全 文 ：［饮片炮制］
HPLC测定千金子和千金子霜中两种泻下成分的含量
李英霞1， 袁 敏1， 陈永艳2， 侯立静1， 邵 新1， 慈倩倩*
(1.山东省中医药研究院，山东 济南 250014;2. 山东省警官总医院，山东 济南 250002)
收稿日期:2009-06-19
基金项目:国家“十一五”科技支撑计划项目(2006BAI09B06-05)
作者简介:李英霞(1964 －)，女，硕士，副研究员，硕士生导师，主要从事中药资源开发及中药质量研究。Tel:(0531)82949859 E-mail:
li_yx1964@ 163. com
* 慈倩倩，山东中医药大学药学院中药专业 2008 级硕士研究生
关键词:千金子;千金子霜;续随二萜酯;千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯;HPLC;含量测定
摘要:目的:对不同地区千金子药材及其炮制品千金子霜中泻下成分续随二萜酯和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯的含量进
行测定。方法:采用高效液相色谱法，流动相为甲醇-水(68 ∶ 32)，kromasil C18柱(150 mm × 4. 6 mm，5 μm)，柱温:40 ℃，
检测波长:280 nm。结果:续随二萜酯和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯分别在 0. 200 μg ～ 1. 200 μg、0. 206 μg ～ 1. 651 μg范
围内，线性关系良好，r = 0. 999 7和 r = 0. 999 9。不同产地千金子中所含两种成分的量略有差别，续随二萜酯的质量分数
在0. 450 8% ～0. 625 1%，多数在0. 450 0%以上。千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯的质量分数在0. 692 3% ～ 0. 752 9%，多
数在0. 720 0% 以上。千金子霜中两种成分的质量分数分别在0. 156 8% ～ 0. 221 1% (多数在0. 200 0% 以下)和
0. 232 2% ～0. 283 0%(多数在0. 300 0%以下)。结论:建立了高效液相色谱法测定千金子脂肪油中两种泻下成分含量
的方法，该方法准确、可靠，可用于毒性中药千金子及其炮制品的质量控制。
中图分类号:R283 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2010)03-0440-04
Determination of purgative constituents in Semen Euphorbiae and Semen Euphor-
biae Pulveratun by HPLC
LI Ying-xia1， YUAN Min1， CHEN Yong-yan2， HOU Li-jing1， SHAO Xin1， CI Qian-qian*
(1. Shandong Academy of Chinese Medicine，Jinan 250014，China;2. Shandong Police Hospital，Jinan 250002，China)
KEY WORDS:Semen Euphorbiae;Semen Euphorbiae Pulveratun;euphorbiasteroid;lathyrol diadetate benzozte;
HPLC;determination
ABSTRACT:AIM:To determine the contents of euphorbiasteroid and lathyrol diadetate benzozte in Semen
Euphorbiae and Semen Euphorbiae Pulveratun from different habitats. METHODS:A kromasil C18 column (150
mm ×4. 6 mm，5 μm)was used with methanol-water (68 ∶ 32)as the mobile phase and UV detection was at 280
nm. RESULTS:The linear ranges of euphorbiasteroid and lathyrol diadetate benzozte were from 0. 200 μg to
1. 200 μg and 0. 206 μg to 1. 651 μg (r = 0. 999 7，r = 0. 999 9). The contents of euphorbiasteroid and lathyrol
diadetate benzozte in Semen Euphorbiae from different habitats ranged from 0. 450 8% to 0. 625 1% and 0. 692 3%
to 0. 752 9% . The contents of two kinds of compositions in Semen Euphorbiae Pulveratun ranged from 0. 156 8% to
0. 221 1% and 0. 232 2% to 0. 283 0% . CONCLUSION:The method for quantitating euphorbiasteroid and la-
thyrol diadetate benzozte in Semen Euphorbiae is accurate and reliable，and can be used to control the quality of
toxicity Semen Euphorbiae and Semen Euphorbiae Pulveratun.
千金子为大戟科植物续随子 Euphorbia lathyris
L.的干燥成熟种子，具有逐水消肿，破血散结之功
效，用于水肿痰饮、积滞胀满，二便不通，血瘀经闭等
症，外治顽癣、疣赘［1］。它是一种少用有毒中药，主
要含有大量脂肪油、香豆素类等成分，油中含有油酸
等甘油酯及多种二萜醇酯等，如千金二萜醇二乙酸
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苯甲酸酯、6，20-环氧千金二萜醇苯乙酸酯二乙酸
酯、巨大戟二萜醇 3-十六烷酸酯等［2 － 4］。据国外文
献报道，脂肪油中的 6，20-环氧千金二萜醇苯乙酸酯
二乙酸酯(即续随二萜酯，又称千金子甾醇)具有峻
泻作用，为千金子中的泻下成分［5，6］。为了缓和其
峻泻之性，千金子一般多去油制霜使用。因此，控制
千金子霜中脂肪油及其泻下成分的含量是很有必要
的。近年来，文献报道千金子用于治疗白血病、食管
癌、皮肤癌等有很好的疗效［7 － 9］，但作为有毒中药，
2005 年版《中国药典》收载的千金子及千金子霜的
质量标准并不完善，其脂肪油中泻下成分控制方法
的研究尚未见报道，临床用药的安全性难于保证。
经作者初步研究证明，千金子中千金二萜醇二乙酸
苯甲酸酯和续随二萜酯含量均较高，前者也具有一
定的提高小鼠小肠推进率的作用，后者的泻下作用
国外已见报道［5］，去油制霜后两种成分含量随脂肪
油含量的降低而明显下降，可作为千金子及千金子
霜的质量控制指标。本实验采用高效液相色谱法
(HPLC)首次测定了千金子及霜中主要泻下成分续
随二萜酯和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯的含量，为
完善千金子及其炮制品的质量标准奠定基础。
1 仪器与试药
Waters 2695 型高效液相色谱仪(美国 Waters
公司)、2996 型二极管阵列检测器;R-201 型旋转蒸
发仪(上海申胜生物技术有限公司);250 型制霜机
(杭州春江机械自动化研究所研制);SW-2 型便携
式数字指示表面温度计(浙江省慈溪市光华数字显
示仪器)。
续随二萜酯和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯对照
品购自北京显通时代医药科技发展有限公司(批号
20081106，200812228)，经 HPLC 面积归一化法测
定，纯度分别达 98%和 99. 67%。经光谱测定，结果
与文献报道［2，3］的结构测定数据基本一致。甲醇为
色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。
本实验收集了 8 个批号的千金子药材，经山东
省中医药研究院资源开发室李英霞副研究员鉴定，
均为合格药材。
千金子样品的制备:药材去除种皮后，碾成泥状
(约 40 ～ 60 目)，备用。
千金子霜的制备:取适量千金子样品，采用新研
制的压油制霜设备制备各地千金子霜。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
Kromasil C18柱(4. 6 mm ×150 mm，5 μm)，流动
相甲醇-水(68 ∶ 32)，柱温:40 ℃，检测波长:280
nm，体积流量:1 mL /min，进样量:10 μL。见图 1。
A
B
C
图 1 对照品(A)和千金子样品(B)及千金子霜样品
(C)HPLC图
A.对照品 B.千金子样品 C.千金子霜样品
1.续随二萜酯 2.千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯
2. 2 对照品溶液的制备
分别取续随二萜酯和千金二萜醇二乙酸苯甲酸
酯对照品适量，精密称定，置 50 mL 量瓶中，加甲醇
适量溶解，稀释至刻度，摇匀，配成质量浓度为0. 200
mg /mL和0. 206 mg /mL的溶液作为贮备液。分别精
密量取两种贮备液 2. 0 mL，置 5 mL量瓶中，加甲醇
适量稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，浓度分别
为 0. 080 mg /mL 和 0. 105 mg /mL。
2. 3 供试品溶液的制备
取千金子种仁(碾成泥状)约 0. 15 g，千金子霜
0. 2 g，精密称定，加甲醇 20 mL，水浴回流 2 h，放冷，
滤过，滤液水浴蒸干，加甲醇适量溶解，分别置 10
mL和 5 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，微孔
滤膜(0. 45 μm)滤过，作为供试品溶液。
2. 4 线性关系的考察
精密量取上述对照品贮备液 0. 5、1. 0、2. 0、
3. 0、3. 5、4. 0 mL，分别置 5 mL 量瓶中，加甲醇稀释
至刻度，摇匀，配成相应质量浓度的对照品溶液，进
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样 10 μL，记录峰面积。以对照品进样量(X)为横坐
标，峰面积(Y)为纵坐标进行回归分析，得回归方程
为:分 别 为 续 随 二 萜 酯:Y = 16 699 902X －
28 424. 03，r = 0. 999 7，千金二萜醇二乙酸苯甲酸
酯:Y = 1 492 670X － 33 977，r = 0. 999 9，结果表明，
续随二萜酯在0. 200 μg ～ 1. 200 μg，千金二萜醇二
乙酸苯甲酸酯在0. 206 μg ～ 1. 651 μg 范围内线性
关系良好。
2. 5 精密度试验
精密吸取质量浓度分别为0. 080 mg /mL续随二
萜酯和0. 105 mg /mL的千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯
对照品溶液 10 μL，连续进样 5 次，记录续随二萜酯
和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯峰面积平均值分别为
1 238 926 和 1 939 388，RSD 分 别 为 1. 27% 和
0. 52%，表明仪器精密度良好。
2. 6 稳定性试验
精密吸取 1 号千金子供试品溶液 10 μL，分别
于 0、1、2、4、6、8 h 进样测定，记录峰面积，结果两种
成分的峰面积平均值分别为1 037 636和1 722 477，
RSD分别为 1. 10%和 1. 02%，表明样品溶液在 8 h
内稳定。
2. 7 重复性试验
平行操作制备供试品溶液 5 份，吸取 10 μL 进
样测定，结果 5 份样品中续随二萜酯和千金二萜醇
二乙酸苯甲酸酯的平均质量分数分别为 0. 477 1%
和 0. 739 5%，RSD为 1. 10%和 1. 77%，结果表明该
方法重复性良好。
2. 8 回收率试验
取 5 份千金子样品约 75 mg，分别精密加入质
量浓度为 0. 160 0 mg /mL 续随二萜酯对照品溶液
2. 0 mL和质量浓度为 0. 200 mg /mL 的千金二萜醇
二乙酸苯甲酸酯对照品溶液 2. 5 mL，分别制备供试
品溶液，进样测定，记录峰面积。结果续随二萜酯和
千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯的平均回收率分别为
99. 48%和 98. 66%，RSD 分别为 1. 24%和 1. 23%，
表明本法回收率符合要求。
2. 9 样品测定
取不同批次的千金子及千金子霜样品适量，按
上述方法制备供试品和对照品溶液，同时进行测定，
测定结果见表 1。
表 1 不同地区千金子及千金子霜中续随二萜酯(Ⅰ)和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯(Ⅱ)的量
编号
样品
名称
产地
收集
时间
(Ⅰ)平均质量分数
x /%(n = 3)
RSD /%
(Ⅰ)下降
率 /%
(Ⅱ)平均质量分数
x /%(n = 3)
RSD /%
(Ⅱ)下降
率 /%
1 千金子 1 河南南阳 2007-11-12 0. 476 7 1. 22 0. 737 9 1. 30
2 千金子霜 1 河南南阳 0. 161 9 1. 03 66. 04 0. 232 2 1. 10 68. 53
3 千金子 2 河南南阳 2008-09-21 0. 450 8 2. 10 0. 721 7 2. 00
4 千金子霜 2 河南南阳 0. 156 8 1. 83 65. 22 0. 250 8 1. 79 65. 25
5 千金子 3 河南南阳 2009-03-04 0. 453 6 2. 20 0. 752 9 2. 12
6 千金子霜 3 － 1 河南南阳 0. 165 0 1. 46 63. 62 0. 274 1 1. 50 63. 59
7 千金子霜 3 － 2 河南南阳 0. 164 6 2. 58 63. 71 0. 276 8 2. 49 63. 24
8 千金子霜 3 － 3 河南南阳 0. 174 5 1. 19 61. 53 0. 277 1 1. 20 63. 20
9 千金子 4 河南社旗 2007-10-31 0. 625 1 2. 10 0. 727 0 2. 12
10 千金子霜 4 河南 0. 195 7 1. 85 68. 69 0. 280 9 1. 88 61. 36
11 千金子 5 云南 2008-03-18 0. 519 1 1. 39 0. 692 3 1. 36
12 千金子霜 5 － 1 云南 0. 179 5 2. 22 65. 42 0. 260 8 2. 13 62. 33
13 千金子霜 5 － 2 云南 0. 194 2 2. 34 62. 59 0. 274 6 2. 26 60. 34
14 千金子 6 新疆 2007-11-13 0. 509 4 1. 95 0. 744 2 1. 89
15 千金子霜 6 新疆 0. 178 9 1. 87 64. 88 0. 276 4 1. 90 62. 86
16 千金子 7 广西 2008-09-20 0. 469 6 2. 11 0. 698 3 2. 00
17 千金子霜 7 － 1 广西 0. 178 4 2. 32 62. 01 0. 272 0 2. 18 61. 05
18 千金子霜 7 － 2 广西 0. 165 6 2. 22 64. 74 0. 267 7 2. 15 61. 66
19 千金子 8 建联 2007-03-29 0. 585 0 1. 73 0. 724 1 1. 99
20 千金子霜 8 建联 0. 221 1 2. 07 62. 21 0. 283 0 1. 97 60. 92
注:下降率(%)=(千金子中成分质量分数 －千金子霜中成分质量分数)/千金子成分质量分数 × 100%
各产地千金子药材中所含续随二萜酯和千金二
萜醇二乙酸苯甲酸酯的量均较高，前者质量分数在
0. 450 8% ～0. 625 1%，多数在 0. 450 0%以上;后者
质量分数在 0. 692 3% ～ 0. 752 9%，多数在
0. 720 0%以上。去油制霜后两种成分的含量均明
显下降，前者含量在 0. 156 8% ～ 0. 221 1%，多数在
0. 200 0%以下，比制霜前含量平均降低 64. 22%。
后者含量在 0. 232 2% ～ 0. 283 0%，多数在
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0. 300 0%以下，比制霜前含量平均降低62. 86%。
3 讨论
3. 1 续随二萜酯和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯易
溶于甲醇、乙醇、氯仿，微溶于石油醚、乙酸乙酯、苯
等溶媒。本实验以甲醇为提取溶媒，对比了水浴回
流和超声提取的效果，结果发现水浴回流法提取率
明显高于超声法，故最终选定水浴回流提取。
3. 2 在流动相选择过程中，曾比较过甲醇-水(75 ∶
25)、(70 ∶ 30)及乙腈-水(65 ∶ 35)不同比例，结果
千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯的色谱峰分离度均良
好，但续随二萜酯色谱峰与其相邻小峰由于极性相
近，分离度总是不够理想，调整流动相比例甲醇-水
(68 ∶ 32)，柱温调为40 ℃后，续随二萜酯色谱峰的
分离度(R为 1. 52)达到了测定要求。
3. 3 各产地千金子中所含续随二萜酯和千金二萜
醇二乙酸苯甲酸酯的量均较高，而去油制霜后，其两
种成分的量也随之明显下降，平均下降率分别为
64. 22%和 62. 86%，因此，二者含量可作为千金子
及千金子霜的质量控制指标。
3. 4 本实验采用 HPLC 法首次测定了千金子中两
种泻下成分的量，方法快速、简便、可靠，为完善千金
子及其炮制品的质量标准、保证其临床用药安全提
供了科学依据。
参考文献:
［1］ 中国药典［S］.一部. 2005:24.
［2］ Giovanni A，Gian Cesare T，Giancarlo C，et al. An Expeditious
Procedure for the Isolation of Ingenol from the Seeds of Euphorbia
lathyris［J］. J Nat Prod，1999，62:76-79.
［3］ Adolf W，Hecker E.“Euphorbiasteroid”(epoxylathyrol)，A New
tricyclic diterpene from Euphorbia lathyris L.［J］. Tetrahedron
Letters，1970，(26):2241-2244.
［4］ 巢志茂译. 续随子的抗肿瘤成分［J］. 国外医学(中医中药分
册)，1990，12(2):60.
［5］ Jaretzky R，Kohler W. Euphorbia lathyris L. as a drug Pharmaco-
logical tests，especially of the seed oil［J］. Arch Pharm，1943，
281:256-264.
［6］ 国家医药管理局中草药情报中心站编. 植物药有效成分手册
［M］.北京:人民卫生出版社，1986:447-448.
［7］ 黄晓桃，黄光英，薛存宽，等. 千金子甲醇提取物抗肿瘤作用的
实验研究［J］. 肿瘤防治研究，2004，3(9):556-558.
［8］ 杜贵友，方文贤主编. 有毒中药现代研究与合理应用［M］. 北
京:人民卫生出版社，2003:282-286.
［9］ 高渌纹主编. 实用有毒中药临床手册［M］. 北京:学苑出版
社，1993:237-240.
黄柏炮制后化学成分转化研究
祁东利1，2， 贾天柱1，2* ， 廉 莲3
(1.辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600;2. 辽宁省中药炮制工程技术研究中心，辽宁 大连 116600;
3.辽宁科技学院，辽宁 本溪 117022)
收稿日期:2009-07-16
基金项目:“十一五”国家科技支撑计划课题(2006BAI09B06)
作者简介:祁东利(1983 －)，男，在读硕士生，从事中药炮制方向研究。Tel:13654927239 E-mail:kwk521@ 126. com
* 通讯作者:贾天柱(1951 －)，男，教授，博士生导师。Tel:(0411)87586499 E-mail:jiatz@ lnutcm. edu. cn
关键词:黄柏;炮制;盐酸小檗碱;小檗红碱;HPLC
摘要:目的:分析黄柏炮制后盐酸小檗碱转化成小檗红碱的情况。方法:采用柱色谱法分离得到小檗红碱，对黄柏不同炮
制品中盐酸小檗碱和小檗红碱的含量进行比较。结果:随着炮制温度的升高、时间的延长，制黄柏中部分盐酸小檗碱转
化为小檗红碱。温度过高或时间过长时小檗红碱含量降低。结论:黄柏炮制过程控制在 40 min，温度在 180 °C时，小檗
红碱含量最高。
中图分类号:R283 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2010)03-0443-05
Change of constituents in Cortex Phellodendri after processing
QI Dong-li1，2， JIA Tian-zhu1，2* ， LIAN Lian3
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