全 文 ： 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2014, 49 (12): 1711−1717 · 1711 ·
UPLC-MS/MS 法同时测定三叶青中 10种黄酮类成分
许 文 1, 2, 3, 傅志勤 1, 林 婧 3, 黄学城 1, 于虹敏 1, 黄泽豪 1*, 范世明 1*
(福建中医药大学 1. 药学院, 2. 生物医药研发中心, 3. 中西医结合研究院, 福建 福州 350122)
摘要: 建立超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法 (UPLC-MS/MS) 同时测定三叶青中 10 种黄酮类成分
(原花青素 B1、儿茶素、原花青素 B2、芦丁、异槲皮苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷、槲皮苷、槲皮素和
山柰酚) 的含量。采用 UPLC-MS/MS法及负离子多反应监测 (MRM) 模式进行含量测定。色谱条件: 色谱柱为
Waters CORTECS C18 (2.1 mm × 100 mm, 1.6 μm), 流动相为乙腈 (A) − 0.1% 甲酸水 (B), 梯度洗脱, 流速 0.25
mL·min−1, 柱温 45 ℃。在所设定的色谱条件下, 手性异构体原花青素 B1 和 B2 达到基线分离。定量分析的三
叶青中 10 种黄酮类成分在考察的浓度范围内呈良好的线性关系 (r > 0.996 6); 回收率和 RSD 分别在 95.44%～
110.40% 和 2.37%～8.69% 内。本研究所建立的同时测定三叶青中 10 种黄酮类成分的 UPLC-MS/MS 定量分析
方法简便、快捷、准确, 可为综合评价三叶青的质量提供参考。
关键词: 三叶青; UPLC-MS/MS; 黄酮; 质量控制
中图分类号: R917 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (2014) 12-1711-07
Rapid simultaneous determination of ten major flavonoids in
Tetrastigma hemsleyanum by UPLC-MS/MS
XU Wen1, 2, 3, FU Zhi-qin1, LIN Jing3, HUANG Xue-cheng1, YU Hong-min1,
HUANG Ze-hao1, FAN Shi-ming1*
(1. School of Pharmacy, 2. Centre of Biomedical Research and Development, 3. Academy of Integrative Medicine,
Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350122, China)
Abstract: In this study, a rapid and sensitive analytical method was developed for the determination of
10 major compounds (procyanidin B1, catechin, procyanidin B2, rutin, isoquercitrin, kaempferol-3-O-rutinoside,
astragalin, quercitrin, quercetin, and kaempferol) in Tetrastigma hemsleyanum by using ultra-performance liquid
chromatography coupled with triple-quadrupole tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) in multiple-reaction
monitoring (MRM) mode. UPLC-MS/MS assay with negative ion mode was performed on a Waters CORTECS
C18 (2.1 mm × 100 mm, 1.6 μm) with the mobile phase consisting of acetonitrile (A) and 0.1% aqueous formic
acid (B) in gradient elution at a flow rate of 0.25 mL·min−1 and the column temperature was set at 45 ℃. Under
the optimized chromatographic conditions, good separation for 10 target compounds were obtained including
chiral isomer procyanidins B1 and B2 were completely separated within 8.5 min. Satisfactory linearity was
achieved with wide linear range and fine determination coefficient (r > 0.996 6), the overall recoveries were
ranged from 95.44%−110.40% with the RSD ranging from 2.37%−8.69%. It is the first report about simultaneous
analysis of 10 major flavonoids components in Tetrastigma hemsleyanum by using UPLC-MS/MS method, which
收稿日期: 2014-06-17; 修回日期: 2014-08-26.
基金项目: 福建省教育厅资助课题 (JA13154); 福建中医药大学校管课题 (中药学重点学科, X2013017, X2013027); 福建省“大学生创新创业训练计
划”项目 (201410393063).
*通讯作者 Tel / Fax: 86-591-22861135, E-mail: huangzehao@fudan.edu.cn;
Tel / Fax: 86-591-22861217, E-mail: r3570379@163.com
DOI:10.16438/j.0513-4870.2014.12.002
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affords highly sensitive, specific, speedy and efficient method for quality control of Tetrastigma hemsleyanum.
Key words: Tetrastigma hemsleyanum; UPLC-MS/MS; flavonoid; quality control
三叶青为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤
(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg), 其块根又名
为蛇附子、石猴子、石抱子、拦山虎、雷胆子、破石
珠、阴灵子、三叶扁藤、金丝吊葫芦, 是福建、浙江
地区传统习用青草药, 习称为“一粒珠”[1]。三叶青
具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功能, 现代药
理研究表明三叶青具有抗炎、镇痛及解热、抗肿瘤、
抗病毒、调节免疫[1]等作用, 并广泛用于多种中成药
或保健品, 如华佗风痛宝、结石康胶囊、三叶青粉末、
金丝地甲胶囊、金芪片等。三叶青中的化学成分研
究已有报道[2−6], 但以这些分离得到的成分为指标的
质量控制却未见报道。近年来, 随着分析技术的发
展, 超高效液相色谱 (UPLC) 串联三重四级杆质谱
(QqQ-MS/MS) 由于其分离速度快、灵敏度高、测定
准确性强而被广泛运用于中药及复方的分析中[7, 8],
而目前关于三叶青块根药材质量控制的研究报道也
较少[9, 10], 并且大量三叶青药理研究表明其抗肿瘤药
效物质基础为黄酮类成分[11−15]。因此, 本实验针对其
10 种黄酮类成分进行同时定量研究, 为三叶青的质
量控制提供科学依据。
材料与方法
仪器 ACQUITY UPLC H-Class 超高效液相色
谱仪 (美国 Waters 公司); Xevo TQMS 三重四级杆
质谱 (美国Waters公司); CPA225D型十万分之一分
析天平 (德国 Sartorius 公司); KQ-500E 台式超声波
清洗器 (昆山市超声仪器有限公司); FY135型中草药
粉碎机 (天津市泰斯特仪器有限公司)。
试剂 乙腈 (色谱纯, 德国Merck公司); Milli-Q
超纯水 (美国Millipore公司), 其余试剂均为分析纯。
药品 对照品儿茶素 (catechin)、原花青素 B1
(procyanidin B1)、原花青素 B2 (procyanidin B2)、芦
丁 (rutin)、异槲皮苷 (isoquercitrin)、山柰酚-3-O-
芸香糖苷 (kaempferol-3-O-rutinoside) 及紫云英苷
(astragalin) 由本实验室从三叶青中分离制备, 1H、
13C NMR 和 MS 数据与文献[16−19]比较确认; 纯度经
HPLC-DAD (面积归一法) 检测含量均大于 98.0%。内
标甘草苷 (liquiritin) 购自上海同田生物技术股份有
限公司, 槲皮苷 (quercitrin)、槲皮素 (quercetin)、山
柰酚 (kaempferol) 购于中国食品药品检定研究院。三
叶青 30 批样品分别采自或购自不同产地, 经福建中
医药大学药用植物实验室范世明高级实验师及生药
教研室黄泽豪副教授鉴定, 均为葡萄科植物三叶青
(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg) 的干燥块根,
样本存放于福建中医药大学药学院药用植物标本室。
色谱条件 Waters CORTECS C18 (2.1 mm × 100
mm, 1.6 μm); 流动相: 溶剂A (乙腈) 与溶剂 B (0.1%
甲酸水), 梯度洗脱 (0～0.5 min, 溶剂 A 8%～10%;
0.5～2.5 min, 溶剂 A 10%～15%; 2.5～4.5 min, 溶剂
A 15%～20%; 4.5～6.5 min, 溶剂 A 20%～40%; 6.5～
8.5 min, 溶剂 A 40%～60%), 流速: 0.25 mL·min−1,
柱温: 45 ℃, 进样量: 1 μL。
质谱条件 电喷雾负离子模式 , 毛细管电压 :
2.5 kV; 脱溶剂气流: N2, 流速 800 L·h−1, 脱溶剂温度
200 ℃; 锥孔气流 : N2, 流速 50 L·h−1; 离子源温
度: 150 ℃; Extractor: 3.00 V; 碰撞气体: 氩气。采用
MRM定量模式, 10种分析物及内标的质谱分析条件
参数见表 1。
Table 1 MS analysis of parameters of 10 detected compounds and liquiritin (IS)
No. Analyte Retention time/min Quantification transition (m/z) Cone voltage/V Collision energy/eV
1 Procyanidin B1 2.05 577.13→425.08 45 20
2 Catechin 2.52 289.07→245.08 40 15
3 Procyanidin B2 2.88 577.13→425.08 45 12
4 Rutin 4.80 609.14→300.02 35 35
5 Isoquercitrin 5.09 463.08→300.02 45 28
6 Kaempferol-3-O-rutinoside 5.60 593.15→285.04 35 30
7 Astragalin 5.88 447.09→285.03 35 22
8 Quercitrin 5.94 447.09→300.02 40 25
9 Quercetin 7.08 301.03→151.00 40 25
10 Kaempferol 7.68 285.03→133.00 50 32
IS Liquiritin 4.95 417.12→255.06 25 20
许 文等: UPLC-MS/MS法同时测定三叶青中 10种黄酮类成分 · 1713 ·
供试品溶液的制备 取三叶青药材粉碎, 过60目
筛得三叶青药材粉末。取三叶青 0.5 g, 精密称定, 置
具塞三角瓶中, 精密加入 80% 甲醇 25 mL, 密塞, 称
定重量, 超声处理 (功率 250 W, 频率 50 kHz) 30 min,
放冷, 再称定重量, 用 80% 甲醇补足减失重, 摇匀,
0.22 μm 滤膜滤过, 取续滤液, 稀释 5 倍, 按 1∶1
(300∶300 μL) 加入内标后测定。
对照品溶液的制备 取原花青素 B1、儿茶素、原
花青素 B2、芦丁、异槲皮苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、
紫云英苷、槲皮苷、槲皮素、山柰酚对照品适量, 精
密称定, 加入甲醇分别制备含 0.95、1.39、1.22、1.132、
1.244、1.108、0.206、1.00、0.922和 1.215 mg·mL−1
的单一对照品储备液。其他不同质量浓度的对照品溶
液由 50% 甲醇稀释储备液得到。内标液为甘草苷, 浓
度为 500 ng·mL−1。
结果
1 方法学考察
1.1 质谱测定方法 原花青素 B1、儿茶素、芦丁、
山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素的子离子质谱裂解见
图 1。三叶青样品和混合标准品依法按上述色谱及质
谱条件下分析, 10种分析物及内标均分离良好, 三叶
青的 UPLC-MS/MS总离子流色谱图见图 2。
1.2 线性和范围 取各对照品储备液, 用 50% 甲醇
稀释配制系列梯度浓度的对照品混合溶液, 测定前
按 1∶1 (300∶300 μL) 加入内标。依法测定峰面积,
以峰面积与内标峰面积的比值 (Y) 对分析物浓度 (X)
作线性回归, 绘制标准曲线, 得到回归方程和相关系
数, 并以信噪比 10 计算定量限 (LOQ), 以信噪比 3
计算检测限 (LOD), 结果见表 2。
1.3 精密度 精密吸取线性最低浓度点、低、中、
高 QC 混合对照品溶液 1 μL, 一天内连续进样 6 次,
及连续 6天测定, 根据标准曲线计算浓度, 其日内精
密度和日间精密度 RSD范围均在 1.87%～5.39%, 表
明仪器精密度良好。
1.4 稳定性 取本品按供试品制备方法制备供试品
溶液, 分别于 0、2、6、10、12和 24 h依法测定, 根据
标准曲线计算浓度, 其 RSD范围均在 1.52%～4.40%,
Figure 1 Chemical characterization of the analytes by product ion scan and fragmentation pathway of procyanidin B1
Table 2 Calibration curves, linear ranges, LOQ and LOD of 10 detected compounds
Analyte Regression equation (n = 3) Linear range/ng·mL−1 r LOQ/ng·mL−1 LOD/ng·mL−1
Procyanidin B1 Y = 2.889 X − 0.072 3 19.96 − 1 995.6 0.997 3 4.99 1.99
Catechin Y = 1.258 X − 0.028 6 20.03 − 3 004.5 0.998 7 12.01 3.00
Procyanidin B2 Y = 3.378 X − 0.066 7 19.91 − 298.65 0.998 5 3.98 0.99
Rutin Y = 2.948 X − 0.032 4 19.91 − 1 991.0 0.998 4 1.99 0.99
Isoquercitrin Y = 6.011 X − 0.063 4 19.96 − 998.26 0.999 1 0.99 0.33
Kaempferol-3-O-rutinoside Y = 2.061 X + 0.002 3 19.92 − 1 992.1 0.996 6 0.98 0.49
Astragalin Y = 4.300 X − 0.014 3 9.943 − 994.3 0.999 3 3.28 0.99
Quercitrin Y = 4.781 X − 0.004 1 10.00 − 400.00 0.999 5 2.00 1.00
Quercetin Y = 5.371 X − 0.108 7 20.00 − 400.17 0.999 6 3.40 1.20
Kaempferol Y = 12.25 X + 0.043 9 20.04 − 400.78 0.998 7 5.01 1.00
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Figure 2 UPLC-MS/MS chromatograms of reference (A), blank solution(C) and Tetrastigma hemsleyanum sample (B, D). Peak 1:
Procyanidin B1; Peak 2: Catechin; Peak 3: Procyanidin B2; Peak 4: Rutin; Peak 5: Isoquercitrin; Peak 6: Kaempferol-3-O-rutinoside;
Peak 7: Astragalin; Peak 8: Quercitrin; Peak 9: Quercetin; Peak 10: Kaempferol; IS: Liquiritin
表明样品在 24 h内稳定。
1.5 重复性 精密称取同一批三叶青样品 6份, 按供
试品制备方法制备供试品溶液, 依法测定, 计算 10
种分析物的含量, 其 RSD 范围均在 2.31%～5.70%,
表明方法重复性良好。
1.6 回收率 精密称取重复性实验同批次已知含量
的三叶青样品 6份, 约 0.25 g, 精密加入低、中、高
三个浓度的 10 种对照品, 按供试品制备方法制备供
试品溶液, 依法测定含量, 计算各个化合物回收率范
围在 95.44%～110.40%, 其 RSD 范围均在 2.37%～
许 文等: UPLC-MS/MS法同时测定三叶青中 10种黄酮类成分 · 1715 ·
8.69%, 表明方法回收率良好。
2 样品含量测定
分别精密称取不同批次的三叶青样品粉末 0.5 g,
按供试品制备方法制备供试品溶液, 依法测定峰面
积, 根据标准曲线计算其含量, 结果见表 3。所有数
据均运用 DPS14.50 数据处理软件处理: 采用系统聚
类分析方法, 以 10种分析物含量为变量, 以卡方距离
为指标, 对 30 批三叶青样品进行系统聚类 (可变类
平均法) 分析, 得到三叶青样品聚类图, 见图 3。当距
离大于 3.00时, 可以将其分为两大类。其中, 当距离
介于 2.10～3.00 时, 可将第二类样品继续细分为 2
类。当距离介于 1.50～2.50时, 可将第一类样品继续
细分为 2类。
Figure 3 Fuzzy cluster of the Tetrastigma hemsleyanum in 30
different samples
Table 3 Determination of 10 detected compounds in Tetrastigma hemsleyanum (μg·g−1). 1: Procyanidin B1; 2: Catechin; 3: Procyanidin
B2; 4: Rutin; 5: Isoquercitrin; 6: Kaempferol-3-O-rutinoside; 7: Astragalin; 8: Quercitrin; 9: Quercetin; 10: Kaempferol; IS: Liquiritin.
−: Not detected
Sample Source 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Total
S 1 Fujian, Fuding, wild 532.80 850.74 35.23 − 126.35 − 327.16 13.84 18.97 34.43 1 939.5
S 2 Fujian, Fuding, cultivated 218.58 237.63 16.94 14.33 43.99 60.93 119.54 13.20 18.14 16.85 760.12
S 3 Fujian, Zherong, purchased 107.91 445.69 19.87 111.61 43.34 94.36 16.24 13.85 50.05 17.67 920.60
S 4 Fujian, Zherong wild 231.33 434.13 22.48 139.75 74.44 265.04 54.5 37.88 42.83 31.05 1 333.4
S 5 Fujian, Pingnan, wild 565.02 761.78 32.94 17.22 15.98 − 11.69 13.28 16.20 20.59 1 454.7
S 6 Fujian, Shunchang cultivated 268.43 1 292.9 20.11 17.77 16.64 − − 13.22 13.81 − 1 642.9
S 7 Fujian, Fu’an cultivated 1 207.16 311.36 25.19 172.78 128.31 321.73 78.48 45.99 47.18 25.37 1 363.6
S 8 Fujian, Fu’an cultivated 2 342.91 698.75 27.01 19.10 12.62 33.02 35.26 − 13.34 10.95 1 193.0
S 9 Zhejiang, Taizhou cultivated 1 81.23 112.34 22.08 219.74 113.22 371.26 66.01 68.05 18.00 27.52 1 099.4
S 10 Zhejiang, Taizhou cultivated 2 46.40 482.61 23.03 17.39 29.91 12.14 18.56 120.05 13.51 16.66 780.25
S 11 Zhejiang, Jinhua, wild 380.19 25.56 29.48 253.48 100.40 409.21 61.92 22.76 40.23 16.88 1 340.1
S 12 Zhejiang, Lishui, purchased 120.64 492.32 − 78.88 15.39 137.93 10.86 − 79.11 64.29 999.42
S 13 Zhejiang, Taizhou, wild 1 262.38 212.24 20.58 227.84 122.92 397.53 67.97 30.18 38.76 17.68 1 398.0
S 14 Zhejiang, Taizhou, wild 2 49.57 93.96 16.17 25.77 19.63 18.44 11.21 − 22.21 113.37 370.33
S 15 Zhejiang, Pan’an, purchased 22.51 37.62 − 15.50 16.42 14.27 8.60 59.10 14.91 14.53 203.46
S 16 Zhejiang, Pan’an, cultivated 291.87 763.75 20.09 155.19 50.93 263.37 30.70 12.19 94.09 80.56 1 762.7
S 17 Guizhou, Kaili, wild 1 528.35 781.60 31.53 303.38 95.18 673.41 66.80 27.58 35.95 47.60 2 591.4
S 18 Guizhou, Kaili, wild 2 270.38 591.09 26.10 77.24 209.22 120.74 86.60 48.00 102.25 51.08 1 582.7
S 19 Guizhou, Bijie, wild 1 210.30 199.47 28.62 352.89 130.48 415.86 44.57 16.59 32.18 42.29 1 473.2
S 20 Guizhou, Bijie, wild 2 69.96 477.75 29.21 108.39 37.84 138.73 16.39 25.70 18.07 − 922.04
S 21 Hunan, Yuanling, wild 232.56 379.26 13.09 459.22 251.19 949.06 133.68 20.62 19.25 13.42 2 471.3
S 22 Hunan, Shuangpai, wild 291.51 1 042.8 29.86 149.81 22.37 305.91 13.88 − 122.32 86.94 2 065.4
S 23 Jiangxi, Sanqingshan wild 521.68 130.14 27.01 71.35 30.88 118.78 33.49 112.87 20.52 10.46 1 077.2
S 24 Anhui, Bozhou wild 20.23 658.65 16.43 36.38 15.68 20.88 40.76 31.00 11.56 − 851.57
S 25 Anhui, Bozhou purchased 1 250.32 54.15 19.65 287.04 139.33 557.31 45.45 112.61 28.44 12.81 1 507.1
S 26 Anhui, Bozhou purchased 2 51.67 286.21 − 56.05 11.18 94.48 10.68 67.93 12.58 − 590.79
S 27 Anhui, Bozhou purchased 3 348.64 86.95 34.06 271.33 144.86 529.23 63.21 − 62.47 35.79 1 576.5
S 28 Anhui, Bozhou purchased 4 132.60 14.84 16.29 352.76 99.03 558.53 56.64 33.15 158.69 79.27 1 501.8
S 29 Chongqing, wild 1 91.71 111.53 12.25 55.82 26.61 17.55 75.10 21.01 26.40 155.54 593.51
S 30 Chongqing, wild 2 308.09 754.36 16.07 35.79 25.43 126.48 74.33 17.14 14.64 13.60 1 385.9
Mean 235.37 427.18 23.42 141.57 72.25 260.04 58.06 40.00 40.13 41.05 1 290.3
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讨论
通过比较了三叶青的回流提取和超声提取, 不
同浓度甲醇、乙腈作为提取溶剂, 最终优选 80% 甲醇
超声提取。在此基础上, 考察了超声提取的次数、溶
剂用量及提取时间对提取的影响, 结果表明80% 甲醇
超声提取 1次, 50倍量, 提取 30 min即可。
比较了不同粒径色谱柱对三叶青 10 种黄酮类成
分的分离效果, 考察了Waters CORTECS C18 (2.1 mm ×
100 mm, 1.6 μm)、Phenomenex kintecx C18 (2.1 mm ×
100 mm, 1.7 µm)、Waters HSS T3 C18 (2.1 mm × 100
mm, 1.8 μm), 最终选择粒径 1.6 µm Waters CORTECS
C18色谱柱因其分离度和灵敏度均明显高于其他超高
效液相色谱柱, 并且将手性异构体原花青素 B1和 B2
完全基线分离。另外, 流动相系统的选择, 先后比较了
4种流动相系统: 乙腈− 0.1% 甲酸水、乙腈−水− 0.1%
醋酸铵水、甲醇− 0.1% 甲酸水、甲醇− 0.1% 醋酸铵水,
表明乙腈− 0.1% 甲酸水最佳。另外, 色谱分离上虽然
成分紫云英苷 (7) 和槲皮苷 (8) 未能基线分离, 但是
其在质谱定量通道上 447.09 → 284.03 (7) 与 447.09 →
300.02 (8) 互不干扰, 故两者均可以准确定量。
通过 Mass Tune针对待测 10种黄酮类成分质谱
参数进行优化, 考察了最佳的毛细管电压、锥孔电压、
碰撞能量, 优选最佳的 MRM模式定量离子对。化合
物儿茶素最佳定量离子对为 289.07 → 245.08, 裂解的
子离子 m/z 245 为其母离子失去一分子 CO2产生的
[M−H−CO2]− 峰, 原花青素 B1和 B2定量离子对都是
577.13 → 425.08, 其裂解的子离子 m/z 425为其母离
子中一个儿茶素单元发生 C环 1, 4位 RDA裂解产生
的碎片峰, 槲皮素 301.03 → 151.00, 其子离子 m/z 151
为其母离子 C 环 1, 4 位 RDA 裂解合 A 环的碎片峰
[1, 4A]−, 而山柰酚 m/z 133的子离子为其母离子 C环
1, 4位 RDA裂解合 B环的碎片峰 [1, 4B]−, 此外其他
苷类成分则是苷键裂解, 产生各自的苷元碎片峰。考
察子离子碰撞能量时发现原花青素 B1 和 B2 虽然互
为手性异构体, 子离子一样, 但是其产生子离子最佳
响应的碰撞能量不同, 提示即使互为手性异构体也
应分别对其质谱条件进行优化。另外, 本次实验发现
测定的几种氧苷类黄酮 (芦丁、异槲皮苷、山柰酚-
3-O-芸香糖苷、紫云英苷、槲皮苷) 在负离子模式下
产生的苷元子离子既有 [M−H−糖基]−, 也有 [M−2H−
糖基]−, 并且产生这两种子离子的响应值不完全一致,
提示对于黄酮苷类成分的定量, 其苷元的子离子选
择也需要分别进行考察。
对于 30 批三叶青含量测定的结果表明, 不同产
地三叶青中 10 种黄酮含量差异很大, 甚至有些批次
中未检测出。从收集的 30 批次的平均值来看, 三叶
青块根中含量相对较高的依次为儿茶素 (2)、原花青
素 B1 (1)、山柰酚-3-O-芸香糖苷 (6)、芦丁 (4)、异
槲皮苷 (5)、紫云英苷 (7), 而原花青素 B2 (3)、槲皮
苷 (8)、槲皮素 (9)、山柰酚 (10) 含量较低。将所有
批次进行聚类分析后发现三叶青样品总共可聚为两
大类, 其中福建、浙江收集的 7种产地栽培品中, S 7,
S 9, S 16三个产地为其中一大类, 而 S 2, S 6, S 8,
S 10产地为另一大类, 说明不同种植基地其三叶青引
种来源可能不一致。另外, 不同产地的野生三叶青样
品含量经比较发现, 10种黄酮含量也差异悬殊, 可能
不同产地具有不同生态环境, 同时三叶青可能存在
多种变种所致。
综上, 本文建立 UPLC-MS/MS 法同时测定三叶
青中 10 种黄酮成分的定量分析方法简便、快捷、准
确, 为综合评价三叶青的质量提供参考。
致谢: 福建省测试技术研究所曾文灿老师在质谱测定中
给予帮助。
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