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高效液相色谱法测定不同产地茅苍术中β-桉叶醇的含量



全 文 :2014 年 2 月第 16 卷第 1 期
February 2014,Vol. 16,No. 1
湖北中医药大学学报
Journal of Hubei University of Chinese Medicine
基金项目:国家自然科学基金项目(面上项目,重点项目,重大项目)。
作者简介:解小霞(1988 -),女,湖北中医药大学药学院硕士研究生,研究方向:中药的品种、质量及资源开发。
通讯作者:刘合刚(1954 -),男,湖北中医药大学药学院教授,硕士生导师,研究方向:中药资源的开发、利用和保护,E - mail:liuhegang0626@
126. com。
【药学研究】
高效液相色谱法测定不同产地茅苍术中 β -桉叶醇的含量
解小霞,陈佳,刘合刚
(湖北中医药大学药学院,湖北 武汉 430065)
摘要:目的 比较不同产地茅苍术中 β -桉叶醇的含量。方法 采用高效液相色谱仪 DIONEX P680 ,流动相为乙
腈 -水( 58∶ 42 ) ,流速 1mL /min,检测波长 203 nm,柱温 30 ℃,用外标法测定不同产地的茅苍术 β -桉叶醇的含量。
结果 β -桉叶醇的进样量在 0. 02008 - 1. 04mg范围内,峰面积值与进样量有良好的线性关系。结论 该种方法稳定
可靠,重现性好。13 个不同产地的茅苍术药材 β -桉叶醇的含量差异较大。
关键词:茅苍术;高效液相色谱; β -桉叶醇
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A doi: 10. 3969 / j. issn. 1008 - 987x. 2014. 01. 14
Determination of Contents of β - eudesmol in Atractylodes Lancea
from Different Habitats by HPLC
XIE Xiaoxia ,CHEN Jia,LIU Hegang
(College of Pharmacy of Hubei University of Chinese Medicine,Wuhan 430065)
Abstracts:Objective To determine the contents of β - eudesmol in Atractylodes lancea from different habitats by HPLC. Methods
The analysis was carried on Agllent C18 column (4. 6mm × 250mm,5μm). The mobile phase was consisted of acetonitrile - water(58∶ 42)
with the follow rate at 1. 0 mL /min and the UV detection wave - length was at 203nm. The column temperature was 30℃ . Result The β -
eudesmol was in good linearity over the range of 0. 0201 - 1. 0400mg. Conclution The method is simple,sensitive,quick ,reproducible .
And found that the contents of β - eudesmol in Atractylodes lancea from 13 different habitats have grate difference.
Key words:Atractylodes lancea;HPLC;β - eudesmol
茅苍术为菊科苍术属植物茅苍术 Atractylodes lancea
(Thunb.)DC.的干燥根茎,始载于我国古代著名医学专著《神
农本草经》,为我国常用中药材,具有祛风散寒、燥湿健脾、明目
的功效,主治湿困脾胃、倦怠嗜卧、呕吐泻泄、胸痞腹胀、食欲不
振、湿肿、痰饮表证夹湿、头身重痛、肢节酸痛重着、痹证湿胜、夜
盲证、痿蹩等[1 - 3]。茅苍术的主要活性成分[4]挥发油,还有倍
半萜和聚乙烯炔类活性成分,其中 β -桉叶醇为倍半萜成分的
代表。药理学研究[5 - 6]确定了苍术的功效,β -桉叶醇为有效
成分之一。β -桉叶醇对于治疗胃肠道的紊乱[7]、糖尿病[8]有
一定的作用,还具有较强的抗缺氧[9],保护肝脏[10 - 11]的能力;
采用 GC法[12 - 13],测定了不同产地苍术药材中 β -桉叶醇的含
量。本研究采用高效液相色谱法来分析不同产地茅苍术中 β -
桉叶醇的含量,旨在为茅苍术药材的品质评价提供依据。
1 材料
十万分之一分析天平(Sarforius BP 211D );高效液相色谱
仪 (DIONEX P680)。茅苍术(经湖北中医药大学药学院刘合
刚教授鉴定为菊科(Asteraceae)植物茅苍术 Atractylodes lancea
(Thunb.)DC.的干燥根茎)。β -桉叶醇对照品(日本和光纯
药株式会社,批号:056 - 05161);乙腈(Tedia 公司色谱级),其
他均为分析级。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
Agilent HC - C18 Analytical 色谱柱(4. 6mm × 250mm,
5μm),流动相乙腈 -水(58∶ 42 ),流速 1mL /min,检测波长 203
nm,柱温 30 ℃。进样量为 10μL[14]。
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湖北中医药大学学报
Journal of Hubei University of Chinese Medicine
2014 年 2 月第 16 卷第 1 期
February 2014,Vol. 16,No. 1
2. 2 对照品溶液的制备
精密称取 β -桉叶醇对照品适量(2. 08mg),置 2mL容量瓶
中,加适量甲醇超声使溶解,再加甲醇至刻度,摇匀,制成浓度为
1. 04mg /mL 的对照品母液,再精密吸取母液 1mL 至 5mL 容量
瓶中,加甲醇定容,得0. 2008mg /mL对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备
精密称定茅苍术药材粉末约 0. 2g,置于具塞锥形瓶中,用
移液管精密量取氯仿 25mL加入,超声提取 10min,放冷,再次称
重,加适量氯仿补足减失的重量,虑过,取续滤液 10mL 于蒸发
皿中,置于恒温水浴锅上挥干(55℃),残渣用甲醇溶解,转移至
10mL容量瓶中,再加甲醇定容至刻度,摇匀,进样前过 0. 45μm
微孔滤膜,即得。
2. 4 线性关系考察
精密量取适量对照品溶液 5 份,加甲醇定容,分别配成
0. 02008、0. 1004、0. 2008、0. 4016、1. 0400mg /mL,分别进样,进样
体积 10μL,按照 2. 1 项下色谱条件测定峰面积,以进样浓度为
横坐标,峰面积值为纵坐标,进行线性回归。结果表明 β -桉叶
醇的进样量在 0. 02008 - 1. 04mg 范围内,β -桉叶醇峰面积值
与进样量有良好的线性关系,回归方程为 Y = 198. 07X + 1.
8947,r = 0. 9999(n = 5)。
2. 5 精密度考察
精密吸取上述对照品溶液 10μL 注入到液相色谱仪中,重
复进样 5 次,测定峰面积,结果 RSD为 0. 58%,表明该法的精密
度良好。
2. 6 稳定性考察
分别于 0、2、4、8、24h 精密吸取供试品溶液进样,按照 2. 1
项下色谱条件,测定 β -桉叶醇峰面积值。供试品溶液于 24h
内色谱峰面积基本无变化,RSD为 0. 58%。结果表明在 24h 内
供试品溶液稳定。
2. 7 重复性考察
精密称取同一批样品 5 份,每份约 0. 2g,按 2. 3 项下方法制
备供试品溶液,按照 2. 1 项下色谱条件测定,计算 β -桉叶醇含
量,其 RSD为1. 16%,表明该测定方法重现性良好。
2. 8 加样回收率考察
分别精密称取已知含量的样品(29. 87mg /g)约0. 2g,精密
加入一定量 β -桉叶醇,然后按 2. 3 项下方法制备供试品溶液,
按照 2. 1 项下色谱条件测定,按照一点法外标计算其含量,再根
据公式计算回收率。测定其平均回收率为 98. 69%,RSD 为
1. 55%,见表 1。
表 1 加样回收率试验结果
编号 取样量(mg /g) 含量(mg) β -桉叶醇含量(mg) 对照品加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均值(%) RSD(%)
1 0. 2065 29. 87 6. 17 5. 11 11. 1314 97. 09
2 0. 2018 29. 87 6. 03 5. 13 11. 1239 99. 30
3 0. 1996 29. 87 5. 96 5. 22 11. 0193 96. 92
4 0. 1985 29. 87 5. 93 5. 27 11. 2268 100. 51 98. 69 1. 55
5 0. 2035 29. 87 6. 08 5. 24 11. 3275 100. 14
6 0. 1988 29. 87 5. 94 5. 26 11. 1065 98. 22
2. 9 样品含量测定
分别精密称取 13 个不同产地的茅苍术药材样品粉末各0. 2
g,按 2. 3 项下方法制备成供试品溶液,精密吸取各供试品溶液
和 β -桉叶醇对照品溶液各 10μL,测定其中 β - 桉叶醇的含
量,结果见表 2。β -桉叶醇对照品的 HPLC色谱图见图 1,茅苍
术药用植物供试品的 HPLC色谱图见图 2。
表 2 不同产地茅苍术药材 β-桉叶醇含量
编号 产地 β -桉叶醇含量(mg /g)
1 湖北英山草盘地镇 18. 37
2 湖北英山杨柳湾镇 13. 18
3 湖北英山陶家河乡 32. 97
4 湖北英山南河乡 23. 69
5 湖北蕲春横车镇 33. 35
6 湖北襄阳保康 29. 65
7 安徽霍山太平畈乡 19. 21
8 安徽岳西来榜镇 18. 73
9 安徽岳西莲花乡 13. 70
10 江苏句容天王镇 2. 74
11 江苏句容茅山 14. 55
12 河南信阳浉河区 24. 64
13 河南南阳桐柏县 9. 21
图 1 β-桉叶醇对照品的 HPLC色谱图
图 2 茅苍术供试品的 HPLC色谱图
3 讨论
本实验确定了茅苍术中 β -桉叶醇的含量测定方法,通过
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方法学考察验证该种方法稳定可靠,重现性好。并对 13 个不同
产地的茅苍术药材进行含量测定与分析,结果发现不同产地茅
苍术药材中 β -桉叶醇的含量差异较大,其中湖北蕲春横车镇
的茅苍术野生品含量最高,江苏句容天王镇所采样品含量最
低,究其原因可能是与生态环境变化有关。通过比较产地茅苍
术中 β -桉叶醇的含量,来综合评价茅苍术药材的品质,为制定
该药材的质量标准提供参考依据。
参考文献:
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2011,17(8):116 - 118.
(收稿日期:2013-10-28 编辑:林飞)
基金项目:国家自然科学基金项目(81072890)。
作者简介:陈佳丽(1986 -),女,辽宁中医药大学针灸推拿学院硕士研究生,研究方向:针刺机理研究。
通讯作者:陈以国(1957 -),女,辽宁中医药大学针灸推拿学院教授,研究方向:针灸学,E-mail:cyg05@ hotmail. com。
高效液相色谱法测定肺癌小鼠血浆
及各脏器中紫杉醇含量
陈佳丽,成泽东,李春日,张志星,张小卿,陈以国
(辽宁中医药大学针灸推拿学院,辽宁 沈阳 110032)
摘要:目的 建立测定肺癌小鼠血浆及各脏器组织中紫杉醇含量的 HPLC 法。方法 血浆及组织样品经萃取后,
以甲醇 -乙腈 -醋酸铵溶液( 47. 5∶ 32. 5 ∶ 20) 为流动相,使用 phenomenex C18 色谱柱( 250mm × 4. 6mm,5μm) 进行分
离,柱温为 30℃,UV检测波长为 230nm,内标物为多烯紫杉醇。结果 血浆中紫杉醇的线性范围为 0. 02606 - 2. 2606
μg /mL,肺中紫杉醇的线性范围为 1. 015 - 203. 00μg /g,脾肝肾中紫杉醇的线性范围为 0. 203 - 20. 3 μg /g,心脏中紫杉
醇的线性范围为 0. 203 - 10. 15 μg /g。提取回收率 > 90%,日内、日间变异系数 < 10%。结论 内标标准曲线法灵敏
度高、重复性好、操作简便、快速,可作为生物样品中紫杉醇浓度的测定及药代动力学研究的分析方法。
关键词:紫杉醇;高效液相色谱法;血浆;脏器;药物浓度
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A doi: 10. 3969 / j. issn. 1008 - 987x. 2014. 01. 15
Determination of Paclitaxel in Rats by HPLC with UV Detection
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