全 文 :食用菌学报2012.19(1):51~55
收稿日期:2011-03-30原稿;2011-06-30修改稿
基金项目:北京市市属高校重点实验室开放研究课题“怀柔野生柳蘑生物学特性与人工驯化研究”(编号:KF2010-
001)、北京市属高等学校人才强教计划资助项目“蔬菜优质安全生产理论与技术体系创新研究”(编号:
PHR200907136)的部分研究内容
作者简介:郝 册(1984-),女,北京农学院在读硕士,从事食用菌栽培研究。
*本文通讯作者 E-mail:cqj13@sohu.com
文章编号:1005-9873(2012)01-0051-05
野生墨汁鬼伞的驯化与栽培
郝 册1,牛玉蓉1,陈青君1*,刘 雅1,谢书清2
(1北京农学院植物科学技术学院,农业应用新技术北京市重点实验室,北京102206;
2北京市怀柔区宝山镇种植业合作社,北京101411)
摘 要:以北京市怀柔区宝山镇野生墨汁鬼伞(Coprinus atramentarius)为试验材料,对其母种、原种培养基
配方进行优化筛选,并采用不同栽培方式研究了野生墨汁鬼伞人工驯化的培养条件。结果表明:实验范围内
供试菌株的菌丝体生长最适碳源为葡萄糖+玉米淀粉,最适氮源是蛋白胨,最适pH值为9。培养料配方以棉
籽壳、麸皮、玉米粉、石灰、锯末、石膏的配方最好,出菇以菌棒立栽覆土效果最好,覆土后55d现菇蕾,3~5d
可采收。第一潮出菇生物学效率可达40%左右,条件适宜可出3~4潮菇。
关键词:墨汁鬼伞;母种培养基;原种配方;驯化栽培
墨汁鬼伞(Coprinus atramentarius)又名柳
树蘑、柳树钻、鬼盖、鬼伞、鬼屋、鬼菌或朝生地
盖,与毛头鬼伞(鸡腿菇)同为鬼伞类食用菌。其
子实体群生,初期卵形至钟形,开伞后逐步液化
成墨汁[1]。墨汁鬼伞幼嫩子实体美味可食,中医
认为,该菌性寒味甘,有益肠胃、理气化痰、解毒
消肿等功效[2]。开发和利用这一野生资源对丰
富食用菌品种和中药研究都具有重要意义。孙
悦迎等人较全面的报道了墨汁鬼伞菌丝体的最
佳培养条件[3],但对墨汁鬼伞原种制备及驯化栽
培方面涉及较少。龚明福等也对阿拉尔地区的
野生墨汁鬼伞生物学特性进行了研究,认为该地
区野生墨汁鬼伞为中高温型食用菌,可用一般食
用菌的培养方法进行培养[4]。笔者于2008年5
月在北京市怀柔区宝山镇采到了野生墨汁鬼伞
子实体,在对墨汁鬼伞的温度、需求特性研究的
基础上[5],对其母种、原种培养基质配方进行了
优化,并比较了子实体人工栽培的培养条件,为
其进一步开发利用奠定基础。
1 材料与方法
1.1 供试菌种
北京市怀柔区宝山镇柳树上野生的墨汁鬼
伞子实体,经组织分离获得菌种。
1.2 母种培养基优化
1.2.1 碳源筛选试验
基 础 培 养 基 (g/L):5.0 蛋 白 胨,1.0
KH2PO4,0.5MgSO4,0.001维生素B1,20.0琼
脂,pH值自然。
以基础培养基为对照,分别加入20g的蔗
糖、葡萄糖、玉米淀粉、乳糖、麦芽糖、果糖、10g
玉米淀粉+10g葡萄糖,成为7个碳源处理。每
个处理接种10个培养皿,平皿接入0.5cm2的活
化菌种块,25℃条件下培养,记录菌丝长满平板
时间,比较菌丝生长速度和长势。
1.2.2 氮源筛选试验
基础培养基(g/L):20葡萄糖,20玉米淀粉,
1KH2PO4,0.5MgSO4,0.001维生素B1,20琼
脂,pH值自然。
以基础培养基为对照,分别加入5g蛋白胨、
牛肉膏、酵母粉、尿素、黄豆粉、硫酸铵和硝酸铵,
共7个氮源处理,重复设置、接种培养和结果观
测同1.2.1。
1.2.3pH值试验
50g玉米粉用蒸馏水浸泡20h,用浸出液制
作PDA 培养基,灭菌前用浓度 1 mol/L 的
DOI:10.16488/j.cnki.1005-9873.2012.01.013
食 用 菌 学 报 第19卷
NaOH或 HC1将pH 分别调节为5、6、7、8、9、
10,共计6个处理。重复设置、接种培养和结果
观测同1.2.1。
1.3 原种培养基优化
以单因素变化设置17个不同配方,以筛选
出适宜墨汁鬼伞菌丝生长的原种配方。
1.3.1 以麦粒为基础的原种配方
P1:94%麦粒,2%葡萄糖,1%碳酸钙,3%
石灰;
P2:89%麦粒,2%葡萄糖,1%碳酸钙,3%石
灰,5%玉米粉;
P3:89%麦粒,2%葡萄糖,1%碳酸钙,3%石
灰,5%粪草土(晒干的双孢蘑菇发酵料)。
1.3.2 以木屑为基础的原种配方
P4:73%粗木屑(约5~8mm大小),18%麸
皮,5%锯末(约1mm大小),1%石膏,3%石灰;
P5:68%粗木屑,18%麸皮,5%锯末,1%石
膏,3%石灰,5%玉米粉;
P6:68%粗木屑,18%麸皮,5%锯末,1%石
膏,3%石灰,5%粪草土。
1.3.3 以棉籽壳为基础的原种配方
P7:78%棉籽壳,18%麸皮,1%石膏,3%
石灰;
P8:73%棉籽壳,18%麸皮,1%石膏,3%石
灰,5%玉米粉;
P9:73%棉籽壳,18%麸皮,1%石膏,3%石
灰,5%粪草土。
1.3.4 木屑、棉籽壳为基础加入锯末的原种配方
P10:粗木屑37%,棉籽壳33%,麸皮18%,
玉米粉5%,石膏1%,石灰3%,锯末3%;
P11:棉籽壳70%,麸皮18%,玉米粉5%,石
膏1%,石灰3%,锯末3%;
P12:粗木屑70%,麸皮18%,玉米粉5%,石
膏1%,石灰3%,锯末3%。
1.3.5 不同石灰添加量的原种配方
P13:72%粗木屑,18%麸皮,3%锯末,5%玉
米粉,1%石膏,1%石灰;
P14:70%粗木屑,18%麸皮,3%锯末,5%玉
米粉,1%石膏,3%石灰;
P15:68%粗木屑,18%麸皮,3%锯末,5%玉
米粉,1%石膏,5%石灰;
P16:66%粗木屑,18%麸皮,3%锯末,5%玉
米粉,1%石膏,7%石灰;
P17:64%粗木屑,18%麸皮,3%锯末,5%玉
米粉,1%石膏,9%石灰。
以上配方按料水比1∶1.1~1.2混合均匀
后装入250mL菌种瓶,将活化的每个母种平皿
平均分为10块,每瓶接1个菌种块。每个配方接
种10瓶。25℃条件下培养,观测菌丝萌发时间、
满瓶时间和菌丝形态。
1.4 驯化栽培试验
根据原种配方优化结果,选择菌丝综合长势
较好的P10和P11作为扩大栽培配方,用33cm×
17cm 塑料袋制作菌袋,每袋装料合干重约
475g,料水比为1∶1.1。接种直径约为3cm的
菌块,25℃条件下恒温培养,菌丝满袋后采用下
述的覆土立袋栽培和不覆土立袋栽培进行出菇
试验,并统计各处理下菌丝发满覆土层时间、土
层表面菌丝消退时间、原基形成时间、子实体采
收时间、产量及生物转化率[6,7]。
试验栽培分别在北京农学院植物科学技术
学院温室和怀柔宝山镇种植业合作社温室进行。
1.4.1 覆土立袋栽培
农学院温室内挖0.6m×0.4m×0.15m的
畦床,在畦床内洒上石灰。脱去菌袋塑料膜,立
放于畦内,菌袋间相隔3~5cm。覆盖砂性土壤,
土壤高出菌袋约3cm。浇足水分。每畦10个菌
袋,每处理3个重复。
怀柔温室内挖5m×1m×0.15m的畦床,
菌袋和覆土的处理方法同上,菌袋总数197个。
1.4.2 不覆土立袋栽培
按1.4.1的方式制备畦床,将菌袋两端的塑
料膜截去1~2cm,立袋放置,放置和菌袋间填土
方法同1.4.1,菌袋表面不覆土。浇足水分。每
畦10个菌袋,每处理3个重复。
2 结果与分析
2.1 母种培养条件筛选
不同碳源、氮源和pH对墨汁鬼伞菌丝生长
的影响见表1。
pH对菌丝生长影响很明显,墨汁鬼伞菌丝
接种3~4d后开始萌发,第6~10d菌丝生长速
度较快;菌丝洁白、细棉绒状,不同pH 条件下的
菌丝形态基本一致,但菌丝生长速度差别很大。
pH 5时菌丝较慢,pH 6~8范围内生长快,
pH 9~10生长最快。pH 9~10处理中12d时
菌丝长势浓密,但到15d时,接种块周围菌丝呈
淡黄褐色,表现出老化症状,pH 10老化症状更
25
第1期 郝 册,等:野生墨汁鬼伞的驯化与栽培
明显。其它处理在菌丝长满皿后2~3d也逐渐
出现淡黄褐色。综合考虑,pH 9是墨汁鬼伞菌
丝体生长的最佳条件。
2.2 原种培养基的筛选
以麦粒为主的P1~P3中,菌丝萌发快(1周
左右),38~51d 满瓶,平均长速为 1.76~
2.40mm/d,菌丝较浓密,但生长不均匀且菌丝
颜色略黄。
以粗木屑为主的P4~P6中,菌丝萌发时间
较长(9~18d),37~60d满瓶,平均长速为
1.88~2.38mm/d,菌丝白,但非常稀疏。
以棉籽壳为主的P7~P9中,菌丝萌发时间
表1 不同因子对墨汁鬼伞菌丝培养的影响
Table 1 Effect of different cultural parameters on C.atramentarius mycelial growth and vigor
碳源
Carbon source
菌丝生长
Mycelial growth rate
(Growth vigor)*
氮源
Nitrogen source
菌丝生长
Mycelial growth rate
(Growth vigor)
pH
菌丝生长
Mycelial growth rate
(Growth vigor)
对照
aControl
12±0.7
(+)
对照
bControl
14±0.5
(+)
5
20±0.6
(++)
乳糖
Lactose
**
(+++)
尿素
Urea
不生长
No mycelial growth
6
17±0.6
(+++)
蔗糖
Sucrose
12±0.9
(+)
酵母
Yeast
**
(+++)
7
17±0.5
(+++)
果糖
Fructose
16±0.7
(+++)
NH4NO3
15±0.4
(+)
8
17±0.7
(+++)
葡萄糖
Glucose
16±0.9
(++)
(NH4)2SO4
14±0.5
(+)
9
14±0.3
(+++)
麦芽糖
Maltose
15±0.6
++
黄豆粉
Soybean flour
14±0.6
(+)
10
14±0.4
(++)
玉米淀粉
Corn starch
16±0.7
(++)
牛肉膏
Beef extract
15±0.4
(++)
葡萄糖+玉米淀粉
Glucose+Corn starch
14±0.7
(+++)
蛋白胨
Peptone
15±0.3
(+++)
*数据为菌丝长满平皿天数,为10个重复的平均值,**表示20d时菌丝尚未长满平皿;+++表示菌丝浓密,++表示菌丝较浓密,+表
示菌丝稀疏
*Values represent the average(n=10)time(d)±SD required for the fungal mycelium to fuly colonize a 9cm diameter Petri dish;
**:Petri dish not fuly colonized after 20d;+++:Very dense and vigorous mycelium,++:dense mycelium,+ relatively
sparse mycelium
a(g/L):5.0peptone,1.0KH2PO4,0.5MgSO4,0.001vitamin B1,20.0agar
b(g/L):20.0glucose,20.0corn starch,1.0KH2PO4,0.5MgSO4,0.001vitamin B1,20.0agar
较短(6~13d),42~52d满瓶,平均长速为1.96
~2.30mm/d,菌丝生长均匀且非常浓密洁白。
在以木屑和棉子壳为主料并加入锯末的配
方中(P10~P12),各配方间菌丝生长存在较大差
异,其中P10、P11两个配方萌发时间较短(6~
9d),40 d 即 可 满 瓶,平 均 长 速 2.45~
2.51mm/d,菌丝浓密洁白,长势非常好,但P12
配方发菌不好,28d萌发、65d满瓶,且菌丝十分
稀疏,长势较差。
在添加不同浓度石灰的配方P13~P17中,
菌丝生长都比较浓密,除P17菌丝较黄外,其它
配方菌丝都是白色;P14和P15中有线状菌丝;
P16、P17中菌丝44~47d即可满瓶,日均生长速
度2.46~2.67mm/d,显著快于其它,表明在稍
微偏碱时菌丝生长较快,与母种pH 试验结果
一致。
综合各项结果,P10、P11两个配方较好。
2.3 墨汁鬼伞出菇试验
2.3.1 墨汁鬼伞子实体的形成过程
在覆土出菇的处理中观察到,菌丝经过一段
时间(11~20d)的生长后先出现在土表层,再经
7~13d后密集的菌丝覆满土层表面,38d左右
菌丝开始消退,并且土表由浓白转为浅黄褐色,
5~7d后土表菌丝完全消失。再过5~9d后土
表出现密集的白色小点,5~10d后发育成直径
约1~2cm的原基,中部略微膨大,菌柄与菌盖
35
食 用 菌 学 报 第19卷
开始分化;随后子实体迅速生长,经2~5d子实
体达到商品菇的品质要求(子实体不老化、不散
孢子)后开始采收(见封三图1)。从原基分化至
采收大约15d。
2.3.2 不同栽培方式对墨汁鬼伞出菇影响及产
量形成
不同栽培方法的出菇结果见表2和表3,结
果显示覆土立袋栽培为墨汁鬼伞的最佳栽培方
式。覆土立袋栽培下,各处理第一潮菇的平均产
量为3.75~5.42kg/m2,平均生物学效率为
24.5~47.15%。不覆土立袋栽培的平均产量仅
为0.83~1.67kg/m2,最高的平均生物学效率仅
为10.9%,而且不覆土栽培所产生的原基和菇蕾
是从菌袋侧面与土接触处发生的,并非菌袋上方
形成。由此也可看出,墨汁鬼伞菌丝体必须与土
共处才可以形成原基。另外,堆袋和发酵堆料栽
培均未出菇,因此不覆土栽培、堆袋和粪草堆料
栽培均不适合墨汁鬼伞的驯化栽培。
表2 不同栽培方式对墨汁鬼伞子实体形成的影响
Table 2 Effect of casing on the vegetative growth and fruiting of C.atramentarius on two different cultivation substrates
覆土处理
Casing treatment
菌丝满土(d)
Time from casing
to complete colonization
of the casing material
by fungal mycelium
菌丝完全消退(d)
Time from casing
to the decline of
mycelial growth on
the casing surface*
原基形成(d)
Time from casing
to primordium
formation
现蕾(d)
Time from
casing to
smal fruit body
formation
采收(d)
Time from
casing to
harvesting
P10(覆土)Casing 27 45 50 55 60
P10(不覆土)
Without casing
NA NA 50 59 62
P11(覆土)Casing 24 43 51 60 63
P11(不覆土)
Without casing
NA NA 51 60 62
P11:substrate consisted of 70%cottonseed huls,18% wheat bran,5%corn flour,3%sawdust,3%lime and 1%gypsum
P12:substrate consisted of 70% wood chips,18% wheat bran,5%corn flour,3%sawdust,3%lime and 1%gypsum
*After colonization of the casing, white fungal mycelium on the surface of the casing material turned yelow and
eventualy disappeared
表3 不同栽培方式对墨汁鬼伞产量的影响
Table 3 Effect of casing on the yield of C.atramentarius fruit bodies
覆土处理
Casing treatment
试验地点
Test site
面积(m2)
Test area
平均产量*(kg/m2)
Average yield*
P10(覆土)Casing 0.24 3.75(24.5%)
P11(覆土)Casing 农学院 0.24 5.42(36.4%)
P10(不覆土)Without casing Colege campus 0.24 0.83(5.8%)
P11(不覆土)Without casing 0.24 1.67(10.9%)
P10(覆土)Casing 怀柔 5 3.36(33.7%)
P11(覆土)Casing Huairou District 5 4.12(47.1%)
*圆括号内的数值是生物学效率
*Data in parentheses are biological efficiency values
3 讨论
目前人工栽培的食用菌均由野生菌驯化而
来,在此过程中,要进行菌种和培养条件的不断改
进。本试验的墨汁鬼伞菌种由枯死的柳树上自然
生长的子实体获得,可以在以葡萄糖+玉米淀粉
为碳源、蛋白胨为氮源的培养基上正常生长,这与
孙悦迎等人的报道一致[3],但在菌丝生长的pH
条件上存在很大差异。孙悦迎等人采自陕西省西
安市大明宫乡遗址北边阴坡麦草地上的野生墨汁
鬼伞生长最适pH 为7.0~7.5,pH 9时完全不
生长[3],龚明福等人采自新疆阿拉尔地区的墨汁
鬼伞适宜pH为5~10,最适pH为6~8[4],而本
实验菌种菌丝体生长最适pH为9,原种中也以添
加7%~9%的石灰配方生长最好。由此看出,不
同地区的墨汁鬼伞菌株在对酸碱性的适应性上存
45
第1期 郝 册,等:野生墨汁鬼伞的驯化与栽培
在较大的差异。
墨汁鬼伞属于鬼伞属食用菌,其栽培特性与
毛头鬼伞(鸡腿菇)有许多相似之处[10]。但本试
验中采用堆料栽培未能出菇,这与毛头鬼伞(鸡腿
菇)不同。本试验覆土立袋栽培效果最好,第一潮
出菇生物学效率40%左右,条件适宜还可出2~3
潮菇。试验表明:菌棒紧密摆放时,产量极高可达
到33.7~47.1kg/m2。墨汁鬼伞商业化栽培时
的菌棒摆放密度、覆土厚度以及与菇质的关系等
条件还需进一步的试验。
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犃狉狋犻犳犻犮犻犪犾犆狌犾狋犻狏犪狋犻狅狀狅犳犆狅狆狉犻狀狌狊犪狋狉犪犿犲狀狋犪狉犻狌狊
HAO Ce1,NIU Yurong1,CHEN Qingjun1*,LIU Ya1,XIE Shuqing2
(1 Colege of Plant Science and Technology,Beijing University of Agriculture,Beijing Key Laboratory
for Agricultural Applications and New Techniques,Beijing 102206,China;2Farming Cooperatives
of Baoshan Town of Beijing Huairou District,Beijing 101411,China)
Abstract:A pure culture of Coprinus atramentarius was isolated from fruit bodies colected in the Huairou
District of Beijing.C.artamentarius mycelium grew wel on a medium,adjusted to pH 9.0,consisting of
glucose(10g/L)and corn flour(10g/L)as the carbon sources,and peptone(3g/L)as the nitrogen source.
Highest biological efficiency values (based on the first flush of fruit bodies)were recorded when the
mushroom was grown on a substrate consisting of 70%cottonseed huls,18% wheat bran,5%corn flour,
3%sawdust,3%lime and 1%gypsum.
Key words:Coprinus atramentarius;cultivation conditions;casing methods
[本文编辑] 曹 晖
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