全 文 ：世界科学技术—中医药现代化★中药研究
〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica〕
收稿日期：2012-08-28
修回日期：2013-04-19
＊ 广西壮族自治区中医药管理局 2011年度中医药科技专项（GZKZ1113）：牛大力药材的质量分析研究，负责人：陈勇；广西自然科学基金创新
研究团队项目（2011GXNSFF018006）：中药新药基础研究，负责人：朱华。
＊＊ 通讯作者：陈勇，教授，硕士生导师，主要研究方向：中药及其制剂质量分析。
HPLC测定广西牛大力药材中
芒柄花素和高丽槐素的含量＊
□陈 勇＊＊ 谢 臻 巫繁菁 韦玉燕 卢森华 曾海生
（广西中医药大学药学院 南宁 530001）
摘 要：目的：建立牛大力药材中芒柄花素和高丽槐素的含量测定方法。方法：采用 HPLC 测定
药材中芒柄花素和高丽槐素含量，色谱柱 C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相乙腈-0.1%冰醋酸溶
液（38 ∶62），检测波长 248，310 nm，流速 1.0 mL·min-1，柱温 35℃。结果：芒柄花素进样量在 0.002
3~0.060 0 μg 与峰面积值呈现良好的线性关系（r=0.999 9），平均回收率 100.0%，RSD 为 2.0%（n=
6）；高丽槐素进样量在 0.039 1~1.015 6 μg 与峰面积值呈现良好的线性关系（r=0.999 9），平均回
收率为 100.6%，RSD 为 0.7%（n=6）。结论：该方法可用于牛大力药材中芒柄花素和高丽槐素的含
量测定。
关键词：牛大力 芒柄花素 高丽槐素 HPLC
doi: 10.11842/wst.2013.02.019 中图分类号：R284 文献标识码：A
牛大力为豆科崖豆藤属植物美丽崖豆藤的根 [1]，
俗称山莲藕、血藤、九龙串珠、牛古大力、大力薯[2]。性
平味甘，具有补虚润肺、强筋活络的功效，临床证明
其对腰肌劳损、风湿性关节炎、肺结核、慢性支气管
炎等有一定疗效 [3]。在广西广泛用作煲汤原料，可补
腰肾、强筋骨，为岭南地区著名的药食两用植物。牛
大力药材中的主要成分为芒柄花素和高丽槐素 [4,5]，
本文以芒柄花素和高丽槐素作为指标性成分，建立
了测定牛大力药材中芒柄花素和高丽槐素含量的
方法，且该方法简便，分离效果好，专属性强，可以
作为牛大力质量控制的定量方法。
一、仪器与试药
1. 仪 器
Agilent1100 高效液相色谱议（美国安捷伦公
司），BP211D 型电子分析天平（德国赛多利斯），Di－
amonsil-2 C18 色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm，迪马
公司），Millpore simplicity-185 型超纯水器（美国密
理博公司），LG16-WA 型台式高速离心机（北京京
立离心机有限公司），KQ 5200B 型超声波清洗器
（昆山市超声仪器有限公司）。
2. 试 药
8 批牛大力药材分别采集自广西防城、玉林、靖
西、南宁，经广西中医学院药学院刘寿养教授鉴定
260
2013 第十五卷 第二期 ★Vol.15 No.2
〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica〕
为豆科植物美丽崖豆藤 Millettia speciosa Champ.的
根。芒柄花素对照品（百灵威科技有限公司，供含量
测定用，批号：175564，纯度 98%），高丽槐素（贝斯
特试剂有限责任公司，供含量测定用，批号：A0434，
纯度 98%）；液相用水超纯水，乙腈（Fisher，色谱
纯），冰乙酸（国药集团化学试剂有限公司，色谱
纯），其他试剂均为分析纯。
二、方法与结果
1. 色谱条件与系统适用性
Diamonsil -2 C18 色谱柱 （4.6 mm ×250 mm，5
μm），流动相为乙腈-0.1%冰醋酸水溶液（38 ∶62），
流速为 1.0 mL·min -1，检测波长 0 ~18 min（248
nm），18~25 min（310 nm），柱温 35℃，进样量 20
μL。理论塔板数按芒柄花素计不小于 8 000，按高丽
槐素计不小于 7 000。
2. 对照品储备液的制备
精密称取芒柄花素对照品 15.4 mg，置 10 mL
量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密吸取上述
对照品溶液 1 mL 稀释至
100 mL 量瓶中，摇匀，即
得。精密称取高丽槐素对
照品 2.79 mg 置 25 mL 量
瓶中，加甲醇溶解并稀释
至刻度，摇匀，即得。
3. 供试品溶液的制备
取样品粉末（过 40 目
筛）5 g，精密称定，置 250
mL 锥形瓶中，精密加入
50%乙醇 40 mL，称定重
量，超声提取 75 min，放冷
至室温，以 50%乙醇补足
减失的重量，滤过，取续滤
液 1 mL 于微型离心管中，
10 000 rpm 离心 10 min，
取上清液备用，即得。
4. 测定方法
分别精密吸取上述对
照品溶液和供试品溶液
20 μL，在上述色谱条件
下，供试品中芒柄花素及
高丽槐素色谱峰与对照品
色谱峰保留时间一致，并与其他共存成分分离度大
于 1.5。色谱图见图 1，2。
5. 线性关系考察
分别精密吸取对照品储备液适量置 2 mL 量
瓶，制成浓度为 2.31 mg·L-1芒柄花素对照品溶液
和 39.6 mg·L-1高丽槐素对照品溶液。精密吸取上
述对照品溶液 1，4，8，13，19，26 μL 注入 HPLC 色
谱仪。以峰面积 Y 为纵坐标，对照品的进样量 X
（μg）为横坐标，绘制标准曲线，并求出芒柄花素和
高丽槐素的回归方程分别为 Y=1.146×104X+1.000
（r=0.999 9）和 Y＝1.310×103X+0.931（r＝0.999 9）。
结果表明，芒柄花素和高丽槐素的进样量分别在
0.002 3~0.060 0 和 0.039 1~1.015 6 μg 之间与峰
面积值呈现良好的线性关系。
6. 精密度试验
取对照品溶液，连续进样 6 次，分别测定芒柄
花素和高丽槐素的峰面积。芒柄花素平均峰面积为
661.6，RSD 为 0.5%（n=6），高丽槐素平均峰面积为
4 004.6，RSD 为 0.5%（n=6），表明仪器精密度良好。
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 min
2
1
mAU
80
60
40
20
0
图 1 对照品 HPLC 色谱图
注：1.芒柄花素，2.高丽槐素。
2.5
mAU
60
50
40
30
0
20
10
5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 min
1 2
图 2 供试品 HPLC 色谱图
注：1.芒柄花素；2.高丽槐素。
261
世界科学技术—中医药现代化★中药研究
〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica〕
7. 稳定性试验
取同一份供试品溶液（批号：20101203），分别于
配置后 0，2，4，6，8，10，14，18 h进样，测定芒柄花素
和高丽槐素的峰面积，计算相对标准偏差。在 18 h
内芒柄花素平均含量为 0.010 4 mg·g -1，RSD 为
1.01%；高丽槐素的平均含量为 0.345 6 mg·g -1，
RSD 为 0.39%。结果表明供试品在 18 h 内稳定。
8. 重复性试验
取同一批次药材（批号：20111203），共 6 份，按
供试品溶液制备方法制备，进样 20 μL，测其峰面
积，芒柄花素平均含量为 0.010 0 mg·g -1，RSD 为
1.88%（n=6），高丽槐素平均含量为 0.346 4 mg·g-1，
RSD 为 2.0%（n=6），说明该方法重复性良好。
9. 加样回收试验
精密称取已知含量的样品（批号：20101203）粉
末 2.5 g，共 6 份，分别精密加入芒柄花素对照品溶
液（浓度为 0.030 mg·L-1）和高丽槐素对照品溶液
（浓度为 0.884 mg·L-1）各 1 mL，按供试品溶液制备
方法制备，进样 20 μL，注入 HPLC 色谱仪，测其峰
面积，计算回收率。芒柄花素平均回收率为
100.0%，RSD 为 2.00%（n=6），高丽槐素平均回收率
为 100.6%，RSD 为 0.70%（n=6）。结果见表 1，2。
10. 样品的测定
取 8 批样品，按供试品方法制备供试品溶液，
分别测定含量，结果见表 3。
三、讨 论
1. 提取方法的选择
以甲醇为溶剂，分别考察了超声提取和加热回
流提取 2 种提取方法，结果发现超声提取与回流提
取效率相当，考虑实验室操作方便，故选择超声提
取法。
2. 提取溶剂的选择
取同一批（批号：20101203） 样品，分别采用
30%，50%，70%，90%，100%的甲醇和乙醇超声提
取，结果表明 50%乙醇提取率最高。
3. 提取时间的选择
取同一批（批号：20101203）样品，分别超声处理
30，45，60，75，90 min，结果表明超声处理 75 min
后，芒柄花素和高丽槐素的含量基本不再增加，故
采用 75 min 作为最佳提取时间。
4. 检测波长的选择
紫外光谱显示芒柄花素在 201，248 nm 处出现
最大吸收峰，故选择 248 nm 为检测波长。高丽槐素
表 1 芒柄花素加样回收结果
No. 原有量/mg 加入量/mg 实测总量/mg 回收率/% 平均回收率/% RSD/%
1 0.030 3 0.030 0 0.059 6 97.7
100.1 2.00
2 0.030 3 0.030 0 0.061 0 102.3
3 0.030 3 0.030 0 0.061 5 104.0
4 0.030 2 0.030 0 0.060 5 100.1
5 0.030 2 0.030 0 0.060 0 99.0
6 0.030 2 0.030 0 0.059 5 97.3
表 2 高丽槐素加样回收结果
No. 原有量/mg 加入量/mg 实测总量/mg 回收率/% 平均回收率/% RSD/%
1 0.857 2 0.884 0 1.743 2 100.7
100.6 0.70
2 0.857 2 0.884 0 1.741 6 100.0
3 0.857 2 0.884 0 1.737 7 99.6
4 0.857 0 0.884 0 1.747 7 100.7
5 0.856 9 0.884 0 1.753 5 101.4
6 0.857 1 0.884 0 1.754 6 101.5
262
2013 第十五卷 第二期 ★Vol.15 No.2
〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica〕
在 208，310 nm 处出现最大吸收峰，选择 310 nm 作
为检测波长。
5. 流动相的选择
对流动相的系统组成进行了比较研究，分别考
察了乙腈-0.1%醋酸水溶液、乙腈-0.2%醋酸水溶
液、乙腈-0.1%磷酸水溶液、乙腈-0.2%磷酸水溶液
系统，分离情况区别不大，本研究认为乙腈-0.1%醋
酸水溶液（38：62）系统较为适宜。
6. 药材含量测定
测定了不同购买时间和不同地点的 8 个批次
的牛大力药材中芒柄花素和高丽槐素的含量，其药
材的 HPLC 色谱图基本一致，但药材中芒柄花素和
高丽槐素含量具有一定差异性。综上，该方法简便，
分离效果好，专属性强，为牛大力质量标准的建立
提供了实验依据。
参考文献
1 广西壮族自治区卫生厅 .广西中药材标准 (1990 年版 ).南宁 : 广西
科学技术出版社 , 1992.
2 广东中药志编辑委员会 .广东中药志.广州 :广东科学技术出版社 ,
1994.
3 全国中草药汇编编写组 .全国中草药汇编·上册 (3 版 ).北京 :人民
卫生出版社 ,1986 ∶200.
4 宗鑫凯 , 赖富丽 , 王祝年 , 等 . 牛大力化学成分研究 . 中药材 ,
2009,32(4) ∶520.
5 王春华 ,王英 ,王国才 ,等 .牛大力的化学成分研究 .中草药 ,2008,
39(7) ∶972~975.
表 3 样品含量测定结果
No. 样品批号和产地 芒柄花素含量/mg·g-1
高丽槐素含量
/mg·g-1
1 20101201 防城 0.001 0 0.131 6
2 20101203 防城 0.012 1 0.342 8
3 20120101 防城 0.001 4 0.032 9
4 20120102 防城 0.001 9 0.049 3
5 20110301 南宁 0.004 7 0.058 7
6 20110401 南宁 0.007 3 0.026 0
7 20110601 玉林 0.002 2 0.170 1
8 20110602 靖西 0.022 2 0.071 4
Determination of Maackiain and Formononetin in Root of Millettia Speciosa by HPLC
Chen Yong, Xie Zhen, Wu Fanjing, Wei Yuyan, Lu Senhua, Zeng Haisheng
(Faculty of Pharmacy, Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530001, China)
Abstract: This study was aimed to establish a HPLC method for the determination of Maackiain and formononetin
in root of Millettia speciosa Champ. Diamonsil C18(2) column was used as a chromatographic column. The mobile
phase was acetonitrile -0.1% acetic acid solution (38 ∶62). The flow rate was 1.0 mL·min -1 and the detection
wavelengths were set at 248 and 310 nm. The column temperature was maintained at 35°C with injection volume
of 20 μL. The calibration curve of formononetin was in good linearity over the range of 0.002 3-0.060 0 μg (r
= 0.999 9). The average recovery was 100.0% with RSD of 2.00% (n = 6). And the calibration curve of
Maackiain was in good linearity over the range of 0.039 1-1.015 6 μg (r = 0.999 9). The average recovery was
100.6% with RSD of 0.70% (n = 6). It was concluded that this method is suitable for the determination of
Maackiain and formononetin in the root of M. speciosa.
Keywords: Millettia speciosa Champ., maackiain, formononetin, HPLC
（责任编辑：李沙沙 张志华，责任译审：王 晶）
263