
衰老模型组;③人参皂甙组(100 mg· kg-1· d-1);④
山核桃叶总黄酮低剂量组(2 mg· kg-1· d-1);⑤山
核桃叶总黄酮高剂量组(4mg· kg-1·d-1);其中 , ②
③④⑤组颈背部皮下注射 D-半乳糖 1250 mg· kg-1
· d-1 42 d;①和②组灌胃等容积蒸馏水 ,山核桃叶
总黄酮及人参皂甙均灌胃给药 42d,每天 1次 ,各组
均饲以标准饲料 ,自由饮水 。
1.2.3　标本取材与处理
42 d后 ,末次灌胃后禁食 24 h,小鼠摘眼球取
血 ,分离出血清 ,存放于 4 ℃冰箱中 ,备用;同时 ,迅
速取小鼠脑组织做成 10%组织匀浆 ,取上清液待
测 。
1.2.4　指标测定
超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛(MDA)、单胺
氧化酶(MAO),均按照试剂盒说明书方法进行。
1.2.5　统计学处理
全部数据处理在 DPS数据处理系统中完成 ,组
间采用 LSD法进行多重比较。
2　结果与分析
2.1　山核桃叶总黄酮对血清中超氧化物歧化酶
(SOD)的影响
血清中 SOD的变化如表 1所示 。从表 1中可
以看出:饲喂了山核桃叶总黄酮的小鼠血清中 SOD
活性升高 ,而衰老模型组 SOD降低 ,说明造模成功。
山核桃叶总黄酮 2mg·kg-1· d-1组与空白对照组比
较差异显著(P<0.05),山核桃叶总黄酮 4 mg·kg-1
·d-1组与空白对照组比较差异极显著(P<0.01)。
低剂量组 SOD值高于空白对照组和衰老模型组 ,但
是低于人参皂甙组 ,说明低剂量的山核桃叶总黄酮
有增强血清中 SOD活性的作用 ,但是效果还是不如
人参皂甙;高剂量组 SOD值高于人参皂甙组 ,表明
随着总黄酮剂量的增加 , SOD活性也逐渐升高 。
表 1　山核桃叶总黄酮对衰老小鼠血清中 SOD的影响(n=
10, x±s)
Table1　EfectsofflavonoidsinhickoryleafonSODinserum
ofagedmice(n=10, x±s)
组别
Group
剂量Dose
(mg/kg)
SOD活力
(U/mL)
空白对照 Normal - 143.82±3.56dC
衰老模型 Agingmode - 136.01±1.15eD
人参皂甙 Ginsengsaponins 100 156.35±1.20bB
低剂量组 Lowdose 2 146.98±1.36cC
高剂量组 Highdose 4 167.10±1.99aA
　　注:本文对不同组间数据进行了统计分析 ,不同大写字母表示在
99%的置信区间进行比较 ,差异极显著(P<0.01);不同小写字母表
示在 95%的置信区间进行比较 ,差异显著(P<0.05)。
Note:Thedataofdiferentgroupshasbeenstatisticalanalyzedinthis
paper, comparisonofconfidenceintervalat99% areexpresedbydifer-
entcapitalleters, thediferencewasextremelysignificant(P<0.01);
Comparisonofconfidenceintervalat95%areexpressedbydiferentsmal
leters, thediferencewassignificant(P<0.05).
2.2　山核桃叶总黄酮对血清中丙二醛(MDA)的影
响
小鼠血清中 MDA相对含量如表 2所示。由表
2可知 ,除衰老模型组外 ,其它实验各组的 MDA含
量都有所下降 。其中 , 2 mg·kg-1·d-1组 MDA含量
低于空白对照组(P≤ 0.01)和衰老模型组 ,但是高
于人参皂甙组 , 4mg· kg-1· d-1组 MDA含量均低于
空白对照组(P≤ 0.01)、衰老模型组和人参皂甙
组。综合分析认为 ,山核桃叶总黄酮有减少血清中
MDA含量的功效 ,并且随着用药剂量的增加 ,血清
中 MDA含量随之减少。显著性比较表明:达差异
极显著水平。
893Vol.20 　　　　　　陈红红等:山核桃叶总黄酮抗衰老作用的研究 　
表 2　山核桃叶总黄酮对衰老小鼠血清中 MDA的影响(n=
10, x±s)
Table2　EfectsofflavonoidsinhickoryleafonMDAinSerum
ofagedmice(n=10, x±s)
组别
Group
剂量 Dose
(mg/kg)
MDA含量
(nmol/mL)
空白对照 Normal - 17.03±0.29bB
衰老模型 Agingmode - 18.95±0.48aA
人参皂甙 Ginsengsaponins 100 15.93±0.50dC
低剂量组 Lowdose 2 16.33±0.47cC
高剂量组 Highdose 4 14.88±0.11eD
　　注:本文对不同组间数据进行了统计分析,不同大写字母表示在
99%的置信区间进行比较 ,差异极显著(P<0.01);不同小写字母表
示在 95%的置信区间进行比较,差异显著(P<0.05)。
Note:Thedataofdiferentgroupshasbeenstatisticalanalyzedinthis
paper, comparisonofconfidenceintervalat99% areexpressedbydifer-
entcapitalleters, thediferencewasextremelysignificant(P<0.01);
Comparisonofconfidenceintervalat95%areexpresedbydiferentsmall
leters, thediferencewassignificant(P<0.05).
2.3　山核桃叶总黄酮对脑组织中单胺氧化酶
(MAO)的影响
脑组织中 MAO的检测结果如表 3所示 。从表
3中可以发现:衰老模型组小鼠脑组织中 MAO活性
水平较空白对照组高 ,两者间差异极显著 。与衰老
组相比 ,山核桃叶总黄酮 2 mg· kg-1· d-1组的 MAO
活性降低 ,但是高于人参皂甙组;山核桃叶总黄酮 4
mg·kg-1·d-1组的亦降低 ,并且低于 2mg·kg-1· d-1
组和人参皂甙组 ,表明山核桃叶总黄酮能降低 D-半
乳糖引起的单胺氧化酶活性(MAO)的升高 ,并且随
着剂量的增加效果更明显 。
表 3　山核桃叶总黄酮对衰老小鼠脑组织 MAO的影响(n=
10, x±s)
Table3　EfectsofflavonoidsinhickoryleafonMAOinbrain
tissueofagedmice(n=10, x±s)
组别
Group
剂量 Dose
(mg/kg)
MAO含量
(U/mg)
空白对照 Normal - 15.27±1.13bB
衰老模型 Agingmode - 26.42±3.19aA
人参皂甙 Ginsengsaponins 100 14.31±0.31dD
低剂量组 Lowdose 2 15.04±1.07cC
高剂量组 Highdose 4 13.63±2.18eE
　　注:本文对不同组间数据进行了统计分析,不同大写字母表示在
99%的置信区间进行比较 ,差异极显著(P<0.01);不同小写字母表
示在 95%的置信区间进行比较,差异显著(P< 0.05)。
Note:Thedataofdiferentgroupshasbeenstatisticalanalyzedinthis
paper, comparisonofconfidenceintervalat99% areexpressedbydifer-
entcapitalleters, thediferencewasextremelysignificant(P<0.01);
Comparisonofconfidenceintervalat95%areexpresedbydiferentsmall
leters, thediferencewassignificant(P<0.05).
3　讨论
大量的实验证明 , D-半乳糖化小鼠能较好的模
拟衰老表现。 D-半乳糖致动物老年性痴呆主要是自
由基介导的生物损伤:D-半乳糖经氧化酶催化氧化
成半乳糖醛 ,进一步代谢为 CO2和木酮糖 ,伴随产
生 O2-和 H2O2 ,脂质过氧化亢进 ,产生超氧阴离子自
由基 ,自由基不仅损害生物膜系统 ,它还损害核酸和
蛋白质的代谢 ,使大脑细胞的转录水平降低 ,蛋白质
合成减少 ,造成神经细胞结构改变和功能退化。
机体抗氧化防御体系中 , SOD、MDA、MAO对氧
化与抗氧化平衡起着至关重要的作用 [ 6] 。超氧化
物歧化酶(SOD)是一种含有铜 、锌 、锰 、铁的金属酶 ,
广泛存在于动物 、植物 、生物体内 [ 7] ,它唯一能够特
异的清除重要的衰老启动因子超氧自由基(· O-2)
的抗氧化物 , SOD能阻断由引发自由基(· O-2)的一
级反应 ,从而减少其它活性氧的生成 [ 8] 。丙二醛
(MDA)是 ·O-2介导的机体内不饱和脂肪酸脂质过
氧化的特征性终末代谢产物 ,其含量直接反应机体
内脂质过氧化的程度[ 9] , MDA增加能使膜蛋白质和
酶分子聚合和交联造成不可逆的破坏 ,使体内主要
脏器心 、肝 、脑 、肾等受损 ,促进疾病的发展 [ 10] 。单
胺氧化酶(MAO)是广泛地催化芳香族 、脂肪族单
胺类氧化脱氨基反应的酶 , 分为 A、B两型 ,其与衰
老密切相关。 MAO在正常肝 、肾 、大脑 、脑干等区活
性较强 ,其定位于线粒体外膜及线粒体嵴 ,可催化单
胺氧化脱氨基 ,参与神经元去甲肾上腺素 、5-羟色胺
等递质的分解 [ 11] 。
由实验结果可以看出:D-半乳糖能使血清中
SOD活性降低 , MDA含量增加 ,脑组织中 MAO活性
增强 ,通过本次实验可知山核桃叶总黄酮能抑制并
且减缓由 D-半乳糖引起的机体衰老 ,使衰老小鼠血
清中的 SOD活性增强 , MDA含量降低 ,并且能抑制
脑组织中 MAO活性 ,表明山核桃叶总黄酮具有增
强小鼠体内抗氧化 ,延缓机体衰老的作用 ,为延缓衰
老药物的开发 、也为其与人类保健关系的研究提供
了一定的依据 。本研究仅对山核桃叶总黄酮的延缓
衰老作用进行初步探讨 ,但是山核桃叶总黄酮抗衰
老和清除自由基的机理 、分子机制以及山核桃叶总
黄酮对小鼠学习记忆等功能的影响尚待进一步研
究。
4　结论
本实验采用通用复制人工催老动物模型的方法
894 天然产物研究与开发　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　Vol.20
复制衰老小鼠 ,发现衰老小鼠组织在功能上发生变
化 ,表现为血清中 SOD活性下降 , MDA含量升高 ,
脑组织 MAO活性升高 ,通过灌胃山核桃叶总黄酮
发现 ,此类物质可以明显增强衰老小鼠血清中 SOD
活性 ,减少血清中 MDA含量以及能抑制脑组织中
MAO的产生 ,可以提高机体对自由基对膜结构损伤
的能力 ,减轻自由基对生物大分子的攻击 ,从而增强
机体清除自由基 ,抗氧化能力 ,恢复老年机体自由基
代谢的平衡 。表明其具有抑制脂质过氧化 、加速清
除体内自由基的作用 。
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