全 文 ：RP-HPLC法测定牛大力药材中高丽槐素的含量＊
王春华 1, 2 ,王勇 4 ,王英 2, 3 ,叶文才1, 2, 3＊＊
(1.中国药科大学 天然药物化学教研室 , 南京 210009;2.暨南大学 中药及天然药物研究所 ,广州 510632;
3.暨南大学 中药药效物质基础及创新药物研究广东省重点实验室 ,广州 510632;4.江苏省食品药品检验所 , 南京 210008)
摘要　目的:建立牛大力药材中高丽槐素的 RP-HPLC含量测定方法 。方法:采用 Cosmosil5 C18 -ms-Ⅱ色谱柱(4.6
mm×250 mm, 5 μm), 柱温 30 ℃;流动相为乙腈 -0.1%醋酸水溶液(43∶57), 流速 1.0 mL· min-1;检测波长为 312
nm;进样体积为 20μL。结果:高丽槐素进样量与峰面积呈现良好的线性关系(r=0.9999), 线性范围为 0.13 ～ 2.0 μg;
平均加样回收率(n=6)为 99.3%, RSD=1.5%。结论:该方法准确 、快速 、简便 , 重复性好 , 可用于牛大力药材的质量
控制。
关键词:牛大力;高丽槐素;反相高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2010)09-1735-03
RP-HPLCdeterminationofmaackiainintheroots
ofMiletiaspeciosaChamp.＊
WANGChun-hua1, 2 , WANGYong4 , WANGYing2, 3 , YEWen-cai1, 2, 3＊＊
(1.DepartmentofPhytochemistry, ChinaPharmaceuticalUniversity, Nanjing210009, China;
2.InstituteofTraditionalChineseMedicine＆NaturalProducts, JinanUniversity, Guangzhou510632, China;
3.GuangdongProvinceKeyLaboratoryofPharmacodynamicConstituentsofTCM＆NewDrugResearch, JinanUniversity,
Guangzhou510632, China;4.JiangsuInstituteforFood＆DrugControl, Nanjing210008, China)
Abstract　Objective:ToestablishanRP-HPLCmethodtodeterminethecontentofmaackiainintherootsofMil-
letiaspeciosaChamp..Methods:ACosmosil5C18 -ms-Ⅱ(4.6 mm×250mm, 5 μm)columnwasadopted, and
themobilephaseconsistedofacetonitrileand0.1% aceticacidsolution(43∶57)ataflowrateof1.0mL·min-1.
Detectionwasat312nmwithinjectionvolumeof20μL.Results:Thelinearrangewas0.13-2.0μg, r=0.9999,
andtheaveragerecovery(n=6)was99.3% withRSDof1.5%.Conclusion:Thismethodisaccurate, quick, sim-
pleandreproducible, whichcanbeusedforthequalitycontroloftherootsofMiletiaspeciosa.
Keywords:MiletiaspeciosaChamp.;maackiain;RP-HPLC;quantitativedetermination
牛大力为豆科崖豆藤属植物美丽崖豆藤 Mile-
tiaspeciosaChamp.的根 [ 1] ,又名猪脚笠 、山莲藕 、大
力薯等 ,具补虚润肺 、强筋活络之功效 ,可用于治疗
腰肌劳损 、风湿性关节炎 、肺虚咳嗽等病症 ,在广东
还广泛用作煲汤原料 ,可补腰肾 、强筋骨 ,为岭南地
区著名的药食两用植物。本课题组前期曾对牛大力
药材的化学成分进行了系统研究 ,从中分离鉴定了
一系列黄酮及木脂素类成分 [ 2] ,其中黄酮类化合物
高丽槐素为其主要的化学成分 ,据文献报道 ,该成分
具有抗菌 、抗癌及抗寄生虫等作用[ 3 ～ 5] ;陈超等[ 6]和
黄韵诗[ 7]以高丽槐素为指标成分 ,分别建立了金雀
根和山豆根的含量测定方法 。然而 ,迄今为止 ,作为
岭南地区常用道地药材 ,牛大力的含量测定方法还
未见报道 ,故市售牛大力药材的内在质量难以评定。
本文首次以牛大力的主要成分高丽槐素作为指标性
成分 ,采用 Cosmosil5C18 -ms-Ⅱ色谱柱 ,建立了牛
大力药材中高丽槐素的含量测定方法 ,为牛大力药
材的质量控制提供科学依据 。
1　仪器与试药
Agilent-1200高效液相色谱系统 (G1311A
—1735—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(9)
＊
＊＊
广东省自然科学基金团队项目(No.8351063201000003);澳门特别行政区科学技术发展基金(013 /2008/A1)
通讯作者　Tel:(020)85220916;E-mail:chywc@yahoo.com.cn
DOI :10.16155/j.0254-1793.2010.09.011
泵 、G1316A紫外检测器 、Agilent色谱工作站 );
KQ3200超声波清洗器(昆山超声波仪器有限公
司);高丽槐素对照品为自制 ,经 ESI-MS、UV、IR
和 NMR等光谱分析方法鉴定为高丽槐素 [ 2] ,经
DAD检测器检测 ,峰面积归一化法计算其纯度 >
98%;色谱纯乙腈为 Dima公司产品 ,色谱纯甲醇
为山东禹王实业有限公司化工分公司产品 , 其他
试剂均为分析纯 。
牛大力药材 10批均购自广州清平中药材市场 ,
经暨南大学药学院周光雄教授鉴定为豆科植物美丽
崖豆藤 M.speciosaChamp.的根 。
2　方法与结果
2.1　溶液的制备
2.1.1　对照品储备液 精密称取高丽槐素对照品
10.22mg,置 10mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻
度 ,摇匀 ,即得。
2.1.2　供试品溶液 取样品粉末 (过 60目筛 )
10.0g,精密称定 ,置 250 mL具塞锥形瓶中 ,精密加
入甲醇 200 mL,称定重量 ,在 50 ℃条件下 , 超声
(250W, 40 kHz)提取 80 min,放冷至室温 ,称重 ,以
甲醇补足减失的重量 ,滤过 ,精密吸取续滤液 100
mL,浓缩至干 ,残渣用甲醇溶解并转移至 10 mL量
瓶中 ,以甲醇定容至刻度 ,摇匀 ,过 0.45 μm微孔滤
膜 ,取续滤液 ,即得。
2.2　色谱条件与系统适用性试验 采用 Cosmosil
5C18 -ms-Ⅱ(4.6 mm×250 mm, 5 μm)色谱柱 ,柱
温 30 ℃;流动相为乙腈 -0.1%醋酸水溶液
(43∶57),流速 1.0mL·min-1;检测波长为 312nm;
进样量为20 μL。在以上色谱条件下 ,高丽槐素对照
品和牛大力样品色谱图见图 1。高丽槐素峰与相邻
峰的分离度为 1.7,理论塔板数按高丽槐素计不小
于 3000。
图 1　对照品(A)和牛大力样品(B)的 HPLC色谱图
Fig1　HPLCchromatogramsofreferencesubstance(A)andtherootsof
Milletiaspeciosa(B)
1.高丽槐素(maackiain)
2.3　线性关系考察 分别精密吸取 “ 2.1.1”项下
对照品储备液适量 , 用甲醇分别稀释为 102.20,
51.10, 25.55, 12.78, 6.39 μg· mL-1的系列对照品
溶液 ,摇匀 。精密吸取上述对照品溶液各 20 μL注
入 HPLC色谱仪。以峰面积 Y为纵坐标 ,对照品的
进样量 X(μg)为横坐标 ,用最小二乘法做线性回
归 ,得回归方程为:
Y=1.229×103X+9.079 r=0.9999
结果表明 ,高丽槐素进样量在 0.13 ～ 2.0 μg的范围
内具有良好的线性关系 。
2.4　精密度试验 将 “ 2.1.1”项下对照品储备液
用甲醇稀释成 20.44μg· mL-1的对照品溶液 ,连续
进样 6次 ,记录高丽槐素的峰面积 ,计算 RSD(n=
6)为 0.4%。说明精密度良好 。
2.5　稳定性试验 取同一份供试品溶液 ,分别于配
制后 0 , 2, 4, 8, 12 h进样 ,记录高丽槐素的峰面积 ,
计算 RSD(n=5)为 0.3%。说明供试品溶液在 12 h
内基本稳定。
2.6　重复性试验 取牛大力药材 1批 (批号
0903261),按 “2.1.2”项下方法操作 ,制得 6份供试
品溶液 ,外标法计算样品中高丽槐素的含量平均值
(n=6)为 0.0043%, RSD为 1.8%。说明该方法的
重复性良好。
2.7　加样回收试验 精密称取已知含量的样品
(批号 0903261)粉末 5.0 g共 6份 ,分别精密加入
222.00μg·mL-1对照品溶液 1.0 mL,按 “2.1.2”项
下方法制得供试溶液 ,精密吸取 20 μL,注入 HPLC
色谱仪 ,按 “2.2”项下色谱条件进行分析测定 ,计算
回收率。结果平均回收率(n=6)为 99.3%, RSD为
1.5%,说明加样回收率良好。
2.8　样品的测定 在广州清平中药材市场收集 10
批牛大力药材 ,按 “2.1.2”项下方法 ,每个样品平行
制备 3份供试品溶液 ,按 “ 2.2”项色谱条件进行测
定 ,以外标法计算各批次牛大力药材中高丽槐素的
含量 ,结果见表 1。
3　讨论
3.1　提取方法的选择 以甲醇为溶剂 ,分别考
察了超声提取和加热回流提取 2种提取方法 ,
结果发现超声提取与回流提取效率相当 ,考虑
实验室操作方便 , 故选择超声提取作为提取方
法 。
3.2　提取时间的选择 精密称取同一批 (批号
0903261)样品 3份 ,各 10.0 g,精密称定 ,分别超声
6 0, 80, 100 min,结果表明超声处理80 min后 ,高丽
—1736— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(9)
表 1　不同批次牛大力药材中高丽槐素的含量(n=3)
Tab1 Contentsofmaackiainindiferentbatches
ofrootsofMilletiaspeciosa
批号(LotNo.) 含量(content)/% RSD/%
0705041 0.0066 1.6
0705042 0.0075 0.9
0705043 0.0029 1.9
0709061 0.0042 1.5
0811121 0.0040 1.3
0811122 0.0074 1.6
0903261 0.0044 1.7
0906111 0.0032 1.2
0906112 0.0031 1.5
0906113 0.0056 1.8
槐素的含量基本不再增加 ,故采用 80 min作为提取
时间。
3.3　提取溶剂的选择 精密称取同一批 (批号
0903261)样品 3份 ,分别采用 50%甲醇 -水 、75%甲
醇 -水 、甲醇超声提取 ,结果表明甲醇提取率最高。
3.4　检测波长的选择 紫外光谱显示高丽槐素在
208nm和 312 nm处出现最大吸收峰 ,故选择特征
吸收波长 312 nm作为检测波长。
3.5　流动相的选择 对流动相的系统组成进行了
比较系统的研究 , 分别试用了甲醇 -水 , 甲醇 -
0.1%醋酸水溶液 ,乙腈 -水 ,乙腈 -0.1%醋酸水溶
液系统 ,根据分离情况 ,认为乙腈 -0.1%醋酸水溶
液(43∶57)系统较为适宜 。
3.6　10批药材含量测定 本文采用 RP-HPLC方
法测定了不同时间购自广州清平中药材市场的 10
个批次的牛大力药材中高丽槐素的含量 ,其药材的
HPLC色谱图基本一致 , 该成分的含量范围为
0.0029% ～ 0.0075%,说明市售牛大力药材中高丽
槐素含量具有一定的差异性 ,该 10批药材的含量测
定为牛大力质量标准的建立提供了研究基础 。
3.7　小结 牛大力为岭南地区著名的药食两用植
物 ,但目前暂无该药材的质量控制标准 ,本文首次建
立了以高丽槐素为指标成分的牛大力药材的含量测
定方法 ,该方法简便 ,重复性好 ,可用于牛大力药材
的质量控制。
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(本文于 2009年 10月 12日收到)
—1737—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(9)